枸橼C-05抗柑橘溃疡病相关PRR基因LYK5的初步鉴定

为筛选出抗溃疡病病菌相关PRR(Pattern Recognition Receptors)基因,本研究以接种了溃疡病菌Xcc的抗病种质枸橼C-05(JY C-05)和感病种质冰糖橙(BTC)、酸橙(SC)及早蜜椪柑(ZM)为研究对象,利用荧光定量PCR分析PRR基因的表达,结果显示PRR基因中的LYK5(LYSIN MOTIF-CONTAINING RECEPTOR-LIKE KINASE5)基因在枸橼C-05中表达上调而在其它感病种质中表达下调,表明LYK5基因可能与枸橼C-05抗溃疡病相关;对枸橼C-05和感病种质LYK5核酸序列及氨基酸序列进行差异分析,发现枸橼C-05 LYK5基因与冰糖橙、来檬(LM)有差异,但是与大香橼(DXY)和爪哇柠檬(ZWNM)LYK5基因相似度为100%,说明基因结构差异不是枸橼C-05的LYK5基因参与抗溃疡病的原因;进一步对其蛋白关键结构域进行比较分析,显示LYK5蛋白质信号肽第16位氨基酸、LysM基序区域(第203号氨基酸,第209号氨基酸)和蛋白激酶结构域(第394位,第449位,第468位,第492位,第647位氨基酸)存在差异;同时,对其三级结构进行比对发现枸橼C-05 LYK5蛋白结构与感病种质冰糖橙、来檬、爪哇柠檬和大香橼并无差异,进一步表明LYK5基因参与枸橼C-05抗溃疡病的过程不是由其蛋白结构差异所致。分析枸橼C-05和其他柑橘种质的LYK5启动子,大多数元件的差异不能区分抗病和感病柑橘种质,只有枸橼C-05缺失激活分生组织特异性调控元件,其他柑橘种质均有该元件,这是不是LYK5在接种Xcc的不同柑橘中表达差异的原因还有待进一步探究。     

柠檬合子胚自交实生苗的鉴定及其对柑橘溃疡病的抗性初步评价

枸橼C-05是抗溃疡病的柑橘种质资源,柠檬是枸橼的后代,其自交后代可能继承枸橼的抗性基因。为分析柠檬自交群体对柑橘溃疡病的抗感性规律,本研究建立了433株的‘尤力克’柠檬自交后代群体,并利用SSR分子标记对合子胚实生苗进行了鉴定,观察合子胚实生苗和珠心胚实生苗叶片形态学的差异,对所有自交后代离体注射接种柑橘溃疡病菌,初步评价了实生后代对柑橘溃疡病的抗病性差异。结果表明‘尤力克’柠檬存在多胚性,从300对SSR引物中筛选到8对可用于‘尤力克’柠檬合子胚鉴定的引物,共鉴定出合子胚实生苗57株,确定珠心胚实生苗4株。叶形指数、叶尖指数、翼叶长、翼叶宽和叶柄长均不能作为区分‘尤力克’柠檬合子胚实生苗与珠心胚实生苗的形态学标记,但合子胚实生苗的翼叶长度变异幅度大于珠心胚。57株合子胚实生苗离体接种柑橘溃疡病菌后,5株表现为抗病,52株表现为感病;4株珠心胚实生苗均表现为感病;在372株未鉴定清楚的自交后代中,8株表现为抗病,364株表现为感病。本研究表明利用SSR分子标记还不能完全鉴定出‘尤力克’柠檬合子胚植株,可能需要更多的引物或更灵敏的分子标记才能把全部实生后代鉴定出来。利用合子胚自交后代接种鉴定,更有利于分析‘尤力克’柠檬对柑橘溃疡病的抗感性遗传规律,挖掘抗性基因,为柠檬的抗病育种提供种质资源。     

张家界部分杂柚品种基于SRAP分子标记的亲缘关系分析

采用SRAP分子标记技术对包含张家界地区4个杂柚品种在内的9个柑橘品种进行遗传多样性及亲缘关系分析。结果表明:45对引物共扩增得到467个条带,其中多态性条带354个,多态性百分率为75.8%,因此SRAP可以作为柚类资源亲缘关系研究的有效标记。在遗传相似系数0.623 1处,供试材料可区分为两大组,第一组为沙田柚、慈利香柚、菊花芯柚、慈利金香柚,第二组包括慈利菠萝香柚、大分4号、慈利水柚子、大红甜橙、兴山酸橙。聚类结果表明4个柚类杂种中,慈利香柚和慈利金香柚与沙田柚及菊花芯柚的亲缘关系较近,而与大红甜橙、兴山酸橙及大分4号的亲缘关系则相距较远;而慈利菠萝香柚和慈利水柚子则刚好相反,它们更偏向于大红甜橙、兴山酸橙及大分4号,而与张家界主栽的两个柚类品种的亲缘关系则较远。     

