重庆地区柑桔衰退病毒多态性研究

柑桔衰退病毒(CTV)存在着复杂的株系分化现象.在使用弱毒株交叉保护防治柑桔衰退病时需要对田间病毒株系组成进行分析,并对选用的株系进行单蚜分离纯化.作者运用限制性片段长度多态性和单链构象多态性对田间获得的168个CTV样品和2个蚜传毒株的外壳蛋白基因进行分析,了解重庆市田间CTV组群构成情况,发现田间CTV以多株系混合发生为主,其中主要是CP/HinfⅠRFLP第1、3和6组群,约占总数的90%,并以强毒株混合感染为主.甜橙中CP/HinfⅠRFLP的组群构成最为复杂.单头褐色桔蚜从柚类至甜橙传播CTV的效率低(不足1%),该蚜的取食可改变CTV的株系组成.     

柑橘衰退病毒含量对其蚜传效率的影响

为明确毒源植株和蚜虫中柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)的发生情况与蚜虫传播CTV能力的关系,将褐色橘蚜、棉蚜、橘二叉蚜和绣线菊蚜置于分别感染了4个CTV分离株的锦橙上取食24 h后,运用巢式RT-PCR和实时RT-PCR检测蚜虫和锦橙的带毒情况,并分析蚜虫的传毒能力。结果显示,蚜虫中CTV的平均带毒率为0.76~0.84,其中棉蚜的最高,其次为绣线菊蚜、褐色橘蚜和橘二叉蚜。锦橙中各CTV分离株的含量差异不大,与蚜虫传毒效率间无显著相关性;也未发现蚜虫带毒率与其传播CTV能力之间存在相关性。蚜虫体内CTV的含量为5.36×103±2.33×103~2.01×106±3.67×105拷贝,褐色橘蚜中含量最高,其次为棉蚜、橘二叉蚜和绣线菊蚜;且高蚜传能力CTV分离株在褐色橘蚜体内的含量远高于低蚜传能力分离株。表明蚜虫体内CTV的含量可能与蚜虫传毒能力有关。     

4种柑橘衰退病毒源单蚜传毒分离株CP基因的分子特征

 对4种柑橘衰退病毒源及其31个单蚜传毒分离株的CP基因做了限制性片段长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(SSCP)分析,并对其中8个单蚜传毒分离株的CP基因进行了序列分析。实验明确了所研究柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)的CPG/Hinf I RFLP组群和CPG/SSCP模式,二者能较好地对应并有效验证了单蚜传毒对CTV毒源的分离纯化作用;CP基因序列分析结果表明,相同CPG/Hinf I RFLP组群的单蚜传毒分离株间具有高度的序列相似性,而不同CPG/Hinf I RFLP组群单蚜传毒分离株间则存在较大差异;通过与已知生物学特性CTV分离株比较,初步建立了上述CP基因分子特征与病毒生物学特性之间的联系。     

柑桔衰退病毒弱毒株及其筛选方法

不同研究方法揭示了柑桔衰退病毒存在着复杂的株系分化现象。本文用分子生物学技术与生物学鉴定相结 合的方法区别柑桔衰退病毒强弱毒株,利用其弱毒株交叉保护机理为筛选有保护作用的弱毒株提供了强有力的手 段。     

应用常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR检测柑桔衰退病毒

 根据柑桔衰退病毒(CTV)P20基因序列设计cquctv9/cquctv10特异引物对,以柑桔RNApolymeraseⅡ基因作为内参照,建立了柑桔衰退病的常规RT-PCR快速检测体系;依据柑桔衰退病毒P20基因序列设计cquctv1/cquctv2特异引物对和TaqMan探针cquctvp1,建立了柑桔衰退病荧光定量RT-PCR快速检测体系。常规RT-PCR检测下限是含有CTV的50pg总RNA,荧光定量RT-PCR法的检测下限是2fg纯CTV片段。荧光定量RT-PCR的灵敏度相对比常规RT-PCR高100倍。利用常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR体系对从2005年3月到2006年7月采自田间的样品进行检测,结果表明,2种检测体系都有很好的特异性和准确性;对183个田间柑桔苗木样品带毒率检测结果表明,荧光定量RT-PCR检出率为(82.5%),比常规RT-PCR检出率(73.2%)高。     

引起重庆主栽柑桔品种衰退病的病毒株系组群分析

 柑桔衰退病毒(CTV)存在着许多生物学特性不同的株系。通过铲除感染强毒株植株或利用弱毒株交叉保护的方式来防治柑桔衰退病都需要对CTV株系进行准确、可靠的鉴定。本文根据对CTV衣壳蛋白基因(CPG)的限制性片段长度多态性(RFLP)分析,发现在重庆主栽柑桔品种的衰退病毒主要以CP/Hinf I RFLP第1、3和6组群为主,并且在田间以多株系混合感染为主。     

