国兰组培中外植体高效消毒方法研究

以湖南本地种的蕙兰种子和春兰新芽为外植体,以75%乙醇、0.1%升汞、10%次氯酸钠为消毒剂设计了6个消毒方案进行外植体消毒试验。结果表明:蕙兰种子组织培养时采用75%酒精45 s+0.1%升汞消毒8 min的效果较佳,75%酒精45 s+0.1%升汞消毒5 min对春兰新芽组培灭菌效果较好;同时,升汞的消毒效果总体优于次氯酸钠,但需要掌握消毒时间,以免过度处理给外植体造成伤害导致其死亡。     

国兰组培中外植体高效消毒方法研究（英文）

以湖南本地种的蕙兰种子和春兰新芽为外植体,以75%乙醇、0.1%升汞、10%次氯酸钠为消毒剂设计了6个消毒方案进行外植体消毒试验。结果表明:蕙兰种子组织培养时采用75%酒精45 s+0.1%升汞消毒8min的效果较佳,75%酒精45 s+0.1%升汞消毒5 min对春兰新芽组培灭菌效果较好;同时,升汞的消毒效果总体优于次氯酸钠,但需要掌握消毒时间,以免过度处理给外植体造成伤害导致其死亡。     

桃金娘组织培养初步研究

以桃金娘茎段、叶片、种子为外植体,研究0.1%Hg Cl2和2%Na Cl O单独消毒和组合消毒的消毒效果,探索出适合不同外植体消毒的有效方法和时间;并对最佳的诱导培养基和无菌系建立途径进行筛选。实验结果表明,组合消毒和消毒效率明显优于单一消毒剂消毒,其中单一消毒剂消毒时0.1%Hg Cl2的消毒效果又比2%Na Cl O好;桃金娘茎段、嫩叶、老叶、果实的最佳消毒方式分别为:2%Na Cl O浸泡10 min+0.1%Hg Cl2浸泡8 min、2%Na Cl O浸泡10 min+0.1%Hg Cl2浸泡6 min、0.1%Hg Cl2浸泡10 min+2%Na Cl O浸泡8 min、0.1%Hg Cl2浸泡16 min。嫩叶较老叶和茎段更易诱导出愈伤组织,最佳的诱导培养基为2号培养基,愈伤组织诱导率达77.7%。无菌播种是桃金娘无菌系建立的最佳方式,萌发率高达75.0%。     

大榕组织培养不同灭菌方法的初步研究

以携带腋芽的大榕茎段为外植体,用氯化汞和次氯酸钠进行消毒处理,初步研究了2钟不同消毒方法的灭菌效果,确定70%酒精处理30 s后用0.1%氯化汞溶液处理10 min的方法是较好的大榕腋芽外植体灭菌方法。     

番茄种子消毒方法探究

番茄种子表面常常带有病原微生物,故在培养番茄无菌苗时,需要进行消毒。传统番茄种子的消毒剂是氯化汞,而其较大的毒性和消毒原理限制其在实验室及实际生产上的应用。因此,本研究开发出一套新的采用无毒或低毒试剂的消毒方法来制备番茄无菌苗,从而消除重金属离子对蛋白质的变性作用,并排除杂菌污染,进而为探究蛋白类物质对番茄的促生作用做前期实验方法的研究铺垫。对氯化汞、次氯酸钠和过氧化氢三种消毒剂采用正交实验,选取各自合适的浓度和时间梯度联合洗衣粉和75%乙醇消毒效果进行最佳消毒条件的摸索。结果表明,20%次氯酸钠消毒5 min以及8%次氯酸钠消毒+1%吐温20消毒1 min的消毒效果较好,但吐温20对幼苗的苗重有一定的抑制作用。运用单因素实验设计对正交实验结果进行验证和进一步摸索消毒条件,结果表明,次氯酸钠消毒对种子萌发率影响不大,次氯酸钠浓度在10%~40%的差异不显著,故最佳的消毒方式为10%次氯酸钠消毒5 min。通过蛋白质溶液进行消毒条件的验证,最终表明,建立的番茄种子消毒方法可以用于研究活性物质对番茄的生理作用,且消毒效果较好。     

