连翘水提液体外对禽流感病毒增殖及炎症因子表达的抑制效应

旨在评估连翘体外抗H5N1和H9N2禽流感病毒（avian influenza viruses,AIVs）增殖及其介导炎症的效果,本试验制备了连翘水提液,首先采用CCK-8法测定了连翘水提液对DF-1细胞的安全浓度,并通过3种处理方法（药液预处理病毒后感染细胞、先感染病毒后给药、先给药后感染病毒）来筛选连翘水提液的最佳给药方式;在最佳给药方式下,使用TCID₅₀法检测禽流感病毒H5N1和H9N2的增殖情况,并采用qRT-PCR检测了炎症相关趋化因子和细胞因子的表达变化。结果显示,连翘水提液对DF-1细胞的最高安全浓度为4 mg·mL^-1;先感染病毒后给药是最佳的给药方式;在最佳给药方式下,连翘水提液能显著降低H5N1和H9N2 AIVs在各个时间点的病毒滴度,并呈剂量依赖性关系;与对照组相比,H5N1 AIV给药组中CX3CL1、IL8L1、CCL5、SCYA4、IL1β、IL-6和TNF-α的表达显著降低,H9N2 AIV给药组中CX3CL1、IL8L1、CCL5、IFN-β、IL-6和TNF-α的表达也有类似的下降趋势。这表明连翘能够抑制H5N1和H9N2 AIVs在DF-1细胞中的增殖,降低炎症相关细胞因子的表达,有良好的抗炎和抗病毒活性。     

重组犬干扰素α1促进犬淋巴细胞增殖的E-玫瑰花环试验

重组犬干扰素α1连续给予8~12月龄肉食犬7 d,利用E-玫瑰花环试验检测给药后1 d、3 d、7 d和停药后7 d的淋巴细胞水平,结果表明:重组犬干扰素α1具有促进犬外周血淋巴细胞增殖作用。在给药7 d后,其E-玫瑰花环结花率较对照组升高约12%(P0.05),但停药7 d后其水平恢复到对照组水平。     

α-干扰素在猪流感病毒感染期间的作用

细胞因子,尤其是α-干扰素对控制流感病毒感染起重要作用。为了研究α-干扰素对控制流感的作用,用猪α-干扰素中和单克隆抗体K9来建立猪流感病毒感染模型。首先,确定α-干扰素中和单克隆抗体最佳剂量和给药途径,基于上述结果来研究单克隆抗体对猪流感病毒感染的作用。猪气管内接种106.0EID50A/Swine/Belgium/1/98(H1N1)病毒,接毒后18h,气管内和腹腔内注射高剂量α-干扰素中和单克隆抗体和对照抗体,分别于接种后0、24、30、48、72h对动物实施安乐死。在24、30h注射单克隆抗体K9的动物支气管肺泡灌洗液中α-干扰素水平被明显抑制,这与IL-6、IL-12水平降低一致。对照单克隆抗体处理组中α-干扰素和IL-1水平未受影响。重要的是α-干扰素中和单克隆抗体处理的动物临床症状出现和高峰要延迟24h,同时伴随α-干扰素的抑制,但对病毒复制和肺部病变无明显的作用。结果表明,在流感病毒症状中,α-干扰素对IL-6、IL-12诱导及3种细胞因子起重要作用。     

重组鸡α-干扰素对鸡新城疫感染的治疗及疫苗免疫的影响

对试验鸡进行新城疫人工感染的干扰素治疗试验,试验SPF鸡分成5组,1～3组分别于攻毒前24h、攻毒的同时和攻毒后24h注射重组鸡α-干扰素,4、5组作为病毒对照和空白对照。同时,还进行了重组鸡α-干扰素对新城疫弱毒苗和灭活苗免疫效果的影响试验,结果显示,试验2、3组的平均死亡时间明显延长,免疫试验免疫后14d注射重组鸡α-干扰素可以降低新城疫抗体的滴度。     

