谷氨酰胺对肉仔鸡肠道黏膜淋巴细胞增殖活性、氧化应激和免疫应激的调控作用

本试验旨在通过体外细胞培养技术培养肉仔鸡肠道淋巴细胞,建立体外脂多糖(LPS)和双氧水(H2O2)应激模型,研究不同浓度的谷氨酰胺(Gln)对肉仔鸡淋巴细胞增殖活性和抗氧化的调控作用,为Gln营养改善肠道健康状态提供理论依据.从肉仔鸡空肠分离出淋巴细胞,制得细胞悬液,在Gln终浓度分别为0、10、50、100、200μ...     

水溶性苜蓿多糖对肉仔鸡T、B淋巴细胞体外增殖的影响

为探讨水溶性苜蓿多糖(WSAP)对体外培养的肉仔鸡淋巴细胞增殖的影响。本研究将不同浓度的WSAP分别加入到体外培养的用伴刀豆球蛋白A(ConA)刺激的肉仔鸡外周血、胸腺、脾脏淋巴细胞中和用细菌脂多糖(LPS)刺激的肉仔鸡外周血、脾脏、法氏囊淋巴细胞中,培养48h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定淋巴细胞增殖的变化。结果显示:(1)在本试验中,当WSAP在一定浓度范围(4～20μg·mL-1)内时,T、B淋巴细胞的OD值比对照组高,且随着多糖浓度的增加,数值先增高(1～20μg·mL-1)后降低(100～200μg·mL-1);(2)同浓度WSAP对肉仔鸡外周血及不同的免疫器官的刺激强度不同,相同日龄时,肉仔鸡外周血和脾脏T、B淋巴细胞的OD值分别小于胸腺和法氏囊的OD值;(3)WSAP对相同日龄的肉仔鸡外周血及不同的免疫器官的最佳刺激浓度不同,对外周血的最佳刺激浓度为20μg·mL-1,脾脏为8μg·mL-1,法氏囊和胸腺为15μg·mL-1。本试验中WSAP对肉仔鸡体外淋巴细胞增殖的刺激浓度在8、15、20μg·mL-1时效果较好,这些结果表明一定浓度的WSAP可以促进肉仔鸡淋巴细胞的增殖,且存在一定的量效、时效关系和组织特异性。     

猪淋巴细胞转化增殖试验反应的最佳条件探讨

为了确定猪淋巴细胞转化增殖试验反应的最佳条件,研究以东北民猪为试验猪,采用MTT法研究不同浓度犊牛血清(FCS)、淋巴细胞、植物血凝素P(PHA-P)对猪淋巴细胞增殖的影响。结果表明:当培养时间为60 h、犊牛血清浓度为10%、淋巴细胞浓度为2×106个/m L、PHA-P刺激的最佳浓度为12.5μg/m L时,可显著刺激T淋巴细胞的增殖。     

淫羊藿多糖对鸡脾脏淋巴细胞的调节作用研究

为研究淫羊藿多糖(EPS)体外增强免疫活性,采用酶学检测法测定淫羊藿多糖活性及对鸡脾脏淋巴细胞的增殖作用。根据活性检测结果,选择用50%的乙醇醇沉的淫羊藿多糖进行安全浓度试验;根据安全浓度检测结果,选择2 500.00μg/mL、1 250.00μg/mL、625.00μg/mL、312.50μg/mL、156.25μg/mL 5个浓度,用MTT法测定淫羊藿多糖单独和协同LPS刺激对鸡脾脏淋巴细胞增殖率的影响。结果显示:不同浓度乙醇醇沉的淫羊藿多糖均具有良好的活性,但乙醇浓度为50%醇沉的淫羊藿多糖活性最佳。淫羊藿多糖对鸡脾脏淋巴细胞的安全浓度为2 500.00μg/mL。淫羊藿多糖无论是单独还是协同LPS刺激脾脏淋巴细胞,均显示出不同程度增强脾脏淋巴细胞的活性,且均在浓度为1 250.00μg/mL时显示出较强的体外增强鸡脾脏淋巴细胞增殖的能力,说明淫羊藿多糖在安全浓度范围内可刺激鸡脾脏淋巴细胞增殖,从而实现调节免疫功能的作用。     

