家蚕幼虫关联基因在胚胎期的表达（英文）

    用蛋白质表达谱分析技术研究家蚕胚胎发育时期的基因表达.用蛋白质双向电泳技术(2-DE)分离蛋白质,用ImageMaster Elite图谱分析软件比较分析12个家蚕胚胎发育特异时期的2-DE图谱,发现一些蛋白斑点丰度高,并且一旦出现就在后续特异时期一直表达,推测这些蛋白可能在胚胎发育和代谢方面起重要作用,从中选择5个点分析它们的序列和功能.用基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI-TOF-MS)和数据库检索鉴定蛋白质,发现5个幼虫期功能蛋白分别在4个胚胎发育特异时期表达:保幼激素结合蛋白(JHBP)基因在缩短期表达,表皮生长因子受体在头胸分化期表达,家蚕幼虫表皮蛋白和副腺特异肽在毛瘤发生期表达,淀粉酶在转青期表达.这些幼虫功能蛋白都在胚胎特定的生理期功能需要下出现,表明幼虫关联基因在胚胎期有序而及时地表达.     

PEG分级法检测绿竹叶片双向电泳中的低丰度蛋白

蛋白质组学研究的关键问题之一是双向电泳(2-DE)中低丰度蛋白的分析,主要是因为相关高丰度蛋白的存在,导致IPG胶条无法吸胀低丰度蛋白,使得低丰度蛋白在2-DE中很难被检测出来。利用梯度浓度的PEG4000沉淀方法来富集绿竹叶片中不同丰度的蛋白质,从而使得低丰度蛋白在凝胶中显现出来。在PEG分级法和传统的全蛋白提取法的2-DE比较中,发现采用PEG分级沉淀法提取的蛋白质的数量以及类别明显增加,高丰度蛋白主要富集在8%和16%的PEG浓度组分中,使得其他组分中的低丰度蛋白与高丰度蛋白组分分别进行2-DE分析。经过对图像和数据的比较、分析,PEG分级法得到的5个组分蛋白点总数超过了1032个,大约是传统蛋白提取方法制备蛋白样品的3倍。     

两种花吊丝竹叶片蛋白提取方法的2-DE比较

以2年生花吊丝竹的扦插苗为研究材料,对2种方法(TCA/酚提结合法和PEG法)提取的蛋白质的2-DE差异进行研究.结果表明:PEG法的5个组分的条带差异明显,全蛋白得到了有效分离,在F3中富集到了2条高丰度蛋白带;2种方法的2-DE图谱的均一性分析发现,PEG法中F3富集了高丰度蛋白,提高了2-DE中蛋白质的检测率和分辨率,PEG法中F1-F5共检测的蛋白总数超过了1700个,但是相邻组存在一定的重叠率,而TCA丙酮/酚提结合法只检测到约571个蛋白点,5个组与NF平均有439个蛋白点匹配,达到77.9%以上;质谱鉴定了5种差异蛋白,生物信息学分析发现这5种蛋白是糖酵解、糖异生和ATP合成的重要辅酶.2种方法的比较发现,PEG法能够将花吊丝竹叶片全蛋白中高丰度蛋白单一富集在16%的组分中,从而显著提高了2-DE的分辨率,再通过质谱技术能够检测到更多的影响生物体生长发育的低丰度蛋白,所以PEG法是一种切实可行的且较为理想的蛋白质提取方法.     

紫花苜蓿根响应盐胁迫的比较蛋白质组学分析

6 d龄紫花苜蓿(Medicago sativa L.)幼苗在0、200 mmol/L Na Cl处理9 d后,采用双向电泳分别分离了其根部蛋白组。最终每块胶中有超过900个蛋白质点被分离,采用MALDI-TOF-TOF/MS质谱技术结合MASCOT软件在线检索,成功鉴定21个表达量发生1.5倍以上变化的蛋白质点,为19种不同的蛋白质。生物信息学分析表明,这些差异表达蛋白质主要参与胁迫防御、碳水化合物和能量代谢、次生代谢、转录和翻译调控、信号传导和离子转运等调控途径。     

孵化期间鸡胚蛋内蛋白质转移的研究

对不同日龄的广西黄鸡胚蛋的卵白、卵黄,胚胎中粗蛋白,尿囊液中的尿素氮含量进行了测定,结果表明,这些指标呈一定规律性变化:前期卵黄、卵白中蛋白质含量稳定,卵白中蛋白质在孵化的第9和12天胚龄含量较高,之后极显著下降。卵黄中的粗蛋白质含量呈逐渐增加的趋势。胚胎中的粗蛋白含量从9～12d胚龄显著降低;尿囊液中尿素氮的含量在12～21d胚龄迅速增加,21d胚龄达到最高水平。说明蛋白在中期转移最多,后期利用率较低。     