基于SRAP分子标记的11份柑橘种质材料遗传多样性分析

为分析11份柑橘种质材料的遗传多样性,本研究以7份沙糖橘种质以及4份其他柑橘种质为试验材料,利用SRAP分子标记进行分析,并用UPGMA法进行聚类.结果表明:160对引物组合筛选出20对引物组合扩增条带清晰,11份种质材料两两之间遗传相似系数在0.322 1～0.931 6之间.沙糖橘和金葵蜜橘间的遗传相似系数最大,为...     

SRAP和SSR标记对马铃薯遗传多样性的差异分析

掌握宁夏地区主要马铃薯品种的遗传多样性,了解其遗传背景,明确各品种间的亲缘关系为马铃薯育种提供理论依据。利用SSR和SRAP 2种分子标记对47份马铃薯种质材料进行遗传多样性分析,并对2种分子标记结果进行比较。12对多态性SRAP标记共检测到180个多态性位点,平均每对引物检测到15个多态性位点,每个SRAP位点的PIC值为0.2~0.43,平均值为0.34;47份马铃薯种质资源遗传相似性系数为0.57~0.83。15对多态性SSR标记检测到80条多态性位点,平均每对引物检测到 5.3个多态性位点,每个SSR位点的PIC值为0.37~0.72,平均值为0.51;马铃薯种质材料遗传相似性系数为0.60~0.97。根据系谱资料分析发现,SRAP标记更适用于遗传关系较近材料的遗传多样性分析。宁夏地区主要的马铃薯品种遗传相似度较低,亲缘关系较远。     

SRAP和CDDP标记在巴戟天遗传多样性分析中的应用

分析肇庆地区主要的巴戟天种质资源,明确各个品种之间的亲缘关系,为巴戟天的培育、保护与鉴别提供科学依据。本研究应用SRAP和CDDP分子标记技术对肇庆9份巴戟天材料进行遗传多样性分析,运用NTSYS-pc 2.1软件计算样品间的遗传相似系数,按照UPGMA方法进行聚类分析,并对两种分子标记结果进行比较与分析。28对SRAP引物组合和16条CDDP引物分别扩增得到140条和83条条带,其中多态性条带数分别为68条和63条,多态性比率(PPB)各为48.6%和75.9%,遗传相似系数变化范围各为0.69～0.96和0.53～0.95,平均遗传相似系数各为0.83和0.69。SRAP在遗传相似系数为0.86时与CDDP在遗传相似系数为0.71时均将广宁特型、广宁特嫁接型、本地大叶型、本地小叶型4个品种聚为一类。SRAP和CDDP两种分子标记均可用于巴戟天的遗传多样性分析,但两种分子标记的聚类结果有一定的差异,所以两种标记联合分析能够更加准确地揭示巴戟天种质之间的亲缘关系。且CDDP的聚类结果与两种标记联合分析的结果更吻合,说明CDDP比SRAP更适用于巴戟天遗传多样性分析。     

花椰菜种质资源遗传多样性SRAP标记分析

为了从分子水平上揭示花椰菜种质资源间的亲缘关系,为其种质搜集、鉴定、利用和遗传改良提供一定的理论基础。本研究采用SRAP分子标记技术对24份花椰菜种质资源进行遗传多样性研究。从30个引物组合中筛选得到23对多态性引物组合,共检测到257条扩增条带,平均每对引物扩增等位基因数从5到20不等。其中多态性片段为185条,多态性比例为71.98%,表明花椰菜种质间具有相对丰富的遗传多样性。相似系数分析表明种质间遗传相似系数为0.5491~0.9626,平均为0.7490。SRAP分子标记聚类分析结果显示来源和地域可作为花椰菜种质聚类的农性状之一。     

