尿激酶型纤溶酶原激活剂作用系统与肿瘤侵袭及转移

肿瘤细胞发生侵袭、转移与其自身分泌蛋白酶降解细胞外基质密切相关。目前 ,在已知的蛋白酶中 ,丝氨酸蛋白酶类备受关注。其中 ,尿激酶型纤溶酶原激活剂 (urokinase- typeplasminogen activator,u PA)与肿瘤转移的关系已成为当今研究的热点之一。它与其受体 (u PAR)、抑制剂 (PAI)所形成的作用系统在肿瘤侵袭转移中起着重要的作用 ,它不但激活纤溶酶原直接降解大多数的细胞外基质 ,而且还激活金属蛋白酶间接参与细胞外基质成份的降解作用。本文对 u PA作用系统中的主要组分及其在肿瘤、转移中作用的研究概况作一综述。1　 u PAu PA是…     

人组织型纤溶酶原激活剂原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的初步表达

目的:构建人组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,tPA)原核表达载体,检测其在大肠杆菌Escherichia coli中的初步表达.方法:以含有人tPA基因的质粒为模板,设计引物扩增出含有RGDS-tPA基因并构建到原核表达载体pET28a中,测序证实为正确的rtPA序列,并将pET28a-tPA转化至菌株E.coli BL21(DE3).用IPTG诱导rtPA在E.coli中表达,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行验证.结果:琼脂糖凝胶电泳获得目的基因片段tPA的条带约在1 700bp处,鉴定为阳性重组体;聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定获得目的蛋白片段rtPA的条带约53KDa,为非活性的包涵体.结论:人组织型纤溶酶原激活剂原核表达载体构建成功,可在大肠杆菌中有效表达.     

组织型纤溶酶原激活剂cDNA真核表达质粒的构建与鉴定

将组织型纤溶酶原激活剂基因ｃＤＮＡ经多次亚克隆插入到真核表达载体ｐＳＶＬ的ＳＶ４０启动子和ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游,构建了重组表达质粒ｐＳＶＬ－ｔＰＡ和ｐｃＤＮＡ３－ｔＰＡ。经酶切和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定,ｔ－ＰＡ基因的插向正确,可用于哺乳动物细胞和个体表达系统中表达。     

结肠癌组织中中期因子、尿激酶型纤溶酶原激活物的表达及意义

目的了解结肠癌组织中中期因子（MK）、尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）表达及其与结肠癌临床病理特征的关系。方法收集55例病理学确证的结肠癌组织标本（病例组）和30例结肠癌癌旁的正常组织标本（对照组）,采用免疫组织化学方法（SP法）检测其MK、uPA的表达。结果病例组中MK、uPA表达率分别为56.36%、61.82%,对照组分别为13.33%、16.67%,两组的差异均有统计学意义（P〈0.01）。结肠癌组织中MK、uPA表达与癌组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移有相关性,而与性别和年龄无相关性。MK与uPA表达呈正相关（r=0.44,P〈0.05）。结论 MK、uPA表达与结肠癌侵袭、转移密切相关,二者联合检测可作为判断结肠癌发展及预后的指标。     

豆豉纤溶酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

根据已发表的豆豉纤溶酶基因DNA序列(GeneBank AY720895.2),设计并合成了一对引物,应用PCR技术以筛选的来自豆豉的产纤溶酶的芽孢杆菌的总DNA为模板,扩增出了豆豉纤溶酶基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,进行了序列测定,测序结果经Genetool序列分析表明该基因长1 089 bp,编码363个氨基酸,与已发表Brevibacillus laterosporus豆豉纤溶酶基因序列在核苷酸水平上与所发表的序列有98%的同源性;在氨基酸水平上与已发表的芽孢杆菌豆豉纤溶酶同源性为100%。并将该基因克隆到大肠杆菌表达载体pET22b上,在大肠杆菌中实现了高效表达。     

豆豉纤溶酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

[目的]为豆豉纤溶酶的进一步研究与应用奠定基础。[方法]以从芽孢杆菌中提取的总DNA为模板,根据GenBank的豆豉纤溶酶基因(AY720895.2)DNA序列设计1对引物,克隆豆豉纤溶酶基因并进行序列测定。构建毕赤酵母表达载体pL3,在毕赤酵母中表达豆豉纤溶酶基因。[结果]经PCR扩增可获得约1.1 kb的DNA片段。序列分析表明所克隆DNA片段包含1个1089 bp的开放阅读框,编码363个氨基酸。该克隆基因与所发表的豆豉纤溶酶基因序列的核苷酸序列同源性为98%,而氨基酸序列同源性达100%。[结论]所克隆的豆豉溶纤酶基因在毕赤酵母中成功表达,且表达产物具有正常的生物学活性。     

