重叠延伸PCR技术及其在基因工程上的应用

重叠延伸PCR技术（gene splicing by overlap extension PCR,简称SOEPCR）由于采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成了重叠链,从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸,将不同来源的扩增片段重叠拼接起来。此技术利用PCR技术能够在体外进行有效的基因重组,而且不需要内切酶消化和连接酶处理,可利用这一技术很快获得其它依靠限制性内切酶消化的方法难以得到的产物。重叠延伸PCR技术成功的关键是重叠互补引物的设计。重叠延伸PCR在基因的定点突变、融合基因的构建、长片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的扩增等方面有其广泛而独特的应用。本文综述了重叠延伸PCR的原理和目前的应用情况,并指出了此技术中的注意事项,展望了其应用前景。     

小麦TaGAPC定点突变体基因载体构建及其原核表达

为了研究催化活性半胱氨酸Cys154、Cys158残基对小麦细胞质甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Ta GAPC)蛋白酶活性的影响,利用重叠延伸PCR法分别将这2个位点的半胱氨酸突变成丝氨酸,并分别连入p ET28a(+)原核表达载体。在25℃条件下,Ta GAPC及其定点基因Ta Cys154S/Ta Cys158S经0.25 mmol/L IPTG诱导后高效表达,SDS-PAGE电泳检测结果显示,目标重组蛋白均为可溶性且大小约为40 k Da,与预测结果一致。在此基础上,经超声波破菌及镍柱纯化获得3种纯化重组蛋白。这为后续Ta GAPC及其定点突变体蛋白酶活性测定及活性位点分析提供试验材料。     

多重PCR技术在植物生物学研究中的应用

多重PCR是近几年兴起的一项新技术,它高效快捷、高度特异敏感、能够降低实验成本很适宜于大样本的植物生物学研究。本文较为详细地介绍了多重PCR的概念、原理及其在国内外植物种质纯度鉴定、病虫害检测和植物分子育种中的应用现状,并对其应用前景作了展望。     

荧光定量PCR技术研究进展及其在植物遗传育种中的应用

荧光定量PCR（Fluorescence in Quantitatire PCR，FQPCR）技术是20世纪90年代发展起来的一种新的核酸定量技术，具有高准确性、高特异性等特点，在生物科学和医学研究中发挥着极大的作用。本文综述了荧光定量PCR技术的原理、荧光探针类型及其在植物遗传育种中应用。     

实时荧光定量PCR技术在转基因玉米检测中的应用研究

采用实时荧光定量PCR技术，通过使用特异的引物和探针，对玉米中的内源基因Invertase和转基因玉米Mon 810、Event 176中的外源基因进行了定量检测，建立了商业化转基因玉米Mon 810 (YieldGard)和Event 176 (Maximizer)的定量PCR检测方法。该方法的检测灵敏度小于0.01％，是国际上设定的转基因最低限量的100倍。     

竞争性等位基因特异性PCR分型技术在植物抗病遗传育种中的应用

单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)广泛分布在植物基因组中,位点丰富,易于实现高通量分析.竞争性等位基因特异性PCR(kompetitive allele specific PCR,KASP)是一种对特定位点处的SNP以及插入和缺失(insertion-deletion...     

缓释性磷化铝单剂及技术在济宁问世

<正>由济宁市仓宁仓储科技有限公司董事长赵华林经过多年潜心研究发明的缓释磷化铝单剂及生产技术,解决了磷化铝释放速度快、持效期短等难题,并获得国家专利。该项目主要解决了磷化铝单剂包装的难题,并采用国内首创的两项缓释放技术,解决了磷化铝释放速度快、     

PCR技术在水产养殖动物病原微生物检测中的应用

随着我国水产养殖集约化程度不断提高,虾类、贝类和鱼类养殖业受到病原微生物的严重影响.因此,如何快速准确预测和诊断水产动物疾病,成为当前水产养殖业十分重要而突出的问题.近年来,随着PCR技术的介入,带动了水产养殖动物病原微生物的检测技术快速发展.文章介绍了PCR及其衍生技术(RT-PCR,Real-time PCR,免疫PcR,套式引物PCR,多重PCR)的原理、特点及在水产养殖动物病原微生物检测中的应用,并对水产养殖动物病原微生物诊断技术的发展方向做出了展望.     