澳洲坚果种质资源的SRAP分析及指纹图谱构建

为了分析澳洲坚果种质资源的遗传多样性及其亲缘关系,加速澳洲坚果种质的遗传改良和新品种选育,本研究以45份澳洲坚果为材料,利用相关序列扩增多态性(sequence-related amplified polymorphism,SRAP)分子标记对其基因组扩增并进行遗传多样性分析。结果表明24对引物组合中能筛选出多态性较好的引物10对,利用这10对引物在45份澳洲坚果中共扩增出63条谱带,其中多态性条带47条,多态性比率74.60%。45份澳洲坚果种质资源的遗传相似系数范围为0.5873?0.9683,均值0.7778。UPGMA聚类分析表明:在遗传相似系数为0.785处可将45份澳洲坚果种质资源划分为6个类群,其中,‘黔澳1号’和‘黔澳3号’之间的遗传相似系数最大,高达0.9683,说明这两种坚果资源遗传背景相似,‘兴澳1号’和‘黔引36’号间的遗传相似系数最小,仅为0.5873,说明二者亲缘关系较远。本研究表明了SRAP技术适用于澳洲坚果种质资源的遗传多样性分析且45份澳洲坚果间的遗传变异较为丰富,为澳洲坚果种质资源的挖掘、遗传改良和进一步的分子辅助育种提供了科学依据。     

蓝莓品种的SRAP遗传多样性分析及品种鉴别

采用15对SRAP引物对21个蓝莓栽培品种进行遗传多样性及亲缘关系分析。21个品种共获得207条带,其中多态性条带172条,多态性比率83.1%。21个品种的平均等位基因数为1.82,有效等位基因数为1.47,Nei's基因多样性指数为0.27,Shannon's平均信息指数为0.41。UPGMA聚类分析表明,21个品种间的遗传相似系数范围为0.56~0.88,在相似系数为0.7时,可划分为4大类群,聚类结果与已知蓝莓杂交系谱相吻合。一个"莱格西"品种特异的SRAP标记被转化为SCAR标记,可用于该品种与其余20个品种的鉴别。研究结果表明,供试蓝莓栽培品种间具有一定程度的遗传多样性,SRAP技术可用于蓝莓品种鉴别及种质亲缘关系分析。     

无核葡萄种质亲缘关系的SRAP研究

为充分了解及更合理地利用无核葡萄的种质资源,辅助无核葡萄育种,本研究采用SRAP分子标记技术,对23 个国内外主流无核葡萄品种的种质亲缘关系进行分析。结果表明：从45 对SRAP引物中筛选出38 对多态性引物,共扩增出236 条谱带,其中171 条为多态性谱带,多态性谱带百分率为72.4%。遗传相似分析显示,供试材料间遗传相似系数的变化范围为0.58~0.90,遗传距离在1.0313~4.9643 范围内变化。在遗传相似系数为0.61 处,可将供试材料分为2 个大类群,在相似系数为0.66 处,Ⅰ类群和Ⅱ类群均可分为2个亚群。说明23个品种总体来讲亲缘关系较远,特别欧美杂种具有较高的遗传多样性,部分欧亚种品种间亲缘关系较近,杂交育种时应注意亲本选择。     

基于SSR和SRAP标记的苦瓜品种鉴定及亲缘关系分析

本研究应用SSR和SRAP 2种标记对11个苦瓜品种进行鉴定和亲缘关系分析。结果发现,应用筛选的8对SSR引物共扩增条带860条,多态性条带占68.0%,10对SRAP引物共扩增条带961条,多态性条带占79.4%。SSR标记检测到品种间遗传相似系数介于0.344~0.779,平均值为0.652;SRAP标记检测到品种间遗传相似系数介于0.373~0.700,平均值为0.625。聚类分结果发现,在遗传相似系数为0.54和0.52时,SSR和SRAP 2种标记都可以将11个品种分为相同的两组。每对SSR和SRAP引物能平均区分3.1和3.7个品种。最少用3对SSR引物或3对SRAP引物组合就可成功区分11个苦瓜品种。研究结果表明,SSR和SRAP标记均可高效地被用于苦瓜的品种鉴定和亲缘关系分析。     

广西野生桃金娘亲缘关系的SRAP分析

为弄清广西桃金娘资源的亲缘关系并发掘其优异种性,进行驯化或为将来选育种提供优异亲本材料。本研究采用SRAP技术对8份野生桃金娘种质进行亲缘关系分析,从99对SRAP引物中筛选出18对多态性好、分辨率高的引物。结果显示,18对引物共获得142条带,其中多态性位点107个,多态条带比率为75.35%,表明不同桃金娘种质基因型间存在着较丰富的遗传多样性;8份桃金娘种质的相似系数在0.6800~0.7950之间。在相似系数0.7203处可将8份种质分为3大类群:类群1包括岑溪、昭平、容县;类群2包括北海、龙州小连城、桂林;类群3包括龙州大青山和龙州彬桥。试验材料中亲缘关系最近的是龙州大青山与龙州彬桥,亲缘关系最远的是桂林与岑溪。研究表明,SRAP分子标记可有效地应用于桃金娘种质亲缘关系研究,结果可为桃金娘种质的资源保存鉴定、亲本选配和遗传改良提供理论依据。     