牛蒡苷元对猪圆环病毒2型感染仔猪体内病毒复制及组织病理影响

为了评价中药活性成分牛蒡苷元(arctigenin,ACT)对猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)人工感染仔猪体内病毒的复制及组织病变的影响,选取16头30日龄健康断奶仔猪,随机分为空白对照组、攻毒对照组、给药组1(20μg·kg~(-1))和给药组2(50μg·kg~(-1))。两个给药组连续肌内注射给药3 d(空白和攻毒对照组注射生理盐水)后进行攻毒,在攻毒前2 d和攻毒后0、7、14、21 d分别采集仔猪外周血进行PCV2定量检测;攻毒后21 d将试验仔猪全部剖杀,采集腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、扁桃体、肺和脾组织进行PCV2定量检测和组织病理学观察。结果显示,两个给药组均能显著降低攻毒后7、14和21 d仔猪外周血病毒核酸拷贝数(P 0. 05或P 0. 01);攻毒后21 d,给药组1(20μg·kg~(-1))能显著抑制腹股沟淋巴结(P 0. 05)、肠系膜淋巴结(P 0. 05)组织中PCV2的增殖,给药组2(50μg·kg~(-1))能显著抑制腹股沟淋巴结(P 0. 001)、肠系膜淋巴结(P 0. 01)、扁桃体(P 0. 05)和肺(P 0. 05)组织中PCV2的增殖;并且两个剂量均能减轻PCV2感染造成的上述器官组织的病理损伤。ACT对PCV2在人工感染仔猪体内的增殖有明显的抑制效果,并能减轻由PCV2感染引起的病理变化。     

我国应尽快建立兽医与人医一体化的公共卫生体系

20 0 3年,可能来源于某种动物的SARS病毒在全球2 0多个国家引起了SARS的暴发和流行,世界卫生组织(WHO)将其列为新世纪第1个对人类健康有重大威胁的传染病。同年,在荷兰发生的H7N7、在中国香港特区再次出现的H5 N1、H9N2禽流感病毒感染人致病、致死事件;在美国首次暴发的猴痘以及西尼罗热的大规模流行;美国、加拿大本土分别出现的疯牛病病例和英国出现的首例可能由输血感染的人变异型克雅氏症;特别是目前正在包括我国在内的亚洲多个国家暴发、流行的H5 N1高致病性禽流感,都对公众健康造成了巨大威胁,使人们对公共卫生的关注达到了近…     

禽呼肠孤病毒感染DF1细胞后干扰素刺激基因在转录水平表达量的动态变化

为了解干扰素（interferon，IFN）和干扰素刺激基因在禽呼肠孤病毒（ARV）感染DF1细胞后的表达情况，试验将ARV病毒感染DF1细胞，观察细胞病变，收集感染后0、6、12、24、36、48、72、96 h的细胞样品，抽提反转录成cDNA，通过实时荧光定量PCR技术检测干扰素IFN-α和IFN-β及9种禽源常见干扰素刺激基因在感染后不同时间点在转录水平表达量的动态变化规律。结果显示，在ARV感染DF1细胞后，DF1细胞出现典型的细胞病变，感染后12 h病毒开始快速增殖，在36~96 h维持在较高的水平；IFN-α和IFN-β在转录水平的表达量在感染后均表现为显著下调（P<0.05；P<0.01）；IFI6、OAS、IFIT5、ISG12在转录水平表达量变化规律相似，均呈现显著上调表达（P<0.05；P<0.01），在感染后96 h达到峰值；其中IFIT5的上调幅度最大，感染后96 h的表达量是0 h的19.62倍（P<0.01）；而Mx、IFITM3、PKR、Viperin、ZAP的表达量变化规律相似，均表现为显著下调表达（P<0.05；P<0.01），其中Mx、IFITM3、Viperin的下调幅度较大，PKR和ZAP下调幅度很小。说明在ARV感染DF1细胞后，干扰素及多种干扰素刺激基因在转录水平呈现规律性变化，与病毒在DF1细胞中复制存在一定的联系。结果表明，ARV感染后可以诱导多种干扰素刺激基因的表达，这些干扰素刺激基因在抵御ARV病毒的入侵，抑制ARV的复制、释放及病毒的清除中发挥着重要作用。本研究为今后深入研究ARV的致病机理和宿主的抗病毒免疫应答提供了参考。     