丽蝇蛹集金小蜂卵黄原蛋白合成与摄取及卵黄磷蛋白降解的时间动态

采用ELISA测定法检测了蝇类蛹期外寄生蜂-丽蝇蛹集金小蜂卵黄原蛋白合成与摄取,及卵黄磷蛋白降解的时间动态.结果表明:该蜂卵黄原蛋白的合成与摄取分别起始于寄生后的第10 d和第13 d,即正处于该蜂的蛹初期和隐成虫期;胚胎内的卵黄磷蛋白随其发育过程而降解,寄生后第3 d,即胚胎发育结束时则全部降解完毕.此外,还探讨了卵黄蛋白合成、摄取和降解过程中,血淋巴、卵巢或卵内可溶性蛋白含量的的时间动态变化.     

不同树龄银杏叶片差异蛋白组学研究

为了在蛋白表达水平上了解银杏(Ginkgo biloba)基于年龄变化的叶片蛋白质表达特征,寻找与年龄变化相关的响应蛋白,以楼观台老子手植银杏(约2 600年生)、说经台银杏(约800年生)和20年生幼龄银杏的叶片为研究对象,利用双向凝胶电泳(2-DE)和MALDI TOF/TOF MS/MS技术研究3个树龄银杏叶片蛋白质差异表达。蛋白质2-DE凝胶图谱经PD-Quest 8.0软件分析与检测分别得到340、341和410个点形规则清晰、可重复的蛋白点,这些蛋白点的分子质量大多分布在20~50ku(占70%),等电点主要集中分布在pH 5~6.5(占75%);选取37个差异显著蛋白质凝胶点进行MALDI TOF/TOF MS/MS鉴定分析,成功鉴定30个蛋白质点,经过功能注释得出这些蛋白质主要参与能量及碳水化合物代谢(40%)、蛋白及氨基酸合成代谢(20%)及光合作用(16.7%)等途径;通过聚类分析得到基于年龄变化的蛋白质差异表达图谱,在高龄银杏叶片中上调表达的蛋白有11个,主要与光合作用、蛋白质及氨基酸代谢有关,下调表达的有8个,主要参与植物的能量及碳水化合物代谢。本研究明确了不同树龄银杏叶片差异蛋白参与的代谢途径,为进一步从分子水平深入了解银杏抗衰老的机理提供了理论基础。     

αV,β3整合素在绵羊体外受精胚胎的表达模式研究

[目的]探讨胚胎附植调控因子αV,β3整合素在绵羊早期体外胚胎的表达情况,为早期胚胎发育及附植调控机理提供理论依据.[方法]采用RT-PCR和间接免疫荧光染色技术,检测绵羊体外受精个发育阶段胚胎中αV及β3整合素mRNA的表达模式及蛋白表达定位情况.[结果]在绵羊2-细胞至桑椹胚体外胚胎中未能检测到整合素αV及β3 mRNA的表达,但可以检测到囊胚期胚胎有微量整合素αV及β3 mRNA的表达.并且在绵羊第7d扩张囊胚和第8d孵化囊胚上均可检测到整合素αVβ3蛋白的表达,且蛋白表达主要分布在胚胎滋养层细胞周围,孵化囊胚蛋白表达量略高于扩张囊胚.[结论]αV,β3整合素在绵羊早期胚胎发育及附植过程中具有重要调控作用.     

