猪卵泡卵母细胞体外受精研究

采用３种获能方法（常规获能法、肝素获能法、钙离子载体获能法）进行猪冷冻附睾精子的外获能研究，其相应的受精率分别为４２．５％，３２．０％，３０．８％，卵裂率分别为１８．６％，１５．７％，１６．１％，受精率、卵裂率间均无显著差异。精子与ＳＭＴ－ＰＧＨ基因质粒混合培养后引起卵裂率下降，实验组的卵裂率（７．５％）显著地低于对照组的水平（２１．０％）．３９℃与３７℃下受精，其受精率分别为３８．８％，１８．７     

猪卵泡卵母细胞体外受精研究

采用３种获能方法（常规获能法、肝索获能法、钙离子载体获能法）进行猪冷冻附睾精子的体外获能研究，其相应的受精率分别为４２．５％，３２．０％，３０．８％，卵裂率分别为１８．６％，１５．７％，１６．１％。受精率、卵裂率间均无显著差异。精子与ＳＭＴ－ＰＧＨ基因质粒混合培养后引起卵裂率下降，实验组的卵裂率（７．５％）显著地低于对照组的水平（２１．０％）．３９℃与３７℃下受精，其受精率分别为３８．８％。１８．７％；多精受精率分别为８９％，３０．７％；卵裂率分别为２６．９％，３．７％，３９℃组的受用率、卵裂率均显著高于３７℃组水平，而多精受精率则极显著地低于３７℃组。发育培养液Ａ液、Ｂ液中的卵裂率分别为２４．３％，１３．０％，两者无差异。在兔输卵管内培养猪体外受精卵，卵裂率为４６．７％，极显著地高于对照组水平（１０．９％）．受精卵体外培养１６～１７ｈ后离心，可观察到１８．４％的原核形成率，这与受精卵体外培养的卵裂率（１９．５％）相当。     

体外成熟猪卵母细胞的体外受精研究

实验采用体外成熟的猪卵巢卵母细胞，将鲜精以前培养结合咖非因法获能后进行ＩＶＦ实验．体外成熟卵ＩＶＦ后的卵裂率为２４．７％～３８．４％，与目前文献报道的近似；授精时精子浓度为２×１０５／ｍＬ，１×１０６／ｍＬ和５×１０６／ｍＬ体外受精后的卵裂率分别为４０．８％（８２／２０１）．４５％（８５／１８９）和３０．５％（５０／１６４）．前二者无显著差异，但都与最后一组差异显著．我们认为，在本实验条件下，体外受精时适当的精子浓度要比目前常用的１×１０６／ｍＬ低．我们将肝素结合咖啡因的精子在能方法与前培养结合咖啡因法进行了比较，卵裂率分别为１０．７％（９／８４）和４０％（３２／８０），前者虽然在牛体受精实验中很成功．但在猪效果差．将体外成熟体外受精卵移入同步的受体猪输卵管后．有一头母猪成功地产下了５只“试管猪’，存活３只．     

肝素和羊血清对绵羊附睾精子体外获能的影响

通过对体外受精试验检验了肝素和羊血清有绵羊附睾精子体外获能中的作用。结果表明,在获能液ＳＯＦＭ＋０．６％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）中加入５、１５、２５、５０ＩＵ／ｍｌ肝素不能有效诱导精子获能,所得卵裂率（１６．１％,１１．２％,１４．５％,１５．８％）与不加肝素的对照组（１０．０％）相比,差异不显著;获能液ＳＯＦＭ＋２０％羊血清（ＳＳ）对精子获能效果优于ＳＯＦＭ＋０．６％ＢＳＡ＋肝素,二者卵裂率差异显     

肝素和羊血清对绵羊附睾精子体外获能的影响

通过体外受精试验检验了肝素和羊血清在绵羊附睾精子体外获能中的作用。结果表明,在获能液ＳＯＦＭ＋０．６％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）中加入５、１５、２５、５０ＩＵ／ｍｌ肝素不能有效诱导精子获能,所得卵裂率（１６．１％,１１．２％,１４．５％,１５．８％）与不加肝素的对照组（１０．０％）相比,差异不显著;获能液ＳＯＦＭ＋２０％羊血清（ＳＳ）对精子获能效果优于ＳＯＦＭ＋０．６％ＢＳＡ＋肝素,二者卵裂率差异显著（５０％ＶＳ１４．７％Ｐ＜０．０５）;获能液ＳＯＦＭ＋２０％ＳＳ中再加入５、１５、２５ＩＵ／ｍｌ肝素可明显增强获能效果,所得卵裂率（８１．４％,８０．４％,８１．３％）与不加肝素的对照组（４６％）相比,差异显著（Ｐ＜０．０５）。     