枸头橙种子中柑桔衰退-茎陷点病毒的鉴定

 采用双抗体夹心-酶联免疫吸附测定试验(DAS-ELISA)对枸头橙种子中柑桔衰退-茎陷点病毒的带毒情况进行了鉴定。结果表明,从严重感染茎陷点病的枸头橙罹病树采集的种子可检测到柑桔衰退病毒(CTV)。种子带毒量以内种皮为较高,剥皮种子次之,外种皮呈阴性。种子在4℃冰箱内贮藏1~2年后仍带毒,但带毒量有所下降。对带毒种子繁殖的实生苗及嫁接在实生苗上的墨西哥来檬的检测结果,有部分呈阳性,种植在防虫隔离网室内的100余株2年生枸头橙实生苗,用无毒珠心系的墨西哥来檬芽嫁接进行生物鉴定,经2年观察未发现症状     

瓜蚜在西葫芦植株上传播获取西瓜花叶病毒的效率及西瓜花叶病毒病的发生规律

为明确瓜蚜Aphis gossypii Glover成蚜对西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)的传毒特征,应用RT-PCR技术检测了瓜蚜传播获取WMV的效率及其在成蚜体内的存留时间;同时调查了2015年山东省日光温室西葫芦瓜蚜种群动态与西瓜花叶病毒病的发生规律。结果表明,瓜蚜成蚜离开带毒西葫芦植株0 h后,带毒率为35.00%,3 h后成蚜带毒率随时间的延长开始呈下降趋势,24 h后仅为5.40%。26℃条件下,健康瓜蚜取食带毒植株5 min后即可获毒,0.5 h后获毒率达到62.50%;带毒瓜蚜取食健康植株0.5 h后植株即可带毒,24 h后植株带毒率达到94.44%。温度对瓜蚜成蚜的传毒率有一定影响,在21、26、31℃条件下,瓜蚜成蚜24 h传毒率分别为61.11%、94.44%和88.89%。调查发现,温室西瓜花叶病毒病的发生率与瓜蚜种群数量呈正相关,当温室瓜蚜成蚜种群数量为1.06～1.73头/叶时,西葫芦开始发病,当成蚜数量增至18.22头/叶时,全田发病率可达83.33%。表明瓜蚜成蚜具有较强的传播WMV的能力,有效控制瓜蚜发生对减少WMV的扩散具有重要意义。     

6种柑橘类植物对柑橘衰退病毒分离株TR-L514变异的影响

 柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)存在复杂的株系分化现象,运用弱毒株交叉保护防治柑橘衰退病时需了解不同类型柑橘对CTV构成的影响。作者将CTV分离株TR-L514嫁接接种到6类柑橘植物上获得了18个亚分离株,并对这18个亚分离株和TR-L514进行了指示植物鉴定,p25基因的限制性片段长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(SSCP)分析,p23基因的序列比较。结果表明,CTV株系对不同柑橘类植株的适应性存在差异。TR-L514嫁接到不同柑橘类植株其构成会发生变化,在甜橙上可以同时检测出p25//HinfⅠ RFLP第1和6组群,并具有比在其它4类柑橘上更为复杂的SSCP谱型构成,因此甜橙可能更适宜于CTV的增殖。TR-L514及18个亚分离株的p23基因序列差异可能与不同类柑橘植株的适应性有关。     

环境因素对丽蚜小蜂寄生和刺吸寄主数量的影响

丽蚜小蜂在27℃恒湿条件下(相对湿度75％,光照16小时、强度7000勒克斯),平均寿命为19天。成虫一生可杀死粉虱197头,其中被产卵寄生的占74.4％,刺吸致死的占25.6％。温度降低,寄生及刺吸活动减少。45—90％之间的相对湿度对寄生寄主的数量没有明显影响,但30％相对湿度影响显著。湿度明显影响刺吸寄主的数量,湿度越低,刺吸寄主数量越多,说明刺吸可能与补充水分有关。在45—75％的相对湿度中,寄生和刺吸活动最活跃,因此杀死粉虱最多。光照虽然对寄生和刺吸均有一定影响,但在黑暗中丽蚜小蜂一生仍能致死144.6头粉虱,其中寄生108.7头。作者认为北京一般的温室虽然温度变动较大,湿度和光照也未人工控制,但能满足丽蚜小蜂活动所需的条件。     

湖南柑橘衰退病调查分析及弱毒系筛选

 The investigation showed that stem-pitting Citrus tristeza virus (CTV)occurred commonly in citrus production areas in several varieties of Hunan Province. Accurate detection of CTV strains was performed by p23/PCR method, PCR and the results indicated that the most samples were infected with several CTV isolates. Three mild strains were isolated and their pathogenicity was identified by biological identification, it indicated that p23/PCR groups had uniformity with the pathogenicity of CTV isolates. Furthermore, three mild isolates were tested in the cross protection by analysis of biological symptoms and composition of p23 gene. Different protecting effects were observed among these strains and W17 mild isolate was effective.     