金丝桃素蛋白络合物体外抗H5N1亚型禽流感病毒的活性研究

用鸡胚法进行了金照桃素蛋白络合物抗HSNI亚型禽流感病毒活性研究。分别采用了感染病素同时给药、给药后接种病毒、先感染病毒后给药三种方式，通过测定鸡胚尿囊液的血凝效价和计算药物对感染鸡胚的保护率，观察金丝桃素蛋白络合物的抗H5N1亚型禽流感病毒活性。实验结果表明，①药物在体外与病毒作用一段时间后不规则将其混悬液接种鸡胚，药物浓度在0.5mg/ml以上时，对感染鸡胚的保护率达100%。同时给药组的血凝效价显著降低，与对照组相比差异极显著；②在感染病毒前给药，药物浓度在2mg/ml以上时，对感染鸡胚的保护率达100%，药物组的血凝效价显著降低，与对照组相比差异极显著；③先感染病毒后给药，药物浓度在2mg/ml以上时，对感染鸡胚的保护率达88.9%，血凝效价明显隆低，与对照组相比差异显著。同时，在此种方式下，药物对病毒的抑制作用与药物浓度有一定依赖性，适当提高药物浓度，可以增强其抗病毒活性。     

辣蓼上调cGAS-STING信号通路改善鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠的脾脏免疫损伤

为了探究辣蓼水提液对鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠脾脏免疫损伤的保护作用及其潜在机制，试验将48只健康、体重接近的SPF级雌性Balb/c小鼠随机分为6组，分别为空白对照组、模型组、阳性药物组及辣蓼高、中、低剂量组，每组8只。空白对照组和模型组灌胃PBS,阳性药物组每天按体重灌胃给予庆大霉素20 mg/kg,辣蓼高、中、低剂量组分别灌胃给予20,10,5 g/kg的辣蓼水提液，小鼠给药体积为按体重0.2 mL/10 g,连续给药8 d。给药2 d后，除空白对照组外其余组小鼠均灌胃LD₅₀(5×10⁴ cfu/mL)鼠伤寒沙门氏菌0.2 mL,末次给药后禁食不禁水12 h,麻醉小鼠安乐死后取脾脏组织进行组织病理学检查、鼠伤寒沙门氏菌负荷量测定，以及α-干扰素(IFN-α)、β-干扰素(IFN-β)、γ-干扰素(IFN-γ)、干扰素调节因子3(IRF3)、磷酸化干扰素调节因子3(p-IRF3)、TANK结合激酶1(TBK1)、磷酸化TANK结合激酶1(p-TBK1)、干扰素刺激基因(STING)与环腺苷酸鸟苷酸合成酶(cGAS)蛋白相对表达量的检测。结果...     

重组鸡α-干扰素对鸡传染性法氏囊炎的治疗试验

重组鸡α-干扰素是一种抗病毒蛋白，具有广谱的抗病毒活性，对多种病毒有抑制作用。为了验证其治疗效果，在本试验中，我们使用法氏囊标准强毒BC6／85对易感日龄的SPF鸡进行人工感染与治疗试验，在攻毒后临床症状出现时使用10万单位、1万单位和0．1万单位三个剂量的重组鸡α-干扰素进行了治疗试验，同时使用法氏囊卵黄抗体做为对照药品，进行对比试验。结果表明，与攻毒对照组相比较，重组鸡α-干扰素能够显著降低试验鸡的发病数量，减轻其临床发病症状和法氏囊病变，并且在生产性能上具有较好的增重作用，其中以1万单位的中剂量重组鸡α-干扰素效果最为显著。     

重组鸡α干扰素抑制H9N2禽流感病毒在鸡胚中增殖的研究

为检测重组鸡α干扰素(rChIFN-α)抑制H9N2禽流感病毒(AIV)在鸡胚中的增殖效力,本研究将rChIFN-α按其抗病毒效价高低分为4个组(10~7 U/mL、10~6 U/mL、10~5 U/mL和10~4 U/mL),同时设置阴性对照组和病毒对照组。各实验组再依次按照给药时间不同又分为"先给药再接种病毒组"、"同时给药和接种病毒组"及"先接种病毒再给药组"3个小组进行试验,通过检测H9N2 AIV血凝效价的变化、H9N2 AIV HA基因拷贝数以及各组EID_(50)评价rChIFN-α对H9N2 AIV增殖抑制效力。结果显示,除低剂量组以外,各剂量组与病毒对照组相比,结果均可以显著降低鸡胚尿囊液中H9N2 AIV的血凝效价(p0.01),同时能够显著减少H9N2 AIV基因的拷贝数(p0.01)及显著降低EID_(50)(p0.01)。表明中等剂量(10~5 U/mL)及更高剂量的rChIFN-α在鸡胚中能够显著抑制H9N2 AIV的增殖。本研究为rChIFN-α今后在临床中抗AIV治疗的实际应用提供了相关实验依据。     