混交林栽植技术在林业发展中的作用

众所周知,在全世界范围内,工业发展为自然生态环境带来了严重的破坏,我国也不例外。当前,在我国不断深化改革过程中,已经开始强化各地方的林业建设工作,以便推动我国生态工程有效开展。林业建设发展能够有效预防水土流失、沙尘暴等现象,防止土地荒漠化。结合当前我国林业发展情况来看,混交林栽植技术在其中占据着十分重要的作用,有效改善了我国地域环境。     

沙冬青脱水素基因的克隆、重组及对糖料作物的遗传转化

为研究沙冬青脱水素的功能,根据沙冬青cDNA文库中脱水素基因序列设计特异引物,采用PCR技术扩增脱水素基因的DNA全长,并对其内部的一个碱基进行了定点突变,然后成功地将其连接到pCAMBIA3301载体中,用冻融法将该表达载体质粒导入根癌农杆菌菌株LBA4404中,通过农杆菌介导法,对糖用甜菜进行了遗传转化,获得了Km抗性的甜菜植株,生根后移栽到花盆中。     

3种基因突变方法在微生物中的应用研究进展

为了解某个基因的功能,最常用的方法就是构建该基因缺失的突变体,通过测定突变体的某些性状来分析该基因的功能,因此,获得由基因型决定的表型突变体在生物学研究中极为重要。本研究主要介绍了3种构建基因突变体的方法：转座子插入突变、同源重组和定点突变技术,转座子插入方法多用于构建突变体库,同源重组多用于基因功能的研究,定点突变多用于蛋白质功能的研究。3种方法各自侧重点不同,将同源重组和定点突变技术结合起来是将来研究基因突变的一个方向。最后,论述了基因突变技术存在的缺陷和不足,提出该技术还亟待完善。     

农业技术推广组织多元化的分析与探索

西北农林科技大学经济管理学院,陕西杨凌,712100     

基于因子分析的农业技术推广 新机制和新方法研究

在涉及6个区县、12个乡镇的480家农户对10种不同技术推广模式进行了调查,利用DPS（Data Processing System）分析软件,将调查结果进行因子分析,以期探讨科技进村入户的途径和方式,并结合客观实际总结提炼对实际工作具有指导意义的农业技术推广新机制和新方法。     

温度诱变选育透明质酸产生菌

以兽疫链球菌为出发菌种,从血琼脂平板上筛选出不具溶血性的突变菌,采用恒温、变温进行诱变处理,同时对各菌株进行发酵培养比较。结果表明,相对于原菌株,变温诱变菌株的透明质酸产量有显著提高,产量由1.99g/L提高到2.95g/L,增加率为48%。     

河北省“粮食丰产科技工程”技术推广实践及效果分析

“粮食丰产科技工程”是国家“十五”科技攻关重大专项,河北省课题实施一年多来,课题组在注重小麦、玉米高产高效技术集成与创新的同时,强化新成果、新技术的推广与应用,不断探索有效的技术推广机制和方法,取得了显著的实施效果,实现了项目区粮食产量与效益的同步增长,对进一步增强河北省粮食综合生产能力及其可持续性发展,带动河北省粮食生产的恢复性增长起到了积极的推动作用。     

关于村级农业技术人员队伍建设的思考

本文依托安徽省农业技术推广总站和陕西省畜牧总站两个单位,选择了两省10个具有不同代表性的区县,研究分析了两省以种植业、畜牧业为主的村级农业技术人员队伍建设情况。通过组织村级农业技术人员召开座谈会,对部分村级农业技术人员和作为潜在村级农业技术人员的示范户、种养大户等进行问卷调查等形式开展了相关调研并参阅相关材料。本文对一些好做法进行了总结,针对存在的一些共性问题,提出了进一步加强村级农业技术人员队伍建设的政策建议。     

浅析大学农业技术推广创新体系的形成与发展

分析总结了大学主导型农业技术推广体系的概念内涵、产生背景和发展现状。对项目主导型、企业主导型、基地主导型、培训主导型和培育农协型五种大学科技推广模式进行了剖析,提出大学主导型科技推广模式的发展建议。