苹果花芽孕育蛋白质组学初步分析

 【目的】苹果为中国乃至世界最主要果树之一，但由于童期长、其育种工作一直落后于其它作物。本研究旨在揭示苹果花芽分化机理，缩短苹果童期，加速苹果育种进程。【方法】运用蛋白质组学研究技术（双向电泳技术、生物质谱技术、生物信息学技术）对富士苹果树短枝停长后3～9周的花芽、叶芽进行蛋白质分析研究。【结果】短枝停长后第7周花芽形态分化开始，第7周花芽较叶芽的2-DE图谱有283个蛋白点在表达上有明显的质和量的变化。4个蛋白点（16.4、30.2、40.3、65.1 kD）为花芽形态分化开始时初前（花序原始体出现）花芽2-DE图谱所特有；3个蛋白点（39.3、60.2、66.3 kD）为初后（侧花出现）花芽2-DE图谱所特有，1个蛋白点（77.1 kD）为萼片期花芽2-DE图谱所特有。对富士苹果花芽形态分化开始时的4个特异蛋白点用基质辅助激光解吸P电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）进行肽质量指纹谱分析，并通过检索不同的数据库进行蛋白质鉴定与功能预测，初步认为第256号（16.4 kD）、298号（30.2 kD）蛋白点是未知蛋白，第327号（40.3 kD）蛋白点是与合成酶有关的蛋白，第367号蛋白点（65.1 kD）是一个与转录有关的RNA结合蛋白。【结论】富士苹果花芽形态分化开始时有16.4、30.2、40.3、65.1 kD 4个特异蛋白、侧花出现时有39.3、60.2、66.3 kD 3个特异蛋白、萼片出现时有77.1 kD 1个特异蛋白出现。16.4、30.2 kD是未知蛋白，40.3 kD是与合成酶有关的蛋白，65.1 kD是一个与转录有关的RNA结合蛋白。     

基于绵羊胚胎骨骼肌蛋白质组学的PI3K-AKT信号通路分析

【目的】绵羊是重要的经济动物,其骨骼肌生长发育与产肉性能密切相关。胚胎期是绵羊骨骼肌生长发育的关键阶段,挖掘分析绵羊胚胎骨骼肌蛋白质组数据,为揭示绵羊肌肉发育重要时间节点、筛选绵羊胚胎骨骼肌生长发育调控蛋白质提供依据。【方法】本团队已对妊娠第85天、第105天和第135天的中国美利奴绵羊胚胎背最长肌进行串联质谱(tandem mass tag, TMT)蛋白质定量,鉴定到1316种差异丰度蛋白质。现利用GO、KEGG和R等方法对这些差异丰度蛋白质开展聚类、功能注释和通路分析等生物信息学分析。【结果】基于前期研究结果对差异丰度蛋白质进行R语言聚类,分析结果显示,cluster 5类蛋白在胚胎骨骼肌第105天具有较高丰度。对cluster 5 蛋白进行GO和KEGG富集分析发现,该类蛋白质参与胞内蛋白质代谢过程,显著富集于PI3K-AKT信号通路中,而在该信号通路中RAC-β丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶X1(AKT2)具有较高表达丰度。蛋白质生物信息学结果表明,AKT2蛋白由481个氨基酸构成,AKT2蛋白理论分子量为55.58kD,由66个带正电荷的氨基酸残基和72个带负电荷的氨基酸残基组成,理论等电点为6.08,亲水性平均系数-0.454,属于亲水性蛋白。预测AKT2蛋白的481个氨基酸全部位于膜外,属于膜受体蛋白。AKT2蛋白有12个N-端糖基化位点,71个磷酸化位点,与蛋白酶K相似度为99%,属于蛋白酶催化亚基家族。【结论】绵羊胚胎骨骼肌蛋白质组数据发现,第105天是绵羊胚胎骨骼肌纤维由增殖分化到增大增粗的转折点,具有调控绵羊胚胎骨骼肌纤维生长发育作用的PI3K-AKT信号通路在该节点显著富集,AKT2是调控该信号通路的重要候选蛋白。综上,本研究结果对揭示胚胎骨骼肌生长发育及其调控分子机制具有重要理论指导意义。     

孵化期间鸡胚及蛋内营养物质变化规律

孵化期蛋内营养物质作为鸡胚良好生长发育的前提和基础得到人们越来越多的关注。文章对孵化期间鸡胚和蛋内的钙、磷、蛋白质、脂肪和水分分别在蛋黄、蛋白和胚胎中含量的变化进行了阐述,为胚胎发育的研究奠定基础。     

绿壳种蛋孵化期间钙磷含量的变化

选择长顺绿壳蛋鸡孵化期种蛋为研究材料,通过测定种蛋蛋壳、内容物钙与磷含量的变化,研究孵化期间蛋壳与胚胎钙、磷的转移变化与吸收利用规律。结果表明,孵化过程中,不同胚龄蛋壳的钙含量呈逐渐降低而内容物中的钙含量则呈相应增加的规律性。其中,以10-15d下降最快,从入孵到出壳蛋壳中钙减少0.65g,内容物中钙增加0.69g;蛋壳中钙减少量与内容物钙增加量基本相同,蛋壳中的钙转移到内容物中。孵化过程中蛋壳中磷含量基本不变,总量有损失,内容物中磷含量下降;蛋壳磷含量甚微,胚胎发育所需要的磷主要由内容物提供。     