鼻咽癌组织中WWOX基因和蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨WWOX基因和蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其与临床病理特征关系.方法 收集52例鼻咽癌和25例正常鼻咽组织,采用实时荧光定量PCR和免疫组化染色分别检测WWOX mRNA、蛋白表达.结果 鼻咽癌组织中WWOX基因、蛋白表达显著低于正常鼻咽组织（P＜0.05）.癌组织中WWOX基因、蛋白表达与分化程度、TNM分期有关（P＜0.05）.结论 检测WWOX表达可能有助于鼻咽癌诊断及预后判断.     

川芎嗪逆转人鼻咽癌顺铂耐药细胞系多药耐药性的实验研究

目的探讨川芎嗪（TMP）对人鼻咽癌顺铂（DDP）耐药细胞系（CNE2/DDP）多药耐药性的逆转作用。方法 TMP处理CNE2/DDP细胞后,分别用MTT法、流式细胞术、RT-PCR检测其对DDP耐药性的逆转作用、细胞凋亡和bcl-2mRNA表达的影响。结果 50、100mg/LTMP处理后,CNE2/DDP细胞对DDP耐药性的相对逆转率分别为57.50%、85.72%,差异有统计学意义（P〈0.01）。与对照组比较,50mg/LTMP处理可使CNE2/DDP细胞凋亡率明显增高（P〈0.01）,而bcl-2mRNA表达明显降低（P〈0.05）。结论 TMP可部分逆转CNE2/DDP细胞对DDP的耐药性。TMP可增强DDP对CNE2/DDP细胞的促凋亡作用,下调bcl-2mRNA表达。     

bcl-x基因在两株鼻咽癌细胞中的转录和表达

目的：研究细胞凋亡相关基因bcl-x在人鼻咽癌高分化上皮细胞株CNE-1和低分化上皮细胞株CNE-2Z中的转录和表达。方法：分别抽提两种细胞的总RNA，通过逆转录PCR(RT-PCR)检测bcl-x基因的转录；同时制备两种细胞的蛋白质样品。经免疫印迹检测bcl-x基因的表达。结果：在两株鼻咽癌细胞中均检测到bcl-xL的转录和表达。但没有bcl-xs的表达。结论：bcl-xL在人鼻咽癌高、低分化上皮细胞株中均有表达。但表达量没有明显差异提示其表达可能与细胞分化程度无关。     

抑癌基因ING1在鼻咽癌中的表达及突变分析

本研究运用免疫组化技术、逆转录 - PCR( RT- PCR) ,PCR- SS-CP技术对鼻咽癌组织及鼻咽癌细胞系中 ING1的表达和突变进行检测 .结果发现 3 0例鼻咽癌标本中 ING1蛋白表达下调率为 70 % ( 2 1/ 3 0 ) ;ING1m RNA表达明显下调率为 4 6% ( 12 / 2 6) ,6例鼻咽癌细胞系中有 2例鼻咽癌细胞系表达明显下调 ,而 11例 ( 4 2 .5 % ) NPC组织及其它 4例细胞系表达与正常水平相当 ,另有 3例 ( 11.5 % )鼻咽癌组织过表达 ;单链构像多态性分析 ( SSCP)在鼻咽癌及鼻咽癌细胞系中均未发现突变 .结果表明ING1基因的转录及翻译表达水平与鼻咽癌的发生 /发展呈负相关 ,该基因的异常表达是鼻咽癌发生中的频发事件而与基因突变无关     

