均匀设计法优化牛皮杜鹃腋芽丛生芽苗及高频植株再生体系研究

以牛皮杜鹃嫩茎段为外植体,应用均匀设计法筛选最适合的培养基。结果表明,最适合嫩茎段腋芽丛生芽苗的诱导培养基为1/2 MS+2-ip 3.50mg/L+IAA 0.02mg/L+GA3 1.00mg/L,诱导率可达96%;生根培养基为MS(改良)+IAA 0.10mg/L+NAA 0.07mg/L,生根率可达98%。以再生植株的茎节为材料进行快繁的结果表明,在30d的一个培养周期内,增殖倍数平均达60以上。通过试验,建立了牛皮杜鹃腋芽丛生芽苗及高频植株的再生体系。     

基于均匀设计法优化苞叶杜鹃高效快繁体系研究

以苞叶杜鹃嫩茎段为外植体,应用均匀设计法筛选最适合的培养基,结果表明,最适合嫩茎段腋芽萌发生长及茎段生根的培养基为DR+IAA0.10mg/L+NAA0.08mg/L+GA31.90mg/L,再生率达99.3%以上。以再生植株的茎节为材料进行快繁,在45d的培养周期内增殖倍数平均达5以上,建立了苞叶杜鹃的高效快繁体系。     

羊踯躅嫩茎离体培养和植株再生

本研究以羊踯躅嫩茎为外植体,应用均匀设计法筛选其最适合的嫩茎基部直接再生芽苗和生根培养基.结果表明,最适合羊踯躅嫩茎基部直接再生芽苗的诱导培养基为:1/4DR+ 2ip3.75 mg/L+IAA 0.03 mg/L+KT 1.30 mg/L,诱导率为99.8％;生根培养基为:1/4DR+ZT 0.06 mg/L+ NAA 0.02 mg/L,生根率达99.0％以上.以再生植株茎节为材料进行快繁的结果表明,在28 d的培养周期内,每段增殖倍数平均达5以上.成功建立了羊踯躅的离体培养和植株再生体系,所建立的植株再生体系可以满足羊踯躅工厂化育苗的需要.     

软枣猕猴桃优良品系“2008-07”组织培养繁殖技术研究

【目的】以软枣猕猴桃优良品系"2008-07"嫩茎段为外植体,研究其组织培养繁育技术。【方法】采用均匀试验设计,通过组培快繁试验,对影响软枣猕猴桃优良品系"2008-07"嫩茎段腋芽萌发生长和生根的6-BA、IAA、IBA等生长调节物质的作用及其用量进行分析与筛选。【结果】适宜软枣猕猴桃嫩茎段腋芽萌发生长、生根的培养基为基本培养基+0.12mg/L 6-BA+0.04mg/L IAA,在此条件下植株再生率为98.7%。再生植株的移栽成活率达99.5%以上。【结论】建立了软枣猕猴桃优良品系"2008-07"嫩茎段组培快繁育苗体系,该体系适合于软枣猕猴桃种苗的工厂化生产。     

毛毡杜鹃离体培养及种质试管保存体系的建立

【目的】建立毛毡杜鹃离体培养及种质试管保存的适宜体系。【方法】以毛毡杜鹃新生嫩芽为外植体,应用均匀设计法筛选其最适合的基部直接再生芽苗培养基、生根培养基及种质试管保存培养基。【结果】毛毡杜鹃最适合的基部直接再生芽苗诱导培养基为:DR+ZT 3.00 mg/L+IAA 0.03 mg/L,分化率达100%;生根培养基为:MS(改良)+IAA0.10 mg/L+IBA0.10 mg/L+NAA0.05 mg/L+KT 0.10 mg/L,生根率达97%以上;试管保存培养基为:1/10 MS+B93.50 mg/L+根皮苷2.60 mg/L,保存时间可达38个月以上。以再生植株茎节为材料进行快繁的试验结果表明,在30 d培养周期内,每段增殖倍数平均达6倍以上。在常温条件下,采取"低营养矮化延缓生长"的方法在试管内保存毛毡杜鹃种质,成功地建立了毛毡杜鹃的离体培养和种质试管保存体系。【结论】所建立的离体培养体系及种质试管保存体系可以满足毛毡杜鹃离体繁殖和种质保存的需要。     