山羊小腔卵泡卵母细胞的体外成熟和体外受精

采集繁殖和非繁殖季节山羊卵巢，回收大腔（３～６ｍｍ）和小腔（＜２ｍｍ）卵泡卵母细胞，进行体外成熟和受精，结果如下：①繁殖季节的大腔和小腔卵泡卵母细胞体外成熟率（６８．４％，２７．５％）均显著（Ｐ＜０．０５）高于非繁殖季节（５２．５％，２０．６％）；②１和１．５周岁龄羊与成年羊相比，前两者的小腔卵泡卵母细胞采集数显著（Ｐ＜０．０５）多于后者（２５．６，２２．５：１５．ｌ），但卵母细胞体外成熟率无显著差异（Ｐ＜０．０５）；③随卵母细胞直径增加，其体外成熟率呈显著上升趋势；④与加新生犊牛血清和生殖激素在颗粒细胞悬浮液中培养相比，加发情山羊血清和激素在颗粒细胞单层上培养可显著（Ｐ＜０．０５）提高小腔卵泡卵母细胞体外成熟率（２０．８％：３４．５％）；⑤将体外成熟的小腔卵泡卵母细胞与体外获能精子进行受精，其受精率为３５．７％（５１／１４３）。     

猪卵母细胞的体外成熟

取自猪卵巢含卵丘细胞且胞质均匀的、胞质不均匀和不含卵丘细胞胞质均匀３类卵母细胞，台盘蓝染色的存活率分别为１００％，１０％和４０％，３者差异极显著。Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ４种培养液培养的成熟率分别为１６．２％，６１．５％，５５．２％，４１．５％，差异极显著。Ｅ，Ｃ，Ｆ３种培养液培养的成熟率分别为３５．５％，４７．８％，５２．６％，在Ｅ培养液中加入ＰＭＳＧ和Ｅ＿２能显著地提高成熟率。Ｃ液与卵泡液［加入２×１０￣（－６）ｍｏｌ／（Ｌ·ｓ）ＦＳＨ］培养的成熟率分别为５０％，４４．４％，受精后的卵裂率分别为１６％，１０％，成熟率、卵裂率间均无显著差异。卵母细胞体外成熟培养３６，４０，４４ｈ后授精，其相应的受精率分别为２６．７％，４４．４％，４５．８％；卵裂率分别为０．３０％，２０％；以培养４０，４４ｈ的效果稍好，但三者差异不显著。     

不同因素对牛卵母细胞胞质内精子注射效果的影响

采用胞质内精子注射法（ICSI）构建牛显微受精胚胎,探讨卵母细胞成熟培养时间、精子状态及精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮（PVP）浓度对牛卵母细胞胞质内显微受精（ICSI）卵体外发育的影响。结果显示：成熟培养20 h、24 h和28 h的卵母细胞用于ICSI时,ICSI卵的形态完整率分别为94.6%（175/185）、97.2%（173/178）和96.4%（189/196）（P〉0.05）;成熟培养24 h和28 h的卵母细胞,其ICSI卵的卵裂率（73.4%和70.9%）和囊胚发育率（31.8%和29.6%）显著高于成熟培养20 h的卵母细胞（61.1%和20.6%）（P〈0.05）。对成熟培养24 h的卵母细胞注射获能精子时,ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率（72.7%和31.4%）高于未获能精子组（69.4%和29.3%）和不运动精子组（71.5%和30.4%）,但无统计学差异（P〉0.05）。采用含5%,10%和15%PVP的精子操作液处理获能精子后对成熟培养24 h的卵母细胞进行ICSI操作,PVP浓度为5%和10%时,ICSI卵的卵裂率（73.2%和66.9%）和囊胚发育率（32.7%和29.7%）差异不显著（P〉0.05）,但二者均显著高于15%PVP浓度组的卵裂率和囊胚发育率（51.0%和16.3%）（P〈0.01）。结论认为,选用获能精子,并使用含5%PVP的精子操作液进行处理,对成熟培养24 h的牛卵母细胞进行ICSI操作,有利于ICSI卵的体外发育。     