尖吻细鳞鲑胚胎及仔、稚、幼鱼发育的研究

通过活体观察和Bouin＇s液固定对乌苏里江尖吻细鳞鲑Brachymystax lenok的胚胎及仔、稚、幼鱼的发育进行观察,确定尖吻细鳞鲑的发育过程,详细描述了胚胎各发育时期的时序、形态特征以及仔、稚、幼鱼的发育特点,并将尖吻细鳞鲑与其它几种鱼类进行比较,探讨破膜所需时间与卵子性质和孵化水温的关系。结果表明：尖吻细鳞鲑成熟卵呈淡黄色,圆球形,卵径为（4.32±0.21）mm,含有大量卵黄,卵的比重大于水,属端黄卵,卵膜厚,无黏性,有弹性;受精卵在水温6.0~10.7℃条件下,历时597 h孵出,有效积温为190.79℃.d;尖吻细鳞鲑胚胎发育过程包括受精卵、卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、器官形成等6个阶段、26个发育时期。初孵仔鱼全长为（10.67±0.02）mm,破膜第13天仔鱼出现鳔并开始上浮,第14天仔鱼卵黄囊吸收完全,仔鱼期结束,进入稚鱼期;破膜后第25天稚鱼体侧出现幼鲑斑,第35天各鳍发育完全,进入幼鱼期,此时鱼体外观与成鱼无异。     

放流前的大麻哈鱼消化系统发生发育的组织学研究

采用形态学观察与连续组织切片技术,对放流前的大麻哈鱼Oncorhynchus keta胚胎期（水温为8～10℃）和胚后期（水温为9～11℃）消化系统的发生发育进行观察和研究。结果表明：大麻哈鱼受精后第16天形成原始的消化管及致密的小肝细胞团;受精后第18天V型胃及口裂雏型形成,胰细胞出现;受精后第25天,肛门形成,消化道贯通;受精后第38天V型胃及胆囊发育形成;受精后第50天幽门盲囊出现;受精后第60天鱼体破膜,口能自由闭合,上、下颌及舌部出现早期齿,原始的胃腺细胞出现。破膜后第10天,消化道初步形成口咽腔、食道、V型胃、肠、肛门和幽门盲囊,仔鱼消化系统初步具备了摄食和消化外源性食物的能力;破膜后第70天,卵黄完全被吸收,各消化器官和结构逐步发育。此后随着鱼体的生长,消化器官逐步发育成熟,结构和功能逐渐完善。     

卵形鲳JunB基因克隆及其胚胎组织表达分析

【目的】明确卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）JunB基因（ToJunB）在胚胎发育过程中的表达规律,为揭示JunB基因在鱼类胚胎发育过程中的作用机制打下基础。【方法】采用RT-PCR扩增ToJunB基因编码区（CDS）序列,通过ProtParam、NetSurfP 2.0、TMHMM、SignalP、PSORT及NetNGlyc 1.0等在线软件进行生物信息学分析,并采用荧光定量PCR检测ToJunB基因在卵形鲳鲹17个胚胎发育时期（受精卵、2-细胞期、8-细胞期、16-细胞期、32-细胞期、64-细胞期、多细胞期、高囊胚期、原肠早期、原肠中期、原肠末期、胚胎形成期、眼囊期、耳囊期、心脏跳动期、晶体出现期和初孵仔期）的表达情况。【结果】克隆获得的ToJunB基因（1777 bp）包含344 bp的5'端非编码区（5'-UTR）、954 bp的开放阅读框（ORF）及479 bp的3'端非编码区（3'-UTR）,共编码318个氨基酸残基;其编码蛋白分子量为35.03 kD,理论等电点（pI）为8.26,呈碱性;总平均疏水指数（GRAVY）为-0.567,为亲水性蛋白。ToJunB蛋白无跨膜结构和信号肽,主要定位于细胞核,属于非分泌型蛋白,在第39、129和168位氨基酸处各存在1个潜在的糖基化位点;其二级结构中α-螺旋占35.67%、延伸链占14.33%、无规则卷曲占50.00%。基于JunB氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树显示,卵形鲳鲹与黄尾鰤的遗传距离最近,均隶属于鲈形目鲹科。ToJunB基因在胚胎发育前期（受精卵至原肠早期）的相对表达量较高,至原肠中期达最高值,在胚胎发育后期（原肠末期至初孵仔期）的相对表达量均较低,且ToJunB基因在受精卵至原肠中期共10个发育时期的相对表达量极显著高于胚胎发育后期的7个时期（P<0.01）。【结论】ToJunB基因在卵形鲳鲹胚胎受精卵至原肠早期的相对表达量较高,于原肠中期达最高值后迅速降低,原肠末期至初孵仔期的相对表达量均较低,说明JunB基因在卵形鲳鲹胚胎发育的细胞分裂和增殖过程中发挥重要作用。     