pAdKDR-tk自杀基因系统靶向杀伤鼻咽癌肿瘤血管的体内研究

目的探讨pAdKDR-tk自杀基因系统靶向杀伤肿瘤血管对鼻咽癌的治疗作用。方法将24只鼻咽癌荷瘤裸鼠随机分成3组,分别于0、1、7d向瘤体内注入重组腺病毒液0.1mL。第2次注射病毒液时,组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ分别腹腔注射pAdKDR-tk/PBS、pAdKDR-tk/GCV和pAdCMV-tk/GCV100mg/kg,每天1次,连续10d。观察治疗前后肿瘤体积、病理及微血管密度变化。结果组Ⅲ裸鼠移植肿瘤缩小速度最快,组Ⅱ次之,而组Ⅰ增大。病理检查显示组Ⅱ、Ⅲ肿瘤出现不同程度坏死,坏死灶中心位于病毒液注射部位。Ⅷ因子相关抗原免疫组化检查发现肿瘤血管密度组Ⅱ最低,组Ⅰ最高,两组之间差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 pAdKDR-tk自杀基因系统对鼻咽癌肿瘤血管有良好的靶向杀伤效应,从而达到破坏肿瘤细胞的作用。     

3种耳后野放疗方案治疗鼻咽癌的疗效比较

目的：比较3种不同的耳后野照射方案治疗鼻咽癌的疗效。方法：90例茎突后间隙受犯的鼻咽癌初治患者，第l段放疗采用面颈联合野放疗，第2段放疗采用耳前野加耳后野放疗。按第2段放疗耳后野不同照射时间、分次剂量随机分为3组：常规剂量组(n＝30)、低剂量组(n＝31)和后加量组(n＝29)。常规剂量组耳后野剂量为每次2Gy，与耳前野相隔6h后照射；低剂量组耳后野剂量为每次lGy，与耳前野相隔6h后照射；后加量组为耳前野照射结束后耳后野照射，每次剂量为2Gy；3组耳后野放疗剂量为10--20Gy，放疗总剂量为肿瘤量(DT)68—80Gy。结果：常规剂量组、低剂量组和后加量治疗3个月后完全缓解率(CR)分别为83．3％、90．3％和82．8％，差异无显著性(P＞0．05)；而中耳炎发生字分别为71．9％、47．4％和44．4％．Ⅲ-Ⅳ级口腔粘腰反应发生率分别为53．3％、28．8％和17．2％，常规剂量组与低剂量组或后加量组比较，差异均有显著性(P值均为＜0．05)、但低剂量组与后加量组比较差异无显著性(P＞0．05)。结论：耳后野低剂量或后加量放射治疗方案的疗效稳定且毒副反应较低。     

鼻咽癌细胞株CNE1转染EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)后对放射敏感性的影响

目的：研究EB病参LMP1对鼻咽癌高分化细胞株CNE1放射敏感性的影响。方法：用电转染技术将带有EB病毒LMP1基因的真核表达质粒导入鼻咽癌高分化细胞株CNEl，用免疫组化法及Western blot检测LMPl的表达；LMP1对CNEl细胞放射敏感性的影响采用^60钴治疗仪照射后集落形成实验进行观察。结果：CNE1细胞抹转染LMP1基因后LMPl蛋白呈阳性表达，对照放射敏感性比未转染株的细胞存活事低(P＜0．01)。结论：LMPl能增加鼻咽癌细胞的放射敏感性，这种作用可能与LMP1的促细胞转化，抑分化有关。     

鼻咽炎和鼻咽癌细胞中CD147、Fascin蛋白表达

目的探讨鼻咽炎和鼻咽癌细胞中CD147、Fascin蛋白表达的意义。方法用免疫组化SP法检测25例鼻咽黏膜慢性炎和30例鼻咽癌细胞中CD147和Fascin蛋白的表达。结果在鼻咽黏膜慢性炎和鼻咽癌细胞中,CD147蛋白阳性表达率分别为24.0%（6/25）和76.7%（23/30）,组间差异有显著统计学意义（P〈0.01）;Fascin蛋白阳性表达率分别为16.0%（4/25）和93.3%（28/30）,组间差异有显著统计学意义（P〈0.01）;30例鼻咽癌中CD147与Fascin蛋白表达呈正相关（P〈0.05）。结论鼻咽癌细胞中均有CD147和Fascin蛋白过表达,可能协同参与鼻咽癌的侵袭、转移过程。     

异鼠李素对鼻咽癌细胞生长和增殖的影响

目的 观察异鼠李素对鼻咽癌细胞生长和增殖的抑制作用.方法 采用不同质量浓度(10、20、40、80 mg/L)异鼠李素处理CNE-2细胞,分别用MTT法、台盼蓝染色、平皿培养和倒置显微镜观察细胞生长抑制率、细胞活力、集落形成、形态变化.结果 异鼠李素组的CNE-2细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05),且抑制作用呈...