基因枪轰击注射鸭α-干扰素基因疫苗对免疫鸭抗鸭瘟强毒感染的影响

将鸭α-干扰素基因疫苗pcDNA-SDIFN-α分别按每只1、3和6μg剂量采用基因枪轰击方式免疫樱桃谷鸭,以PBS、空载体质粒pcDNA 3.1（＋）和鸭瘟弱毒疫苗为对照,注射后第15 d给每只鸭人工感染鸭瘟强毒.结果显示,1μg pcDNA-SDIFN-α免疫鸭有3/12死亡,PBS和空载体注射鸭分别有5/12和4/12死亡;3μg和6μg pcDNA-SDIFN-α免疫鸭以及鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭100%受到保护.3个剂量pcDNA-SDIFN-α免疫鸭外周血鸭瘟病毒DNA含量显著低于PBS和空载体对照组,而3个pcDNA-SDIFN-aα免疫组之间差异不显著.表明,基因枪轰击pcDNA-SDIFN-α免疫鸭后能产生一定的抗鸭瘟强毒感染的作用.     

老鼠可向家禽传播低致病性禽流感病毒

禽流感病毒可感染多种哺乳动物,其中老鼠可能会将禽流感病毒传播给暴发场所以外的家禽,美国农业部国立野生动物研究中心的科研人员在最新的研究中找到确证。他们在爱达荷州近期暴发低致病性禽流感的斗鸡场捕获的6只老鼠均呈A型流感抗体阳性。采用5株不同亚型的低致病性禽流感病毒(3株分离自野鸟,2株分离自鸡)感染在野外捕获的老鼠。结果发现,野鸟源禽流感病毒接种老鼠后能够有效复制,而鸡源禽流感病毒则     

α-干扰素在猪流感病毒感染急性期的作用

细胞因子,尤其是α-干扰素（IFN-α）在控制流感病毒感染过程中发挥着重要作用。为了研究IFN-α在流感过程中的作用,给感染流感病毒的模型动物猪接种IFN-α中和单克隆抗体（Abs）K9。首先确定了IFN-α中和Abs的最佳接种剂量与接种途径,据此研究Abs对猪流感病毒感染的效果。给猪气管内接种半数鸡胚感染量为106的H1N1流感病毒,接种18 h后,分别给试验猪气管内和腹膜内注射高剂量的IFN-α中和Abs和对照Abs。试验猪分别于接种后0、24、30、487、2 h安乐死。在接种后24和30 h,接种K9猪的气管-肺泡灌洗液中IFN-α明显减少,并伴随IL-6和IL-12的减少,而对照抗体处理组TNF-α和IL-1的水平未受影响。最重要的是,IFN-α中和单克隆抗体处理组动物出现临床症状推迟了24 h,同时伴随IFN-α的减少,但是并没有对病毒的复制及肺脏的病变产生明显的影响。试验结果表明,IFN-α对IL-6和IL-12有诱导作用,3种细胞因子在抗猪流感中起重要作用。     

SARS来自果子狸

据新华社深圳5月23日电(记者李南玲)广东省深圳市疾病预防控制中心和香港大学23日在深圳举行新闻发布会,宣布SARS病毒溯源研究获得重要进展,从6只果子狸标本中分离到3株SARS样病毒,进一步的基因分析证明了动物SARS样病毒是人类SARS病毒的前体。这项研究成果为进一步阐明人类SARS的源头及传播链提供了重要证据。这项课题是在人群流行病学调查基础上,追溯可能受SARS感染的动物,普查多种动物群体,主要集中锁定哺乳动物(包括果子狸、猪獾、黄鲸、鼠獾、貉、海狸鼠、猫、兔)。科研人员从6只果子狸标本中分离到3株SARS样病毒,从1只貉…     