羊踯躅嫩叶离体培养和植株高效再生技术研究

【目的】建立羊踯躅嫩叶离体培养及植株高效再生体系。【方法】以羊踯躅新生嫩叶为外植体,筛选嫩叶愈伤组织诱导、再分化及生根培养基,并以再生植株茎节为试材,建立高效植株再生体系。【结果】最适合羊踯躅嫩叶愈伤组织诱导的培养基为1/2 DR+2.40 mg/L 2ip+0.80 mg/L NAA,诱导率为99.5%;愈伤组织再分化的最佳培养基为1/2 DR+2.90 mg/L 2ip+0.01 mg/L NAA+1.75 mg/L KT,分化率为99.7%;适宜生根的培养基为1/4 DR+0.06 mg/L ZT+0.02 mg/L NAA,生根率达99.0%。利用再生植株茎节的快繁结果表明,在28 d的培养周期内,每节段平均增殖达5倍以上。【结论】成功建立了羊踯躅嫩叶愈伤组织诱导、再分化芽苗和植株高效再生体系,可以满足羊踯躅工厂化育苗的需要。     

香樟涌金的组织培养和植株再生

[目的]探讨香樟涌金茎段组培快速繁殖方法,为工厂化生产香樟涌金组培苗提供技术支持.[方法]以香樟涌金带腋芽茎段(长1.0～1.5 cm)为外植体,进行腋芽诱导、丛生芽增殖及植株再生研究.[结果]香樟涌金腋芽在诱导培养基MS+6-BA l.0 mg/L+IBA 0.02 mg/L中萌发率达100.0％,并能正常伸长展叶;在MS+6-BA 3.0 mg/L+IAA 0.05mg/L培养基中腋芽能正常生长并增殖,平均有效芽数6.5个;在1/2MS+IBA 0.05 mg/L+NAA 0.03 mg/L生根培养基中培养30 d后,有87.6％的丛生芽生根,移栽成活率达90.0％.[结论]MS+6-BA l.0 mg/L+IBA 0.02 mg/L、MS+6-BA 3.0mg/L+IAA 0.05 mg/L、1/2MS+IBA 0.05 mg/L+NAA 0.03 mg/L可分别作为香樟涌金茎段腋芽最佳的诱导培养基、适宜的继代与增殖培养基和相对适合的生根培养基.     

杜仲愈伤组织诱导和植株再生体系的建立

【目的】研究在BA、NAA、IBA、2,4-D等激素作用下,杜仲愈伤组织诱导、愈伤组织诱导丛生芽及丛生芽诱导生根各阶段的最佳培养基配方,建立杜仲植株再生体系,为杜仲转基因研究提供基础材料。【方法】以杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段为外植体,使用BA、NAA、IBA、2,4-D等激素,配制成不同质量浓度的培养基,进行杜仲愈伤组织诱导,同时分析愈伤组织诱导丛生芽和丛生芽诱导生根培养基的最佳配方,建立杜仲植株的再生体系。【结果】杜仲愈伤组织诱导的培养基分别为:成熟胚MS+BA 2.0mg/L+NAA 2.5mg/L,诱导率77.8%;幼嫩胚MS+BA 0.5mg/L+2,4-D 2.0mg/L,诱导率88.9%;叶片MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L,诱导率100%;茎段MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,诱导率为100%。愈伤组织诱导不定芽形成的适宜培养基为MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L,不定芽诱导率为88.9%,增殖系数为3±1;杜仲在1/4MS的基本培养基中生根最好,生根率达80%,激素的存在反而会抑制生根。【结论】杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段均可通过愈伤组织途径诱导不定芽的形成,并诱导生根,建立杜仲愈伤组织再生体系,但不定芽的增殖系数较低。     

木薯良种GR891组织培养与快速繁殖技术

【目的】探讨木薯良种GR891的组织培养与快速繁殖技术。【方法】以越冬木薯种茎及其新长嫩茎的腋芽或顶芽为外植体,探讨不同消毒时间、6-BA和NAA浓度对木薯不定芽诱导或增殖、生根的影响。【结果】以带顶芽或腋芽的木薯幼嫩茎段作外植体进行不定芽诱导培养比较适宜;接种前采用0.1% 升汞消毒10~15 min,不定芽和愈伤组织诱导率均最高,分别为57.1%和61.9%。不定芽诱导培养基以MS+0.5 mg/L 6-BA最佳,不定芽诱导率最高（72.2%）,芽生长较好;丛生芽增殖培养基以MS+0.5~1.0 mg/L 6-BA为宜,其增殖倍数达3.0倍,并形成健壮的丛生芽;生根培养基以MS+0.3~1.5 NAA mg/L最佳,生根率可达90.0%以上。将生根苗移栽至混合基质（60%塘泥+40%河沙）中,约1周后可萌生新根,移栽成活率达95.0%以上。【结论】在MS培养基中添加低浓度6-BA,有利于不定芽的诱导和增殖;6-BA和NAA配合使用均不利于不定芽的诱导和增殖;不定芽的诱导和生长无需添加外源NAA。0.9 mg/L NAA对木薯不定芽生根效果较好,而6-BA对不定芽生根有一定抑制作用。     