番茄种子消毒方法探究

番茄种子表面常常带有病原微生物,故在培养番茄无菌苗时,需要进行消毒。传统番茄种子的消毒剂是氯化汞,而其较大的毒性和消毒原理限制其在实验室及实际生产上的应用。因此,本研究开发出一套新的采用无毒或低毒试剂的消毒方法来制备番茄无菌苗,从而消除重金属离子对蛋白质的变性作用,并排除杂菌污染,进而为探究蛋白类物质对番茄的促生作用做前期实验方法的研究铺垫。对氯化汞、次氯酸钠和过氧化氢三种消毒剂采用正交实验,选取各自合适的浓度和时间梯度联合洗衣粉和75%乙醇消毒效果进行最佳消毒条件的摸索。结果表明,20%次氯酸钠消毒5 min以及8%次氯酸钠消毒+1%吐温20消毒1 min的消毒效果较好,但吐温20对幼苗的苗重有一定的抑制作用。运用单因素实验设计对正交实验结果进行验证和进一步摸索消毒条件,结果表明,次氯酸钠消毒对种子萌发率影响不大,次氯酸钠浓度在10%~40%的差异不显著,故最佳的消毒方式为10%次氯酸钠消毒5 min。通过蛋白质溶液进行消毒条件的验证,最终表明,建立的番茄种子消毒方法可以用于研究活性物质对番茄的生理作用,且消毒效果较好。     

番茄种子消毒方法探究

番茄种子表面常常带有病原微生物,故在培养番茄无菌苗时,需要进行消毒。传统番茄种子的消毒剂是氯化汞,而其较大的毒性和消毒原理限制其在实验室及实际生产上的应用。因此,本研究开发出一套新的采用无毒或低毒试剂的消毒方法来制备番茄无菌苗,从而消除重金属离子对蛋白质的变性作用,并排除杂菌污染,进而为探究蛋白类物质对番茄的促生作用做前期实验方法的研究铺垫。对氯化汞、次氯酸钠和过氧化氢三种消毒剂采用正交实验,选取各自合适的浓度和时间梯度联合洗衣粉和75%乙醇消毒效果进行最佳消毒条件的摸索。结果表明,20%次氯酸钠消毒5 min以及8%次氯酸钠消毒+1%吐温20消毒1 min的消毒效果较好,但吐温20对幼苗的苗重有一定的抑制作用。运用单因素实验设计对正交实验结果进行验证和进一步摸索消毒条件,结果表明,次氯酸钠消毒对种子萌发率影响不大,次氯酸钠浓度在10%~40%的差异不显著,故最佳的消毒方式为10%次氯酸钠消毒5 min。通过蛋白质溶液进行消毒条件的验证,最终表明,建立的番茄种子消毒方法可以用于研究活性物质对番茄的生理作用,且消毒效果较好。     

番木瓜(Carica papaya L.)外植体消毒方法

研究了消毒剂组合、消毒时间及热水处理对优良番木瓜成龄株芽的消毒效果,结果表明,番木瓜外植体采用75%酒精—15%次氯酸钠—0.1%升汞消毒剂组合,且0.1%升汞消毒时间为17 min时,消毒效果最好。在使用消毒剂前,采用热水处理番木瓜外植体,可以降低污染率。     

植物内生菌分离时表面消毒条件的比较

为了探索植物内生菌分离时表面消毒条件的一般规律,分别用不同消毒剂对水花生的茎处理不同时间,并以最佳组合对植物材料进行消毒处理,放置于分离培养基平板中,在适温下培养不同时间,观察各个处理对植物内生菌数量的影响。结果表明,用5%NaClO浸泡4 min、0.1%HgCl2浸泡0.5 min或先用75%乙醇浸泡0.5 min再用0.1%HgCl2浸泡0.5 min,分离内生菌的效果均较好;0.1%HgCl2浸泡0.5 min后置于分离培养基平板上培养2 d,内生菌数量极显著增加。     

一种简易有效的小麦籽粒消毒方法

为获得合理实用的籽粒消毒方法,本试验利用4种常用的消毒液,进行浓度配比与消毒时间的发芽测试。结果表明,70%酒精2min消毒效果最佳,且不影响发芽;0.1%的氯化汞不影响发芽;不同浓度的双氧水与次氯酸钠对籽粒无消毒效果,且分别加快与可能减缓发芽后生长。进一步简化试验表明,7min酒精消毒水洗法是一种更为简易有效的小麦籽粒消毒方法。     