猪精子的体外获能与体外受精

通过5个实验研究了应用咖啡因，肝素和I－A23187促进猪精子体外获能的效果，比较了不同受精次数和不同种类的精液进行猪卵子体外受精的效果，试验表明，用肝素和咖啡因协同作用，猪精子体外获能的效果好，采用2－3次受精法进行体外受精可以提高受精率，使用新鲜精液，新鲜附睾精液或冷冻附睾精液进行体外受精，其效果差异不显著。     

波尔山羊羔羊超数排卵及体外受精的研究

本试验探索波尔山羊羔羊超数排卵的可行性及体外受精效果。应用4种不同的促性腺组合,对16只7周龄的波尔山羊进行超排,并对采集的卵子实施体外受精。共获得卵母细胞918枚,其中超排处理Ⅰ组到Ⅳ组的可用卵母细胞数分别为49,87,429,293枚,各组间差异显著（0．01〈P〈0．05）。卵母细胞进行体外培养24h后与上游法获能的精子体外受精,48h后各组的卵裂率分别为27％,21％,60．2％,69％,其中CIDR＋PMSG＋FSH处理组、GnRH＋FSH处理组、PMSG＋FSH处理组差异极显著（P〈0．01）;6d到10d各组囊胚率分别为7％,6．5％,18％,13％,PMSG＋FSH处理组、GnRH＋FSH处理组、CIDR＋PMSG＋FSH处理组差异极显著（P〈0．01）。结果表明,CIDR＋FSH处理组和CIDR＋PMSG＋FSH处理组能显著提高超排效果,两组获得的卵子受精后的卵裂率和囊胚率高于其他组。     

山羊胚胎体外培养和移植的研究

用FSH、LH、PMSG、HCG对40只山羊进行超数排卵处理，平均每只排卵21．5枚，回收11．5枚胚胎。超数排卵和卵子回收数，FSH分别为24和14枚，PMSG为19和9枚。将正常的30枚1细胞，12枚2细胞和45枚4细胞胚胎在TCM──199培养液，5％CO2和38．5℃环境中培养60－78小时，65．23％的胚胎可发育至囊胚，移植6只受体羊。妊娠检查已孕3只。     

牛卵母细胞体外培养成熟前后及体外受精卵SDH的电镜细胞化学研究

本文用Kerple-Fronius和Hajos的电镜细胞化学方法,对牛卵巢2-5mm卵泡中的卵母细胞及体外培养成熟卵和体外受精卵,进行了琥珀酸酶(SDH)定位及活性变化的研究.观察结果培养前的卵母细胞酶活性较明显,主要定位于线粒体膜上,内脊上也有少量的定位.体外培养成熟卵线粒体上的酶活性明显减弱.而体外受精卵在线粒体的膜及内脊上都有很强的酶活性定位.结果表明,牛卵母细胞的SDH活性随卵母细胞的成熟过程减弱,随受精过程增强. 本文还从超微结构角度上,对酶活性变化的原因进行了讨论     

初情期前枫泾小母猪超数排卵及其胚胎发育研究

２４头初情期前的枫泾小母猪以ＰＭＳＧ、ＨＣＧ进行超排处理,平均获得２３．４枚卵子,人工授精后２８￣５０ｈ超排的卵母细胞的受精率为９８．１％,受精卵发育至桑椹胚和囊胚的比例为８９．７％。采用外科手术将１８０枚受精卵移植至８头同期发情的枫泾母猪子宫,其中有５头妊娠,产仔４４头,胚胎移植妊娠率为６２．５％     

中国黄牛卵巢卵母细胞体外成熟与体外受精的研究

自屠宰场和临时屠宰的黄牛体内取卵巢2批共25次,黄牛97头,共得可用卵巢卵母细胞657个。用TCM—199加雌激素(FSH、LH、雌二醇—17β)培养于5％CO_2与95％空气的39℃的CO_2培养箱中,使第1批成熟率达到55.04％,第2批成熟率达到61.7％。第1批受精率达到61.97％,移于兔输卵管中发育到卵裂,移于羊输卵管中发育到晚期桑桩胚和早期囊胚。第2批废卵率为38.3％;第10次的体外培养发育率为23.8％;羊输卵管培养发育率达到91％。利用肝素(0.005mg/ml)使精子获能,授精时的精子浓度为25×10~6/ml。用小滴培养法(小滴量为50μl)加盖无菌石蜡培养。结果证明中国老龄黄牛的卵巢还是有利用价值的。     