青蒿种质资源遗传多样性的SRAP分析

以45份青蒿种质为试材,将分子标记SRAP(sequence-related amplified polymorphism)应用于青蒿种质资源的遗传多样性研究.利用TREECONW软件分析遗传相似系数,UPGMA方法聚类,构建亲缘关系系统图.结果表明:30对引物组合共得到382条扩增条带,其中有312条呈现多态性,占81.7%,从DNA分子水平显示出供试种质遗传多样性较为丰富.遗传相似系数变化范围0.683 6～0.857 1.聚类分析表明,青蒿种质亲缘关系与来源地无明显相关性,仅在小分支中表现出一定的地域相关性.     

金柑种质的特异性SSR标记筛选及亲缘关系分析

为筛选金柑属植物的特异性SSR标记，解决金柑属植物的同物异名或同名异物问题。本研究选取金柑及其近缘属种质38份，通过23对引物扩增得到265有效性条带，多态性条带250条，多态性比率为92.99%，扩增得到的片段在100～1 200 bp之间不等；SSR标记筛选得到47个特异性标记，不同种质之间的特异标记数量差别较大，最多的公孙桔达到7个特异性标记，柑橘属及枳属种质均可被标记，而无特异性标记的11份种质均为金柑属；聚类分析发现，金柑属与柑橘属、枳属的遗传相似系数均在0.70以上，这表明金柑属与枳属、柑橘属均有很近的亲缘关系。在相似系数为0.902处，未找到特异性标记的11份金柑属种质聚在一起，这也表明金柑属各品种亲缘关系及近，存在同物异名或同名异物。     

豇豆种质资源遗传多样性和亲缘关系的SRAP和SSR分析

为从分子水平上揭示豇豆种质资源间的亲缘关系,为其种质资源搜集、鉴定、利用和遗传改良提供一定的理论基础,利用SRAP和SSR分子标记对41 份来自中国和马来西亚的豇豆种质资源进行遗传多样性研究。从65 对SRAP引物和10 对SSR引物中分别筛选获得稳定清晰且多态性强的31 对SRAP引物和5 对SSR引物,对41 份栽培豇豆资源的DNA进行SRAP-PCR和SSR-PCR扩增。2 种PCR扩增共获230 条扩增条带,其中SRAP检测到196 条扩增条带,平均每对引物扩增等位基因数为6.3 条,多态性 片段为161 条,多态性比例为82.14%;SSR检测到34 条带,平均每对引物扩增等位基因数6.8 条,多肽性片段为25 条,多态性比例为73.53%,表明本研究搜集的豇豆种质间的遗传多样性比较丰富。基于SRAP 和SSR 标记的结果,利用UPGMA 构建了41 份豇豆资源的聚类树状图,其遗传相似系数为0.1667~0.9516,大多在0.674 以上。结果表明,SRAP和SSR分子标记能有效地将41 份豇豆资源分开,且部分种质间的遗传距离较远,这为豇豆资源的开发利用及新品种的选育提供科学依据。     

黄瓜种质资源形态学标记和SRAP标记的遗传多样性分析

旨在探索黄瓜种质资源的遗传多样性,为今后黄瓜选育优良品种提供可靠依据。以48份黄瓜种质资源为材料,用DPS软件对各品种的13个表型性状进行聚类分析,同时利用SRAP分子标记对其进行遗传多样性研究。结果表明:根据果实性状等形态学标记聚类分析得出,在阈值75.0处,可以将48份黄瓜种质资源分成5大类群。利用UPGMA法对SRAP分子标记结果聚类分析发现,黄瓜种质间的遗传相似系数在0.52~0.93之间,在遗传相似系数为0.64处,可以将其分成5大类群,形态学标记和SRAP分子标记的聚类结果存在较大差异。由此可见,SRAP分子标记较形态学标记能更好地分析品种间亲缘关系的远近,对黄瓜遗传多样性研究更具指导意义。     

