冷冻密度和复苏温度对BHK21细胞活力的影响

就细胞的冷冻密度和复苏温度对细胞活力的影响做了分析。取处于对数生长期的细胞以0．5×107～4．0×107／mL之间的4个细胞密度分别进行冷冻,2周之后复苏细胞,检验其复苏活力;又分别在37℃、38℃和39℃的水温复苏同一批细胞,复苏后检验细胞的活力。结果表明,随着冷冻密度的升高,复苏活力逐渐下降;在38℃水温复苏细胞的平均活力比在37℃和39℃水温复苏细胞的平均活力高,而且稳定。因此,细胞的冷冻密度和复苏活力之间存在显著负相关性,38℃的水温更适于复苏细胞。     

BHK-21细胞不同处理方式对裸鼠致瘤性的影响

为了分析BHK-21细胞对裸鼠致瘤性受何种因素的影响,我们分别用甲醛、二乙烯亚胺(BEI)、β-丙内酯(BPL)进行灭活和在-20℃进行冻融处理的BHK-21细胞接种裸鼠,通过病理组织形态学观察判定其是否存在致肿瘤的特性。结果显示,甲醛、BEI、BPL、冻融2次或3次分别处理的BHK-21细胞接种裸鼠,对裸鼠致瘤率为零。冻融1次的BHK-21细胞和107、105和103个BHK-21细胞分别接种裸鼠,致瘤率为100%。10个BHK-21细胞接种裸鼠,未见成瘤。本次试验表明,裸鼠检测BHK-21细胞致瘤性敏感性为103个细胞;冻融2次、甲醛、BEI、BPL处理,BHK-21细胞均丧失致瘤性;冻融1次不能使BHK-21细胞丧失致瘤性。     

不同浓度葡萄糖和谷氨酰胺对BHK-21细胞凋亡的影响

研究葡萄糖和谷氨酰胺两种重要营养物质对BHK-21细胞凋亡的影响,在BHK-21细胞体外培养过程中,加入不同浓度的葡萄糖和谷氨酰胺,每隔24 h取样细胞计数,活性分析和细胞凋亡率的测定.结果发现,当葡萄糖浓度降至0 mmol/L～4 mmol/L,谷氨酰胺浓度降至0 mmol/L～1 mmol/L时,细胞生长速率降低,...     

慢病毒介导的生长抑素shRNA对BHK-21细胞生长的影响

采用慢病毒介导的shRNA沉默细胞自身生长抑素（SS）的表达,同时,以pcDNA3．1-SS（pSS）真核表达载体转染细胞作为阳性对照,研究SS对BHK-21细胞的抑制增殖作用,同时观察SS是否具有促进细胞凋亡的作用。MTT法绘制细胞生长曲线可知,pSS转染细胞的生长受到明显抑制,抑制效率为9．63％（P〈0．05）;而LV—sh2组细胞的生长密度是对照组细胞的117．33％（P〈0．05）,表明SS对细胞的增殖具有抑制作用。流式细胞检测细胞凋亡表明,pSS转染组和LV-shRNA感染组凋亡细胞含量分别是对照组凋亡细胞含量的1．97倍（P〈0．05）和24．30％（P〈0．05）,表明SS通过诱导细胞凋亡发挥抑制细胞增殖的作用。本研究为SS及其类似物作为治疗药物的进一步开发应用提供了理论依据。     

乙基环丙沙星对蓝舌病病毒在BHK-21细胞中的增殖影响研究

<正>乙基环丙沙星以其出色的抗菌、抗支原体特性,在细胞培养中的作用正日益凸显,而该药在细胞培养的下游工作,其在病毒扩增中是否会带来副作用,并未见相关的报道。本研究试用蓝舌病病毒1型感染BHK-21细胞来测定乙基环丙沙星对该病毒在细胞中增殖的影响。1材料与方法1.1材料1.1.1材料。BHK-21细胞、蓝舌病病毒1型,来自云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室;乙基环丙沙星,德国Bayer公司产品;血清、MEM培养     

BHK-21悬浮细胞流加培养的研究

试验旨在研究流加培养基中不同营养成分、初始接种密度、流加起始时间对BHK-21悬浮细胞流加培养的影响。结果表明,流加浓缩包中的氨基酸对促进细胞生长有明显影响,而无血清培养基添加成分不仅促进细胞生长,且对细胞活力的维持起着较为重要的作用。初始接种密度为3×10⁵～6×10⁵ m/L,培养至48 h开始流加一定量的浓缩液,流加培养效果较好。另外,在已优化的条件下进行流加培养,未出现细胞大量凋亡现象。     