参薯‘明淮1号’组培快繁技术研究

【目的】建立参薯‘明淮1号’组培快繁体系。【方法】以参薯‘明淮1号’带腋芽嫩茎为外植体,应用均匀设计和回归分析方法对‘明淮1号’组培的初代培养、继代增殖培养和生根培养等阶段中所需的不同激素进行配比优化研究。【结果】最适初代腋芽诱导培养基为:MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+PVP 100 mg/L+琼脂粉4.0 g/L+蔗糖30 g/L,出芽时间短,诱导率达92%同时可诱导丛生芽形成;最适继代增殖培养基为:MS+6-BA2.33 mg/L+NAA 0.1 mg/L+PP3330.2 mg/L+琼脂粉4.0 g/L+蔗糖30 g/L,增殖系数可达3倍左右;最适诱导生根培养基为:1/2 MS+IBA 0.34 mg/L+IAA 0.5 mg/L+AC 1.0 g/L+琼脂粉4.5 g/L+蔗糖20 g/L,生根率达95%,生根效果好。【结论】该试验结果为‘明淮1号’的推广和产业化发展奠定基础。     

青岛大花脱毒种苗快繁技术研究

【目的】探讨啤酒花品种青岛大花脱毒苗植株再生技术,以期获得青岛大花脱毒苗快速繁殖的便捷途径。【方法】以青岛大花脱毒苗的单芽茎段为外植体,分别以不同水质（自来水、凉开水、蒸馏水、当地井水）、不同前茬和简易营养液处理（带芽根茬、带芽根茬+简易营养液、新鲜培养基）及不同激素组合进行芽诱导和植株再生。【结果】在芽诱导及植株再生培养过程中,以当地井水进行外植体培养的效果较好,虽然其诱导芽数、新增芽数、增殖倍数稍低于对照蒸馏水,但生根茎段数、生根率、平均根长、茎粗和株高均最高,其次为凉开水处理;自来水处理的生根茎段数、诱导芽数、新增芽数、增殖倍数、株高等均明显低于蒸馏水对照。在前茬培养基上添加10 mL简易培养液对外植体培养20 d, 其诱导芽数、新增芽数、增殖倍数、株高均明显高于新鲜固体培养基处理,且叶色均浓绿。在不同激素组合中,随着6-BA、IAA浓度的增加,单芽茎段的诱导芽数、生根率、增殖倍数呈先降低后增加的趋势,其中以原继代培养的激素组合6-BA 0.1 mg/L +IAA 0.2 mg/L的诱导芽数、生根率、增殖倍数最高,其次为激素组合6-BA 0.01 mg/L +IAA 0.02 mg/L。【结论】在外植体诱导和植株再生培养中,可用当地井水、凉开水作为培养基介质取代蒸馏水;继续利用前代培养基并留茬、再适量添加简易培养液对外植体进行培养,可有效提高脱毒苗的增殖倍数,且再生苗质量不受影响;可使用含低浓度激素组合（6-BA 0.01 mg/L+IAA 0.02 mg/L）进行脱毒试管苗芽诱导和植株再生培养,从而节省生产成本。     

薄皮核桃组织培养与快速繁殖

[目的]研究薄皮核桃组织培养与快速繁殖的方法.[方法]以薄皮核桃腋芽为外植体,DKW为基本培养基,通过不同的激素种类和浓度配比,建立薄皮核桃组培快繁体系.[结果]组织培养与快速繁殖最适培养基为:启动培养基:DKW/MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.01 mg/L;增殖培养基:DKW+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.05 mg/L;壮芽培养基:DKW+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.05 mg/L;生根培养基:1/2 DKW+IBA1.0mg/L,生根率可达70;以上.[结论]研究筛选获得适宜薄皮核桃快繁的最佳培养条件,为建立新疆薄皮核桃快繁体系、扩大优质薄皮核桃种植规模奠定一定基础.     