CTV强弱毒株促进褐色橘蚜的取食

正由柑橘衰退病病毒(Citrus tristeza virus,CTV)引起的柑橘衰退病,对全世界柑橘产业造成了严重威胁。褐色橘蚜Toxoptera citricida(Kirkaldy)属半翅目蚜科,以非循回型半持久方式传播CTV,是CTV的最有效传播媒介~([1])。我国广泛分布着CTV的各种株系和传媒褐色橘蚜,对我     

Engineering of a Single Chain Variable Fragment Antibody Specific for the Citrus tristeza virus and its Expression in Escherichia coli and Nicotiana tabacum

Citrus tristeza virus (CTV) is one of the most destructive citrus virus diseases in the world. The construction of an engineered antibody, EMBL accession number AJ278109, able to specifically recognize its antigen, i.e. the coat protein of CTV, directly on infected plant material without any purification or manipulation of the entire woody plant. The potential uses of this engineered antibody are discussed.     

Biochemical and physiological responses to long‐term Citrus tristeza virus infection in Mexican lime plants

Reactions that occur when a plant is subjected to Citrus tristeza virus (CTV) infection often result in triggering of numerous defence mechanisms to fight the infection. The reactions vary according to virus strain, host genotype, time of exposure to the infection and environmental conditions. To date, no study has examined in detail the consequences of 10‐year exposure to CTV infection on the biochemical and physiological status of susceptible Mexican lime plants (Citrus aurantifolia). To understand the reaction of such plants, changes in nutrient status, total proteins, enzyme activity involved in scavenging of reactive oxygen species, photosynthetic and transpiration rates, chlorophyll content, membrane permeability and water content were analysed in plants infected with different CTV isolates and in healthy plants. The activity of superoxide dismutase and polyphenol oxidase significantly decreased in the infected leaves, and membrane permeability was lower in the infected plants. Macro‐ and micronutrient elements were significantly changed: concentrations of leaf nitrogen, zinc, magnesium and iron were elevated but potassium concentration depressed in comparison to noninfected control leaves. Levels of other analysed nutrient elements, enzymes, photosynthesis and stomatal conductance, chlorophyll content and relative water content were unchanged. Clear physiological changes were found among infected and noninfected control plants but none between plants infected with different CTV isolates. The data suggest that some of the defence mechanisms investigated here were suppressed due to the continuous and long‐term pressure of biotic stress.     

不同来源的柑橘衰退病毒分离物基因组5'端A、F变异区序列克隆及分析

 柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)组群自然条件下存在株系分化现象。本研究利用RT-PCR技术扩增、克隆了来自我国不同地区的21个柑橘衰退病毒分离物的5'端A、F变异区。通过分析发现,不同来源的各分离物在5'端A、F区存在较大的变异。21个分离物A区序列相似性最低为85.8%,最高可达99.8%,平均为95.9%;与GenBank中9个代表性株系的平均相似性为84.2%。F区序列相似性较A区高,为98.0%;相似性最低为94.3%,最高达99.1%。结果显示不同来源的CTV分离物5'端序列A、F区变异较大。     

柑橘三种蚜虫取食行为的EPG分析

为探究柑橘3种蚜虫取食行为差异,利用刺吸电位图谱(electrical penetration graph,EPG)技术对褐色橘蚜Toxoptera citricida(Kirkaldy)、棉蚜Aphis gossypii Glover和绣线橘蚜Aphis citricola van der Goot在椪柑上的取食行为进行了测定。结果表明:3种蚜虫均产生8种取食波形,依次为非刺探波(np波)、路径波(A、B、C波)、电位下降波(pd波)、韧皮部分泌唾液波(El波)、韧皮部被动吸食波(E2波)以及木质部主动吸食波(G波)。棉蚜开始取食的第1次刺探时间最早,绣线橘蚜刺探的次数最多,且C波时间最长。褐色橘蚜pd波出现的次数最少,棉蚜次之,绣线橘蚜最多,显著高于褐色橘蚜。与其它2种蚜虫相比,绣线橘蚜于木质部主动吸食汁液(G波)时间最长,有G波的个体比例最高。3种蚜虫E1波次数和总持续时间差异均不显著,但褐色橘蚜E2波的持续时间217.01±27.56 min显著长于棉蚜142.49±27.85 min和绣线橘蚜116.64±20.05 min。初步推断3种蚜虫对柑橘衰退病毒的传毒效率与E2波有关。