谷氨酰胺二肽对断奶仔猪肠道免疫的影响

采用体外淋巴细胞转化试验研究谷氨酰胺(Gln)及丙氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln)对早期断奶仔猪肠系膜淋巴结细胞增殖的影响。摘取28日龄断奶仔猪肠系膜空、回肠淋巴结,分离淋巴细胞,接种于含不同浓度Gln或Ala-Gln的培养液中37℃培养72h后,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖。Gln浓度为2mmol/L时,淋巴细胞刺激指数最大;Ala-Gln浓度为1mmol/L时,淋巴细胞刺激指数最大。增加Gln或Ala-Gln浓度并没有增加其效应。本试验表明Gln和Ala-Gln均可以促进丝裂原植物凝集素(PHA)刺激的淋巴细胞增殖,在一定浓度范围内Ala-Gln与Gln具有相似的作用。     

苜蓿多糖和黄芪多糖对肉仔鸡淋巴细胞增殖的影响

本试验旨在研究苜蓿多糖(water soluble alfalfa polysaccharide,WSAP)和黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)2种不同植物来源的多糖对肉仔鸡外周血液和脾脏中淋巴细胞增殖的影响.将4种不同浓度的WSAP和APS分别加入到鸡血液淋巴细胞和脾脏淋巴细胞中,培养48 h后用MTT法测定T、B淋巴细胞增殖的变化.结果表明:WSAP、APS在一定浓度下能显著促进肉仔鸡血液和脾脏中淋巴细胞的增殖,其中WSAP以20 μg/mL,APS以100 μg/mL效果最好.此外,APS对肉仔鸡淋巴细胞增殖的效果要好于WSAP,但APS的有效添加量比WSAP多.由此表明WSAP、APS促进淋巴细胞增殖可能是其发挥免疫作用的机制之一,且不同植物来源的多糖免疫效果不同.     

林蛙油蛋白胰蛋白酶水解物对小鼠脾淋巴细胞和巨噬细胞功能的影响

用胰蛋白酶水解林蛙油蛋白,并制备不同浓度林蛙油蛋白胰蛋白酶水解物,通过小鼠脾淋巴细胞增殖试验、巨噬细胞吞噬中性红试验和巨噬细胞体外释放NO试验,观测林蛙油蛋白胰蛋白酶水解物对小鼠脾淋巴细胞和巨噬细胞功能的影响。结果显示,不同浓度林蛙油蛋白胰蛋白酶水解物对脾淋巴细胞和巨噬细胞具有明显的免疫促进作用,当该水解物浓度大于100μg/m L时,对淋巴细胞增殖和巨噬细胞杀伤功能的促进效果极显著(P<0.001);当该水解物浓度大于200μg/m L时,对巨噬细胞释放NO的促进效果极显著(P<0.001)。该试验表明林蛙油蛋白的胰蛋白酶水解物可显著提高脾淋巴细胞和巨噬细胞功能(P<0.001),且随着浓度的增加,其作用效果增强。     