孵化期间蛋内组成成分变化规律的研究

通过测定鸡蛋蛋白、蛋黄及胚胎中钙、粗蛋白和粗脂肪含量,探讨孵化期间蛋内组成成分的变化规律.结果表明: 胚胎发育过程中蛋白提供20.2%的钙,蛋黄提供10.0%的钙,蛋白和蛋黄钙含量的变化具有一定的互补性;胚胎中钙含量不断增加.蛋白中粗蛋白含量高,粗脂肪含量低,粗蛋白与粗脂肪含量变化趋势基本相反.除12胚龄外,蛋黄中粗脂肪含量不断降低; 18～21胚龄是脂肪代谢旺盛期.胚胎粗蛋白含量不断降低,粗脂肪含量不断增加,两者呈负相关.     

Proteomic analysis of differentially expressed proteins in poplar leaves induced by Marssonina brunnea f. sp.multigermtubi

Proteomic analysis of differentially expressed proteins in poplar leaves induced by Marssonina brunnea f. sp.multigermtubi     

法国番鸭不同孵化阶段蛋壳内钙·磷含量的变化研究

[目的]为了了解法国番鸭胚胎发育期间钙、磷的吸收利用规律。[方法]通过对不同孵化时期法国番鸭蛋壳内钙、磷含量及比例进行测定,研究了不同孵化阶段蛋壳内钙、磷含量的变化。[结果]随着孵化时间的延长,蛋壳内钙、磷含量呈现逐渐降低的规律性。0～20胚龄,蛋壳内钙变化相对较小,20胚龄时钙含量突然降低,并持续至35d出雏;磷含量变化从8胚龄开始,28胚龄达最大,0～8和28～35胚龄蛋壳中吸收磷较少。孵化期间,8～28胚龄钙磷吸收比例呈逐渐上升趋势。[结论]孵化前期,钙的吸收较低,中后期较高,出雏前4d钙吸收最多。磷孵化前期变化不明显,中期较为明显,后期趋于稳定。该研究符合禽类胚胎发育规律。     

鸡胚大头开孔原壳体外培养方法的建立

通过原壳体外培养和抽蛋清的方法，研究了胚龄、蛋清抽取量对鸡胚发育的影响。结果表明：X期鸡胚抽取1mL、3mL和6mL蛋清后，其孵化率分别为38．6％、30．35％和8．6％。抽取蛋清1mL组（P〈0．01）和3mL组种蛋（P〈0．05）的孵化率明显优于抽取6mL组。对、3日龄鸡胚，抽取9mL蛋清后，鸡胚发育受到的影响最大，其孵化率仅为33．3％，明显低于3mL和6mL组（P〈0．01）；而抽取3mL和6mL蛋清对3日龄鸡胚的影响较小，其孵化率仍高达74．3％和76．5％。抽取6mL蛋清并在大头顶端开直径为110cm的圆孔进行鸡胚原壳体外培养获得成功，3日龄鸡胚的孵化率为18．5％。     

鸡胚胎代用蛋壳及异体胚盘移植孵化的研究

对鸡胚胎蛋壳培养的研究结果显示 :( 1 )在± 4 5°的转角下 ,不同体积的代用蛋壳的胚胎发育率 ,普通蛋代用蛋壳前 6d的胚胎发育率 ( 48.5% )显著高于双黄蛋代用蛋壳 (平均 2 2 .7% ) ,但是 ,双黄蛋代用蛋壳的孵化率 ( 8.3 % )显著高于普通蛋代用蛋壳。普通蛋代用壳无小鸡孵化 ,说明普通蛋壳对于移植等量鸡胚后期的发育空间不够。( 2 )双黄蛋作为代用壳时 ,可以不添加任何物质。( 3 )换蛋壳培养鸡胚胎 ,转蛋角度± 4 5°比± 3 0°的效果要好。异体胚盘移植结果显示 :同一动物间的同功物质具有通用性 ,异体胚盘移植鸡胚可以继续发育。