用原位杂交对BHK-21细胞中的FMDV定位和检测

为了明确FMDV在细胞内的增殖部位，建立检测细胞内低拷贝FMDV的方法，对试验接种FMDVO／Akesu／58（10^7TCID50）毒株的BHK-21细胞中2～10h不同时间段的病毒RNA进行检测和定位。选用FMDVRNA非结构蛋白区3D保守序列作为寡核苷酸探针，采用尾段标记法以地高辛-11-d UTP标记，用原位杂交敏感加强型试剂盒检测杂交体。结果显示，从感染FMDV后2～10h内的BHK-21细胞中检测出阳性染色的病毒粒子，这些病毒粒子大多集中在核周围，随感染时间延长阳性染色信号增强。这说明用寡核苷酸探针与敏感加强型试剂盒结合对检测细胞内低拷贝的病毒粒子是可行的，同时也从分子水平上证明FMDV主要在细胞质中进行复制和繁殖。     

肝素钠对伪狂犬病毒侵染BHK-21细胞和小白鼠的抑制

应用空斑技术,检测肝素钠对伪狂犬病毒（ＰＲＶ）在ＢＨＫ＿２１细胞上形成空斑的数量,证实肝素钠对ＰＲＶ的感染能力有较大抑制作用。小鼠试验证实肝素钠可降低病毒的致病力,但肝素钠对小鼠有一定毒性。     

山羊痘病毒诱导BHK-21细胞凋亡的检测

为验证山羊痘病毒诱导BHK-21细胞出现凋亡现象的存在,分别采用HE染色、凋亡试剂盒检测、流式细胞仪检测和DNA Ladder检测,对山羊痘病毒感染的BHK[21细胞培养物进行细胞凋亡检测.不同方法检测结果均显示,山羊痘病毒感染BHK-21细胞组相同时间细胞凋亡数明显高于对照组.表明山羊痘病毒可诱导BHK-21细胞发生...     

水泡性口炎病毒感染BHK-21细胞的超微结构改变

应用起薄切片技术对水泡性口炎病毒（VSV）在BHK-21细胞上的形态发生和早期发育进行了观察。结果表明，VSV能导致BHK-21细胞圆缩．胞浆严重空泡化，线粒体嵴断裂及空泡化；病毒在细胞浆内复制．增殖．在细胞膜上以出芽方式获得囊膜而成热。     

口蹄疫病毒诱导BHK-21细胞产生凋亡的研究

试验利用口蹄疫病毒感染BHK-21细胞,通过MTT法、Hoechst 33258染色、原位末端标记技术(TUNEL)、流式细胞术和链特异性荧光定量RT-PCR,分别就口蹄疫病毒对BHK-21细胞生长的抑制作用、凋亡细胞的形态学和分子生物学特征、凋亡峰的出现和细胞周期的变化以及口蹄疫病毒基因组在BHK-21细胞内的复制情况进行了检测。结果表明:口蹄疫病毒可抑制BHK-21细胞的生长并诱导其产生凋亡,呈现典型的凋亡细胞特征,出现细胞凋亡峰并且细胞周期明显被阻滞在G1/G0期,同时对凋亡率和口蹄疫病毒基因组复制的关系做了初步研究。     

水泡性口炎病毒诱导BHK-21细胞的凋亡

采用HE、Giemsa染色、透射电镜以及DNA琼脂糖凝胶电泳等研究了水泡性口炎病毒（VSV）诱导BHK-21细胞凋亡的过程。结果显示：VSV感染BHK-21细胞后,光镜下可见细胞圆缩,细胞器固缩、核仁消失、染色质凝聚和核碎裂、凋亡小体出现;电镜下观察到染色质聚集形成典型的新月形,胞浆中充满大量空泡,细胞核因染色质凝聚也发生了空泡化;1％的琼脂糖凝胶电泳出现180-200bp整倍数的DNA梯形条带。结果表明,VSV诱导BHK-21细胞凋亡是其致细胞病变的主要表现形式之一。     

双倍盐MEM和传统MEM对BHK-21细胞生长和FMDV增殖的影响

采用双倍盐MEM细胞培养基与传统培养基进行了BHK-21细胞生长和FMDV增殖对比实验,实验结果表明两种培养基无明显差异,双倍盐MEM培养基工艺简单,易于质量控制,是细胞培养基选择的一个方向。     

BHK21细胞冻存密度与复苏后活力的关系分析

对BHK21细胞不同的冻存密度与细胞复苏后活力的关系进行了统计分析.首先取处于对数生长期的细胞,以4种不同的密度进行冻存.这4种密度分布在0.5×107～4.0×107个/mL之间.冻存2周后,每种密度各复苏3支,计算其活力,分析密度与活力之间是否存在相关性.如此,平行做2次.结果发现,不同的细胞冻存密度与细胞复苏后的活力之间有相关性.     