硫酸化银耳多糖和党参多糖对鸡T淋巴细胞增殖及白细胞介素-2mRNA表达水平的影响

为研究硫酸化银耳多糖(sTPS_(70c))和硫酸化党参多糖(sCPPS_(50c))增强免疫作用机理,本试验以未修饰银耳多糖(TPStp)为对照,采用噻唑蓝(MTT)法和实时荧光定量PCR法测定了sTPS_(70c)和sCPPS_(50c)对鸡T淋巴细胞增殖及白细胞介素-2(IL-2)mRNA表达水平的影响。结果表明,多糖单独加入到外周血淋巴细胞时,sTPS_(70c)和sCPPS_(50c)几乎所有浓度均可显著刺激T淋巴细胞的增殖(P0.05),而TPStp仅在浓度为3.125μg/mL时显著刺激T淋巴细胞增殖(P0.05);多糖与植物血凝素P(PHA-P)同时加入到外周血淋巴细胞时,sCPPS_(50c)在浓度为0.3911.563μg/mL时显著刺激T淋巴细胞增殖(P0.05);sTPS_(70c)和sCPPS_(50c)在浓度为1.563μg/mL时可提高T淋巴细胞IL-2 mRNA的表达水平(P0.05),其中sTPS_(70c)对IL-2 mRNA的促表达作用显著强于TPS_(tp)(P0.05),且在浓度为1.563μg/mL时的作用最强。结果提示,硫酸化修饰可以提高多糖的淋巴细胞增殖活性及显著增强IL-2 mRNA的表达,且以sTPS_(70c)的作用较强,这与取代度有一定的相关性。     

体外培养中硒对黄曲霉毒素B_1损伤凡纳滨对虾肝胰腺细胞的影响

本试验旨在研究体外培养中硒(Se)对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺细胞抗氧化能力的影响以及对黄曲霉毒素B1(AFB1)毒性的缓解作用。在体外培养肝胰腺细胞的基础上,设定含不同浓度(0、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75μg/m L)Se的培养液,研究Se对肝胰腺细胞抗氧化能力的影响;另用浓度为1 600μg/L的AFB1侵染细胞,探究Se对AFB1毒性的缓解作用。结果表明:当Se浓度处于0~0.45μg/m L时,随着Se浓度的增加,丙二醛(MDA)含量呈现降低趋势,但各个浓度之间并没有显著差异(P0.05),过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力随着Se浓度的增加而增强,Se浓度为0.45μg/m L时GSH-Px活力显著高于其他浓度(除0.30μg/m L)时(P0.05);当Se浓度处于0.45~0.75μg/m L时,随着MDA含量升高的同时CAT、GSH-Px活力下降。当细胞受到浓度为1 600μg/L的AFB1侵染后,随着培养时间的增加,MDA含量表现一直升高的趋势,同时CAT、GSH-Px活力都有一定程度的下降;当细胞受到浓度为1 600μg/L的AFB1和浓度为0.45μg/m L的Se共同作用后,随着培养时间的增加,MDA含量有一定程度的改善,CAT、GSH-Px活力得到一定程度的恢复。由此可见,在体外培养条件下,浓度为0.45μg/m L的Se有利于提高凡纳滨对虾肝胰腺细胞的抗氧化能力,且在一定程度上能缓解AFB1对肝胰腺细胞的毒性作用。     

赤灵芝多糖对鸡淋巴细胞增殖的影响

为探讨赤灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharides,GLP)对体外培养鸡外周血淋巴细胞、脾脏淋巴细胞增殖的影响,将不同浓度的GLP单独或协同伴刀豆素球蛋白(Con A)刺激仔鸡外周血淋巴细胞、脾脏淋巴细胞,采用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化。结果表明,单独刺激外周血淋巴细胞时,GLP在0.070~2.25 mg/m L的剂量范围内,其吸光度值均显著大于细胞对照组(P0.05),协同Con A刺激外周血淋巴细胞时,GLP+Con A组在0.141~2.25 mg/m L吸光度值显著大于Con A对照组(P0.05)。单独刺激脾脏淋巴细胞时,GLP在0.035~2.25 mg/m L浓度时的吸光度值显著大于细胞对照组(P0.05),协同Con A刺激脾脏淋巴细胞时,GLP+Con A组在0.035~2.25 mg/m L吸光度值显著大于Con A对照组(P0.05)。提示,GLP在体外不仅能单独刺激鸡淋巴细胞增殖,与Con A具有协同刺激作用,且在一定范围内呈现明显的量效关系。     