成熟培养基中添加成分对哺乳动物体外受精的影响

概述了在成熟培养基中添加成分，包括ＬＨ，ＦＳＨ，ｈＣＧ，Ｅ２促乳素，表皮生长因子，颗粒细胞以及血清等对卵母细胞体外成熟及随后的体外受精与体外发育能力的影响，并对其作用机理进行了初步探讨。     

对昆明白杂种鼠胚胎体外培养的实验研究──2细胞期至卵圆筒期

利用ＣＭＲＬ—１０６６和国产其它药品对昆明白杂种小鼠２—细胞期的胚胎，进行了体外培养试脸，成功地将２—细胞胚胎在体外培养条体下，使之生长发育到卵圆筒阶段。从２—细胞期开始计算，囊胚形成率为７０％，卵化率为３０％，附植率为２％，卵圆筒期胚胎形成率为１％。试验发现，把２—细胞期小鼠胚胎体外培养到卵圆筒期比体外发育到同阶段推迟１～２天，此卵圆筒期胚胎的形成率与国外报道的２４％相比仍然很低，其原因估计可能为：１）小鼠的品种；２）国产药物的纯度；３）ＣＯ２条件不同而造成。     

乳酸钠对小鼠1—细胞胚胎体外发育的影响

小鼠 1-细胞胚胎在含10.8,16.2,21.6和32.4 mM 乳酸钠不同 Whitten's 液中培养时,分别有2.6%,172%,8.5%和0%的胚胎发育到扩展囊胚。在4种培养液中均有60%以上的胚胎完成了第1次卵裂,发育到2-细胞期,但以后的发育则有明显差异。培养液中较高浓度乳酸钠的存在,可能是造成小鼠胚胎体外培养的“2-细胞早期阻断”的原因之一。     

不同促精子活动剂对水牛卵母细胞体外受精及随后胚胎发育的影响

主要探讨精子活动促进剂对水牛Bubalus bubalis卵母细胞体外受精及随后胚胎发育的影响. 来自屠宰场水牛卵巢的卵母细胞和卵丘细胞复合体,在体积分数为5%CO2 的培养箱中培养24～26 h,然后通过体外受精测定其受精和胚胎发育能力. 试验1解冻的精子用50 g/mL的胰蛋白酶处理30 min,然后进行受精;试验2受精在含不同浓度咖啡因 (0, 2.5, 5.0 和 10.0 mmol/L)的受精液中进行;试验3在含不同浓度的钙离子载体A23187 (0, 0.1, 1.0 和 2.5 μmol/L)的受精液中进行体外受精;试验4在PHE、咖啡因和A23187不同组合(空白, PHE, PHE+2.5 mmol/L咖啡因+2.5 μmol/L A23187和PHE+2.5 μmol/L A23187) 的受精液中进行体外受精. 试验结果表明,精子用胰蛋白酶处理后的受精卵囊胚发育率显著下降 (12.5%和2.6%,P<0.05),而用咖啡因和钙离子载体A23187处理,对卵母细胞的卵裂率和囊胚发育率没有明显影响. 在体外受精中PHE和钙离子载体的组合使用能提高受精卵的胚胎发育率,而高浓度的咖啡因则降低卵母细胞的卵裂率和胚胎发育率.     

不同品系小鼠精子冷冻及冻融精子体外受精的研究

采用小鼠精子冷冻、冻融精子体外受精的方法,进行小鼠保种、引种、生物净化及品系标准化的可行性研究,并初步探究小鼠精子冷冻的影响因素。实验选用同一年龄5种不同品系小鼠分别进行精子冷冻、复苏,并比较各品系冷冻效果及冻融精子的体外受精(IVF)率。结果显示,冷冻后各品系小鼠精子复苏存活率约在15%～50%之间;冻融小鼠精子体外受精结果随遗传背景的不同差异显著,受精率分别为:KM小鼠68.4%、ICR小鼠30.3%、DBA/2J小鼠47.2%、C57BL/6J小鼠6.8%、BALB/cA小鼠25%。冻融精子IVF得到的胚胎可以耐受体外培养。