浅谈建立生产用BHK-21种细胞库的措施

繁殖口蹄疫病毒BHK-21细胞应该是在48～72h形成致密单层,形态呈长梭性,折光性强,能产出高滴度病毒的细胞.但由于影响细胞质量因素诸多,生产中细胞常常出现不贴壁、生长缓慢、微生物污染、不分裂等现象.其中2007年据详细数据统计,淘汰细胞中霉菌占0.08％、细菌占0.44％、不分裂占0.38％、划痕占0.02％.而且生产中传代代次模糊,代次不清,致使细胞形态有时出现变异.这些细胞质量问题间接影响到疫苗的质量.纯净的、安全的、稳定的、高活力的生产用种细胞是保证疫苗质量的最主要因素,因此建立生产用种细胞库非常必要.本文从建立纯净、安全、稳定、高活力的生产用BHK-21细胞库措施方面做一浅显总结,希望能与同行做一交流,有不要之处,恳请谅解!     

用乙基环丙沙星重建受大肠杆菌污染的BHK-21细胞

为重建受大肠杆菌污染的BHK-21细胞,本研究采用药物乙基环丙沙星,先测出该药对大肠杆菌的最低抑制浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),再测出该药对BHK-21细胞的MIC,从而确定10 mg/L为乙基环丙沙星不影响细胞生长,又能抑制大肠杆菌的安全浓度。然后用含该浓度乙基环丙沙星的MEM生长液,对受污染的BHK-21细胞进行物理、化学相结合的循环处理。经过3次循环处理,再传3代后,确认大肠杆菌污染已经被彻底清除,细胞恢复了健康。此方法为抢救受细菌污染的细胞提供了参考。     

悬浮培养型BHK-21种子细胞质量优化的研究

BHK-21细胞是幼仓鼠肾细胞,主要用于口蹄疫疫苗的制备。它对微生物及一些有毒有害物质没有抵抗能力,如果长期传代,势必会收到这些因素的影响,从而对细胞造成一定损伤。因此应该对其进行冷冻保存。本文旨在通过优化悬浮型BHK-21细胞复苏方式、合适的冻存密度,达到提高种子细胞质量的研究。确定最优的细胞复苏方式,确定合适的冻存密度,保证细胞在放大培养过程中优良的细胞状态,为后段工序的抗原生产打下坚实的基础。为下一步该细胞的质量优化提供理论参考。     

TPL2促进口蹄疫病毒在BHK-21细胞复制

为研究肿瘤进行性位点2(TPL2)在仓鼠肾细胞(BHK-21)中对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,使用FMDV感染BHK-21细胞,通过qRT-PCR技术检测FMDV感染对内源性TPL2转录水平的影响;根据GenBank公布的TPL2基因序列(NM007746.2)设计构建TPL2的真核表达质粒以及设计并合成宿主TPL2的RNAi序列,利用脂质体方法转染BHK-21细胞,通过qRT-PCR和Western blotting技术分析TPL2在BHK-21细胞过表达和干扰对FMDV复制的影响。结果表明,FMDV感染BHK-21细胞后,TPL2转录水平显著上调;过表达TPL2能够促进FMDV在BHK-21细胞中复制,而下调表达内源性TPL2后FMDV的复制受到抑制,表明TPL2促进FMDV在BHK-21细胞中进行复制,本结果进一步拓展了我们对FMDV与天然免疫机制之间关系的认识,同时为TPL2的相关研究积累了科学资料。     

氨和乳酸对悬浮培养的BHK-21细胞生长和胞内酶活性的影响

为了研究氨和乳酸对悬浮培养的BHK-21细胞生长和细胞内酶活性的影响,用添加了不同浓度氨和乳酸的培养基悬浮培养BHK-21细胞,间隔12 h取样,比较细胞的生长状况,检测细胞代谢过程中营养物质的消耗和细胞内琥珀酸脱氢酶的活性。结果显示,当氨和乳酸的添加浓度分别为2.5和10 mmol/L时,对细胞的生长产生弱抑制作用;随着氨和乳酸添加浓度的增加,细胞生长缓慢,营养物质消耗量降低,琥珀酸脱氢酶活性降低;在氨和乳酸添加浓度分别达到5和20 mmol/L时,细胞生长代谢受到严重的抑制,琥珀酸脱氢酶活性在整个培养过程中显著低于对照组。因此,培养液中氨和乳酸积累到一定浓度会抑制BHK-21细胞生长,影响细胞内琥珀酸脱氢酶的活性。