豇豆种质资源遗传多样性和亲缘关系的SRAP和SSR分析

为从分子水平上揭示豇豆种质资源间的亲缘关系,为其种质资源搜集、鉴定、利用和遗传改良提供一定的理论基础,利用SRAP和SSR分子标记对41份来自中国和马来西亚的豇豆种质资源进行遗传多样性研究。从65对SRAP引物和10对SSR引物中分别筛选获得稳定清晰且多态性强的31对SRAP引物和5对SSR引物,对41份栽培豇豆资源的DNA进行SRAP-PCR和SSR-PCR扩增。2种PCR扩增共获230条扩增条带,其中SRAP检测到196条扩增条带,平均每对引物扩增等位基因数为6.3条,多态性片段为161条,多态性比例为82.14%;SSR检测到34条带,平均每对引物扩增等位基因数6.8条,多肽性片段为25条,多态性比例为73.53%,表明本研究搜集的豇豆种质间的遗传多样性比较丰富。基于SRAP和SSR标记的结果,利用UPGMA构建了41份豇豆资源的聚类树状图,其遗传相似系数为0.1667~0.9516,大多在0.674以上。结果表明,SRAP和SSR分子标记能有效地将41份豇豆资源分开,且部分种质间的遗传距离较远,这为豇豆资源的开发利用及新品种的选育提供科学依据。

     

基于SRAP分子标记分析彩色马铃薯品种间遗传关系

采用SRAP标记对收集的24份彩色马铃薯种质资源遗传多样性进行分析,探讨其遗传多样性及种质间亲缘关系,以期为彩色马铃薯种质资源高效利用及新品种选育奠定基础。结果表明,14对SRAP多态性引物共检测到74个多态性位点,多态性信息量(PIC)均值为0.87,有效等位基因数(Ne)均值为1.61,Nei’s遗传多样度(H)均值为0.36,Shannon信息指数(I)均值为0.54。24份彩色马铃薯种质间遗传相似系数介于0.45～0.78之间,均值为0.61,表明供试海雀稗种质间存在较大遗传差异。聚类分析显示,当GS=0.61时24份彩色马铃薯种质被划分为四大类群。主成分分析发现,Ⅲ、Ⅳ类群间有重叠现象,说明它们之间亲缘关系较近。24份彩色马铃薯种质具有较丰富的遗传多样性,可通过进一步研究应用于新品种选育。     

苏子种质资源的遗传多样性分析

为明确苏子种质资源亲缘关系,本研究以收集的44份苏子种质资源为材料,采用SSR、AFLP和SRAP分子标记对其进行遗传多样性和聚类分析。结果表明,SSR、SRAP和AFLP引物的平均多态性分别为63.6%、85.2%和92.6%,44份种质间的遗传相似系数为0.717～0.967 (平均为0.864);在遗传相似系数0.762处,44份苏子材料可分为2大类,黄陵苏子和玉泉苏子聚为第Ⅰ类,其余42份材料聚为第Ⅱ类;在相似系数0.84处,可将第二类分为4个亚类。从主成分分析二维图结果来看,44份材料分成5个组,黄陵苏子和玉泉苏子为一组,与其它几组距离较远。本研究结果说明这些苏子种质之间遗传多样性较低,但部分材料间存在较大遗传差异,其中黄陵苏子和玉泉苏子与其他42份材料亲缘关系较远。本研究综合采用了3种标记进行苏子遗传多样性的评价,可为优异种质的创新利用提供理论参考,也为后续大规模的评价鉴定提供依据。     

应用RSAP、SRAP和SSR分析苎麻种质亲缘关系

分别采用RSAP、SRAP和SSR 3种分子标记和田间性状对16份苎麻种质进行亲缘关系聚类,结果表明, 每对引物扩增出的多态性位点,SRAP标记最多,RSAP次之,SSR较少;根据SRAP标记和RSAP标记分类的结果都与RSAP+SRAP+SSR联合分类的结果基本一致,相关达到了极显著水平,而与SSR标记分类结果差异较大;分子标记聚类结果与田间性状的聚类结果接近程度, 依次为SRAP+RSAP+SSR>SRAP>RSAP>>SSR。在检测苎麻种质亲缘关系中,SRAP标记效果最优,RSAP标记稍逊,SSR标记最差。RSAP标记能较好地显示苎麻种属间的多态性和亲缘关系。以RSAP、SRAP、SSR标记联合分析,能更好地揭示种质之间的亲缘关系。