采用泊洛沙姆为佐剂的O型口蹄疫多肽疫苗对大鼠脾细胞的增值作用

为研究泊洛沙姆作为佐剂的O型口蹄疫多肽疫苗对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测不同浓度的泊洛沙姆407、FMDV-O型泊洛沙姆佐剂多肽疫苗(多肽浓度50μg/m L)、FMDV O型多肽抗原液(7.06 mg/m L,用PBS稀释至50μg/m L)及FMDV O型油乳佐剂多肽疫苗(多肽浓度50μg/m L)对伴刀豆球蛋白A(Concanavalin A,Con A)处理淋巴细胞的增殖率。结果表明,与空白对照组相比较,泊洛沙姆各浓度对脾细胞均有增殖作用,多肽疫苗在高浓度的时候对细胞有抑制作用,随着作用浓度的降低,又进而转为细胞增殖作用。     

沙葱多糖对绵羊外周血淋巴细胞的调节作用研究

试验研究沙葱多糖（Allium mongolicum regel polysaccharides）对绵羊外周血淋巴细胞增殖及一氧化氮（NO）、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响。试验设置不同浓度（0~250μg/ml）的沙葱多糖和不同的作用时间（24、48、72 h），以MTT比色法检测淋巴细胞增殖；以培养24 h的绵羊外周血淋巴细胞为研究对象，以微板法、硝酸还原酶法分别测定NO及iNOS。结果表明，沙葱多糖浓度为50~100μg/ml时抑制淋巴细胞的增殖，当浓度为150~250μg/ml时促进淋巴细胞的增殖，且作用时间为24 h时增殖效果最强。较低浓度的沙葱多糖（50~100μg/ml）抑制淋巴细胞分泌NO，随着浓度的加大，NO分泌量增加。沙葱多糖对淋巴细胞内iNOS 活性没有显著影响（P>0.05）。因此，沙葱多糖能够影响淋巴细胞的增殖，释放 NO 及 iNOS，并且呈现量效和时效关系，说明沙葱多糖对绵羊外周血淋巴细胞具有免疫调节作用。     

硫酸化酵母葡聚糖对鸡淋巴细胞的影响

为研究硫酸化酵母葡聚糖(SCG)对鸡细胞免疫的影响,将7种浓度SCG单独或与Con A、LPS加入到鸡脾脏淋巴细胞的培养体系中,培养48 h时用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化;将5种浓度的SCG分别与Con A加入到鸡脾淋巴细胞的培养体系中,培养24 h后收集细胞培养上清液,测定IL-2和IFN-γ的含量。结果显示,SCG浓度在在250~2 000μg/m L时,SCG+Con A、SCG各剂量组随着多糖浓度的增加其A570值先增加后降低(P0.05);SCG+LPS各剂量组的A570随着多糖浓度的增加而降低,2 000μg/m L剂量组显著低于其他三组(P0.05);均具有显著的量效关系。SCG浓度在62.25~1 000μg/m L时,多糖组脾脏淋巴细胞体外培养上清液中IL-2与IFN-γ浓度,随着多糖浓度的增加其促进淋巴细胞分泌细胞因子的能力先增加后降低,具有明显量效关系;且均在250μg/m L时效果最好。结果表明,SCG在合适剂量能单独或协同Con A、LPS刺激鸡T、B淋巴细胞增殖,促进淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ,从而增强鸡的细胞免疫。     