火鸡球虫病的防制

给火鸡造成重大经济损失的球虫病极其普遍 ,但往往难以诊断。尤其当该病对火鸡日增重和死亡率影响不明显时 ,对混饲抗球虫药的防制效果则难以判定。因此 ,一旦怀疑球虫病发生时 ,就广泛采用常规混饲抗球虫药的方法进行“诊断性治疗”。一般 3～ 5周龄左右可能是火鸡球虫病的第1个高发期。但最近有报道表明 ,7周龄左右也可发病 ,但早期暴发过球虫病的鸡有可能产生抵抗力。在德国进行的 1次球虫病试验中 ,把 1群健康火鸡放入 1栋曾严重感染过球虫病的火鸡舍 ,为确保自然感染 ,此鸡舍仅采取了简单消毒措施 38d后 ,将这批火鸡从试验场地被移到铺…     

口服重组鸡α-干扰素对鸡新城疫病毒感染和疫苗免疫的影响

通过点眼、滴鼻的方式使SPF鸡感染新城疫La Sota株,感染8 h后在饮水中添加1000 U/mL重组鸡α-干扰素,每只鸡每天饮用干扰素剂量为20000 U,分别饮用不同时间。于感染后第7天采集气管组织,制备病理切片。结果显示,连续3 d以上饮用重组鸡α-干扰素的试验鸡,其气管的病理损伤可得到明显改善;检测饮用重组鸡α-干扰素后试验鸡的新城疫抗体效价,结果表明口服高剂量的干扰素可明显下调新城疫抗体的滴度。     

一起猪群腹泻暴发的回顾性研究

通过生产记录检索、问卷、座谈等方式,采集动物、畜舍、病史、发病过程等数据,对山东省X新建种猪场一起猪群腹泻暴发进行了回顾性研究。数据显示,该猪场此次暴发猪群腹泻可能是由于猪群感染TGE或PED病毒引起。定性分析表明,外来车辆进入可能是病毒进入该场的主要途径,工人和场内车辆的移动可能是疫情扩散的主要原因。及时给药能够在一定程度上降低发病率和病死率。建议该场以后加强管理,特别是厂区车辆和人员的管理,提高生物安全防护意识。     

重组鸡α-干扰素的表达及其生物活性的初步研究

为获得重组鸡α-干扰素并对其进行生物活性研究,本试验对重组大肠杆菌进行诱导表达,收集重组鸡α-干扰素包涵体后进行复性纯化及免疫印迹试验,并通过测定病毒EID₅₀,在接种H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的鸡胚中进行干扰素抗病毒活性试验,运用微变量细胞病变抑制法进行重组鸡α-干扰素抗病毒效价的测定。结果显示复性后重组鸡α-干扰素的免疫印迹试验成功获得了预期条带,在鸡胚中重组鸡α-干扰素具有显著的抗H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒等活性作用。在CEF/VSV细胞系上测定重组鸡α-干扰素的抗病毒效价为1.5×2¹⁰ U/mg左右,高浓度重组鸡α-干扰素具有一定的细胞毒性。结果表明重组鸡α-干扰素蛋白具有免疫原性和抗原性,在鸡胚内具有较好的抑制或杀灭H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果,呈广谱性,抗病毒效价较高,为下一步抗病毒制品的创制奠定基础。     

北京鸭干扰素-α基因的分子克隆与表达

采用 PCR法从北京鸭 (Anas platyrhynchosdoestica L innaeus)基因组中克隆了其干扰素 - α基因 (BJ- Du IFN- α)。克隆片段长 4 86 bp,编码 1 6 1个 Du IFN-α成熟肽。与已报道的北京鸭干扰素 -α基因相比 ,BJ- Du IFN-α在 2 85位发生了同义变异。将 BJ-Du IFN-α插入原核表达载体 p QE3 0 ,在 E.Coli JM1 0 9工程菌中表达了重组蛋白。经 SDS- PAGE、Western Blot和抗病毒活性测定 ,表达产物占菌体总蛋白的 2 3 %,为重组鸭干扰素 -α(r Du IFN-α)。 r Du IFN-α抗滤泡性口炎病毒 (VSV)活性高达 7.9× 1 0 5U /mg。