兰州百合快速繁殖研究

【目的】优化兰州百合组织培养体系,提高其植株再生率,建立高频植株再生体系。【方法】采用正交试验设计,以鳞片为外植体,以MS和1/2MS培养基为基本培养基, 附加不同浓度NAA（0.2~1.0 mg/L）、 6-BA（0.5～2.0 mg/L）、KT（0.1～1.0 mg/L）、IBA（0.2~1.0 mg/L）、IAA（0.2～1.0 mg/L）, 对兰州百合进行鳞茎诱导、增殖和生根培养,筛选最佳激素配比。【结果】6-BA浓度过低或过高均不利于小鳞茎形成,当1.0 mg/L 6-BA与0.2～1.0 mg/L NAA配比时,鳞茎诱导率和平均生成鳞茎数较高;随着NAA浓度的增加,平均生成鳞茎数不断增加,其中以1.0 mg/L 6-BA＋1.0 mg/L NAA组合的平均小鳞茎最多,为5.9个。与0.5～1.0 mg/L KT+0.2 NAA mg/L组合相比,添加0.5～1.5 mg/L 6-BA+0.5～1.0 mg/L KT或0.2 NAA mg/L组合的培养基更利于芽增殖,但其丛芽长势较弱,其中以添加0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基的丛芽长势和小鳞茎长势较好,平均分化鳞茎较多。在以MS、1/2MS为基本培养基、分别添加0.2～1.0 mg/L IAA或IBA的培养基中,随着IAA或IBA浓度的升高,鳞茎生根率不断降低,根质量不断下降,而平均根数和根长表现有所不同。从根的质量来看,MS培养基的根质量不如1/2MS培养基;而在1/2MS培养基中,1/2MS与IBA组合优于与IAA组合。【结论】鳞茎诱导的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+NAA 0.5～1.0 mg/L,不定芽增殖的最适培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,最佳生根培养基为1/2MS+0.2 mg/L IBA,生根效果最好,生根率为100.0%,根中等长度、粗壮,质量最好。     

广西优良珍贵树种灰木莲的组织培养

【目的】探索灰木莲组培快繁体系,为灰木莲的进一步开发和利用提供参考依据。【方法】以灰木莲盆栽苗的带芽茎段为外植体,以MS为基本培养基,通过添加不同种类、不同浓度植物生长调节剂,研究不同培养基对腋芽萌发、芽增殖及生根的影响。【结果】1~5号培养基均可以诱导灰木莲腋芽萌发,其中3号培养基MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L腋芽萌发速度最快,芽的诱导率89.3%;添加KT（Kinetin,激动素）的10~13号培养基增殖系数为2.2~2.7,没有添加KT的6~9号培养基增殖系数为1.8~2.2,11号培养基 MS+6-BA 0.3 mg/L +NAA 0.05 mg/L+KT 1.0 mg/L芽的增殖系数可达2.7,为最适宜的增殖培养基;添加生长调节剂浓度在0.5 mg/L以上的17~21号培养基能诱导灰木莲组培苗生根,其中NAA浓度为0.5、1.5 、2.0 mg/L生根率分别为33.3%、45.4%、58.3%,21号培养基 1/2MS+NAA 2.0 mg/L上生根率最高。【结论】初步建立灰木莲组织培养体系,组培苗的芽诱导率和增殖率较高,苗木长势良好。     

红茄子叶的不定芽诱导及植株再生

【目的】研究不同激素浓度和组合对红茄不定芽及根诱导的影响,建立红茄的高频再生体系,为开展茄子的遗传转化研究奠定基础。【方法】以红茄子叶为外植体,采用0.5~2.0 mg/L 6-BA、0.1~0.5 mg/L IAA激素组合对不定芽进行诱导,采用0~0.5 mg/L IAA对根进行诱导,筛选出最佳的分化培养基和生根培养基。【结果】在不定芽诱导培养基中,当6-BA浓度在0.5~2.0 mg/L时,随着浓度增加,不定芽分化率逐渐升高;当 IAA浓度在0.1~0.5 mg/L 时,随着IAA浓度的增加,不定芽萌发率呈先增加后降低趋势,其中以添加6-BA 2.0 mg/L、IAA 0.3 mg/L的诱导效果最好,分化率高达86%。在根诱导培养基中,随着IAA浓度的增加,根诱导率呈先降低后升高趋势,诱导率可达100.0%。【结论】红茄子叶不定芽诱导最佳培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IAA;不定芽生根最佳培养基为MS+0.1 mg/L IAA。     

黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的组织培养快速繁殖

【目的】建立黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的组织培养快速繁殖体系。【方法】以黄芩的幼茎、幼叶及叶柄为外植体,在MS培养基上添加不同质量浓度的6-BA、2,4-D与NAA诱导愈伤组织及再生芽;在1/2 MS培养基上添加IAA、IBA或NAA激素,单独或者组合使用,诱导黄芩试管苗生根。【结果】幼叶和叶柄容易褐化死亡,而幼茎显示很好的脱分化和再分化效果;BA与NAA组合可以诱导幼茎外植体脱分化与再分化,而BA与2,4-D组合只能诱导愈伤组织发生。IAA诱导生根率最高,但是茎基部会形成愈伤组织,后期无法驯化成活;IBA及NAA均可以诱导根的发生,但是以IBA效果为佳。【结论】幼茎为最佳外植体,MS+BA0.5mg/L+NAA 0.5mg/L为最佳的愈伤组织诱导及再生芽的分化培养基。1/2MS+IBA 0.1mg/L为最佳的试管苗生根培养基,生根率为70.3%。     

双单倍体南瓜后代子叶离体再生植株研究

【目的】探索一种快速扩繁南瓜双单倍体植株的技术,以扩大双单倍体植株的数量,提高其育种效率。【方法】以双单倍体南瓜后代子叶为外植体,在MS培养基中分别添加不同质量浓度的6-BA（1.0,4.0 mg/L）和NAA（0.05,0.1,0.2,0.5,1.0 mg/L）,筛选最佳组合;在此基础上,继续添加不同质量浓度的2,4-D（0.5,1.0,1.5,2.0 mg/L）,筛选3种激素的最佳组合。在MS＋6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L的不定芽诱导培养基上,研究其对不同苗龄子叶的诱导效果。将不定芽接种在含不同质量浓度NAA (0.05, 0.1, 0.2, 0.5 mg/L)的MS生根培养基上,比较生根率和根系生长势。【结果】在诱芽培养基中,添加2种激素时,以6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L的MS培养基诱导率最高,为66.67％,分化系数为3.89;添加3种激素时,以6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L＋2,4-D 1.5 mg/L的MS培养基诱导率最高,达80.95％,分化系数为4.12。当子叶展开后苗龄为3 d时,不定芽诱导率相对较大,为77.42％。不定芽在MS+0.1 mg/L NAA培养基上生根效果最好,根系生长健壮,生根率达100%。【结论】双单倍体南瓜后代子叶离体再生的适宜激素质量浓度组合为MS＋6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L;以展开后3 d苗龄的子叶作为外植体诱导效果最好;MS+0.1 mg/L NAA是不定芽诱导生根的最适培养基。     

建立甜高粱(Sorghum bicolor)高频、高效再生体系的研究

【目的】建立能源植物甜高粱(Sorghum bicolor L.Moench)的高频、高效离体培养再生体系,为遗传转化奠定基础。【方法】以甜高粱品种凯勒的芽顶端分生组织为外植体,探讨在甜高粱直接诱导丛生芽的培养过程中,无菌实生苗的适合苗龄,适宜的激素组合与比例;并将获得的最佳培养方法应用于其它两个甜高粱品种:M-81E和意达利,以研究此途径的基因型依赖性。【结果】利用3d苗龄的芽顶端分生组织作为外植体容易获得较高的分生组织膨大率。甜高粱丛生芽诱导的适宜激素组合为4.0mg·L-16-苄基腺嘌呤+0.5mg·L-12,4-二氯苯氧乙酸+0.5mg·L-1噻重氮苯基脲,可获得91%的丛生芽诱导频率。适合甜高粱快速生根的激素配方为0.5mg·L-1萘乙酸。通过芽顶端分生组织直接诱导丛生芽途径,每个外植体可诱导出上百个芽,最终产生30—40株再生苗。M-81E和意达利具有与凯勒相似的丛生芽诱导频率及效率。【结论】本研究成功地建立了甜高粱的高频、高效离体培养再生体系,且具有外植体来源不受限制,基因型依赖性弱,遗传稳定性好的优点。