壳寡糖对脂多糖诱导猪空肠上皮细胞氧化损伤的作用

本试验旨在通过脂多糖(LPS)诱导猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)来建立氧化应激模型,探讨壳寡糖(COS)的抗氧化作用效果。采用噻唑蓝(MTT)法检测LPS和COS对IPEC-J2作用12、24、48 h后细胞增殖活性的变化;选择适宜浓度LPS(1.0μg/m L)和COS(200μg/m L)作用于IPEC-J2,分为对照组、LPS组、COS组、LPS+COS组。采用Western Blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白的表达;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)的含量。结果表明:1.0μg/m L的LPS对IPEC-J2作用24 h,细胞增殖的抑制率为41.6%,为造模的最适浓度和作用时间;COS在一定浓度范围内对IPEC-J2有增殖作用,其浓度为200μg/m L时效果最佳,作用时间为24 h时,细胞增殖率达到126.3%。LPS+COS组较对照组的SOD、CAT活性和M DA含量差异不显著(P0.05),Nrf2和HO-1蛋白相对表达量显著升高(P0.05);LPS+COS组较LPS组的Nrf2蛋白相对表达量显著升高(P0.05),HO-1有升高趋势,但差异不显著(P0.05),SOD、CAT活性显著升高(P0.05),M DA含量显著降低(P0.05)。由此可见,LPS诱导IPEC-J2氧化应激,而COS可进一步促进Nrf2和HO-1蛋白的高表达,并提高抗氧化酶的活性,降低氧化产物含量,从而增强细胞对氧化应激的抵抗力,起到保护作用。     

白花蛇舌草多糖体外免疫活性研究

目的:探讨白花蛇舌草多糖对小鼠胸腺和脾脏体外免疫功能的影响。方法:采用MTT法研究不同浓度(500μg/m L、250μg/m L、200μg/m L、150μg/m L、100μg/m L、50μg/m L、25μg/m L)的白花蛇舌草多糖对体外培养的小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞的代谢及其与Con A或LPS协同诱导的转化作用、小鼠胸腺和脾脏巨噬细胞吞噬活性及自然杀伤细胞活性的影响。结果:白花蛇舌草多糖可显著提高脾脏巨噬细胞吞噬功能(P0.01),促进脾脏淋巴细胞代谢及其与Con A或LPS协同诱导的转化作用(P0.01),但对小鼠胸腺淋巴细胞代谢及其与Con A或LPS协同诱导的转化作用、小鼠胸腺巨噬细胞吞噬功能无显著性影响(P0.05);白花蛇舌草多糖能够显著增强小鼠胸腺和脾脏NK细胞活性(P0.01),并呈现明显的量效双向作用关系。结论:一定浓度范围内的白花蛇舌草多糖可提高小鼠脾脏和胸腺淋巴细胞、巨噬细胞和NK细胞的体外免疫活性。     

铁皮石斛对免疫抑制模型小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响

为了探究不同浓度的铁皮石斛对环磷酰胺(Cyclophosphamide,Cy)所致免疫抑制模型小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响,选取6周龄清洁级KM小鼠50只,体重18~22 g,全为雌性,随机分为对照组、免疫抑制组。每组各设5个重复,每个重复5只小鼠。免疫抑制组给予腹腔注射环磷酰胺(100 mg/kg·bw),对照组给予腹腔注射等量的生理盐水。1日1次,隔天注射,连续15 d。结果:铁皮石斛在终质量浓度5~135μg/mL范围内促进效果显著,其中作用48 h增殖幅度明显。对于小鼠脾脏T淋巴细胞而言,铁皮石斛浓度为20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL均能促进免疫抑制小鼠T淋巴细胞的增殖(P0.05),尤以浓度为20μg/mL时最佳。铁皮石斛浓度为80μg/mL时对于正常小鼠脾脏T淋巴细胞分裂增殖显著(P0.05)。对于小鼠脾脏B淋巴细胞而言,铁皮石斛浓度为40μg/mL时对免疫抑制小鼠脾脏B淋巴细胞增殖效果最佳。各浓度铁皮石斛OD值均高于单纯LPS刺激,且细胞增殖情况差异显著(P0.05),但对照组中3个铁皮石斛浓度差异不显著(P0.05)。结论:铁皮石斛浓度在40μg/mL、80μg/mL时能有效协同Con A、LPS刺激小鼠脾脏T、B淋巴细胞的增殖。     

天门冬多糖对猪脾淋巴细胞体外增殖的影响

试验旨在研究不同浓度的天门冬多糖(ASP),在ConA或LPS的协同刺激下对猪脾淋巴细胞体外增殖的影响。猪脾淋巴细胞体外培养体系中加入不同浓度的天门冬多糖使其终浓度为400、200、100、50、25、12.5μg/ml,在ConA(5μg/ml)或者LPS(10μg/ml)的协同刺激作用下,细胞培养24、48、72 h时,观察猪脾淋巴细胞增殖情况。结果表明,天门冬多糖及其协同ConA或LPS能显著或极显著的促进猪脾淋巴细胞体外增殖(P<0.05或P<0.01)。     

MTT法测定猪TF对犬淋巴细胞转化增殖的研究

无菌采集犬抗凝血,分离淋巴细胞并制备成不同浓度。应用正交试验,探讨不同浓度淋巴细胞、犊牛血清(FCS)、植物血凝素(PHA-P)对淋巴细胞增殖的影响。在此基础上,研究不同浓度猪转移因子(transferfactorTF)对犬淋巴细胞增殖的影响。结果表明:在犬淋巴细胞浓度为5×106个/mL,FCS为10%时,PHA-P为12.5μg/mL时,淋巴细胞增殖效果最佳。在最佳培养条件下,猪TF浓度在0.195～25mg/mL时,对犬淋巴细胞转化增殖均有明显促进作用,但猪TF单独或与PHA-P共同作用时对淋巴细胞增殖的最佳刺激浓度均为1.56mg/mL,且猪TF单独作用于淋巴细胞的效应优于与PHA-P的协同作用。试验结果证实,猪TF对犬淋巴细胞增殖有良好的刺激效果。     

壳寡糖替代抗生素对肉仔鸡生长性能及免疫功能的影响

研究日粮中添加壳寡糖替代抗生素对肉仔鸡生长性能及免疫功能的影响。试验选用1 080只1日龄罗斯308商品肉仔鸡公雏,分为6个处理,试验期为39d。结果表明,与对照组比较,饲喂添加100~200g/t的壳寡糖日粮,肉仔鸡的平均日增重和免疫器官的指数都显著高于对照组,Ig A、Ig G和Ig M含量显著增加,显著提高血清中GSH-Px活性并降低MDA含量;添加200~300g/t壳寡糖可使肉仔鸡空肠和回肠食糜中丙酸浓度以及异丁酸浓度提高;与抗生素(BMD)组对比,且日粮中添加100~200g/t的壳寡糖对肉仔鸡生长性能及免疫功能无显著性差异。上述结果表明,壳寡糖可以提高肉仔鸡的生产性能和免疫功能,调节肠道环境,并且可用于替代饲料中的部分抗生素,为无抗养殖提供科学依据。     

大豆异黄酮对高温下体外培养奶牛乳腺上皮细胞增殖和抗氧化能力的影响

本文旨在研究大豆异黄酮对高温下体外培养奶牛乳腺上皮细胞增殖和抗氧化能力的影响,采用细胞培养方法,将奶牛乳腺上皮细胞分为4组,分别在细胞基础培养基中添加0、10、100μg/m L和1000μg/mL的大豆异黄酮,各组细胞正常(37℃、5%CO2)培养48 h后,在42℃下处理1.5 h,再正常培养12 h检测相关指标。结果发现:(1)与0μg/mL组相比,100μg/mL和1000μg/mL大豆异黄酮组奶牛乳腺上皮细胞活性显著升高(P 0.05)。(2)与0μg/m L组相比,10～1000μg/mL大豆异黄酮组细胞活性氧(ROS)的浓度显著降低(P 0.05)。(3)与0μg/mL组相比,100μg/m L和1000μg/mL大豆异黄酮组细胞的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性显著升高(P 0.05),而乳酸脱氢酶(LDH)活性和一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量显著下降(P 0.05)。(4)与0μg/m L组相比,100μg/mL和1000μg/mL大豆异黄酮组细胞内Caspase3和Bax基因的相对表达显著降低(P 0.05),而Bcl-2基因的相对表达显著升高((P 0.05)。综上所述,大豆异黄酮能够通过增强奶牛乳腺上皮细胞的抗氧化能力,抑制细胞凋亡,进而促进细胞增殖。