珍稀树种花榈木组培不同外植体的无菌繁殖体系构建

为构建花榈木组织培养的无菌繁殖体系,采用随机区组试验方法研究不同药剂组合对其籽苗茎段、幼苗茎段和叶片、成年植株茎段和嫩叶等外植体的消毒效果。结果表明:籽苗茎段以70%乙醇消毒30 s+0.1%升汞灭菌8 min+培养基中添加PPM 0.5 m L/L的消毒效果最好;幼苗外植体最佳采集时间为4月,茎段用70%乙醇浸泡30 s+(50 mg/L利福平+50 mg/L氯霉素)混合液浸泡30 min+0.1%升汞浸泡8 min消毒效果最好,叶片用70%乙醇浸泡30 s+(50 mg/L利福平+50 mg/L氯霉素)混合液浸泡30 min+0.1%升汞浸泡6 min消毒效果最好;成年植株叶片以4月采集较好,最佳消毒方法为70%乙醇浸泡30 s+(50 mg/L利福平+50 mg/L氯霉素)混合液浸泡30 min+0.1%升汞浸泡12 min,成年植株茎段尚未取得理想消毒效果。     

玉竹组织培养外植体灭菌研究

以邵东玉竹芽为外植体,研究经不同杀菌剂,不同杀菌剂组合、不同处理时间对其灭菌的效果。筛选出适合玉竹组织培养的外植体灭菌体系,为加快玉竹种苗快繁提供科学依据。结果表明：升汞对玉竹外植体上的病原菌有较好的杀灭和抑制作用,所以含有升汞的灭菌组合效果更佳。当2种杀菌剂复合使用时比单一杀菌剂的灭菌效果好。初次灭菌处理用10%次氯酸钠浸泡15min,二次灭菌用0.1%升汞浸泡15min效果最佳,玉竹组培苗污染率为1.67%,成活率为96.67%。另外,在灭菌处理后用超声波清洗仪清洗15min可有效加强除菌效果。初次灭菌处理用0.2%多菌灵浸泡15min,二次灭菌用10%次氯酸钠浸泡15min,再用超声波处理15min,污染降为3.67%,成活率为95.00%,可作为不使用升汞灭菌的替代方案。外植体浸泡杀菌剂的时间在10～15min为宜。     

变异冬红果无菌体系的建立

[目的]建立变异冬红果初代培养无菌体系。[方法]以变异冬红果茎段为外植体,采用3种不同的消毒方法,通过统计污染率、褐化死亡率和成活率,比较变异冬红果茎段较适宜的消毒方法。[结果]用0.05%氯化汞消毒的最佳方式为氯化汞消毒20 min,污染率为17.78%,褐化死亡率为11.11%,成活率为71.11%;用0.1%氯化汞消毒的最佳方式为氯化汞消毒8 min,污染率为22.22%,褐化死亡率为20.00%,成活率为50.00%;用75%乙醇结合0.1%氯化汞消毒的最佳方式为75%乙醇30 s结合0.1%氯化汞10 min进行消毒,污染率为5.56%,褐化死亡率为55.56%,成活率为38.89%。[结论]变异冬红果茎段最佳的消毒方式为0.05%氯化汞消毒20 min,污染率为17.78%,褐化死亡率为11.11%,成活率为71.11%。     

不同消毒方式和萌发介质对十种杜鹃属种子萌发的影响

为探究不同消毒方式和不同萌发介质对杜鹃属(Rhododendron L.)植物种子萌发的影响,以10种杜鹃属植物的种子为研究对象进行种子萌发试验,消毒方式分别为0.3%高猛酸钾溶液消毒10 min,1%次氯酸钠消毒10 min,0.1%升汞消毒10 min,70%乙醇消毒30 s+1%次氯酸钠消毒10 min,70%乙醇浸泡30 s+0.1%升汞消毒10 min;萌发介质分别为滤纸、海绵、纱布和琼脂培养基,比较不同消毒方式和萌发介质的种子发芽率、发芽势和发芽时滞。结果表明,不同消毒方式对不同杜鹃属种子发芽率和发芽势影响不同,1%NaClO和70%乙醇+1%NaClO消毒后的发芽率和发芽势较其他消毒方式高,且发芽时滞也明显短于其他消毒方式。琼脂培养基适合多数杜鹃种子的萌发,而纱布不适合作为杜鹃属种子的萌发介质。     

党参无菌苗培养前种子消毒技术研究

[目的]研究不同消毒方法下党参种子的消毒效果。[方法]以党参种子为试验材料,通过10%H_2O_2、0.1%HgCl_2和2%NaClO这3种消毒剂,75%乙醇预处理,无菌水预浸泡,对党参种子的消毒效果进行比较。[结果]在10%H_2O_2、0.1%HgCl_2和2%NaClO这3种消毒剂中,2%NaClO浸种20 min的消毒效果最好;用75%乙醇预处理20 s可降低种子带菌率;在党参种子消毒之前,无菌水预浸泡24 h可提高发芽率。[结论]该研究结果为培育党参无菌苗等研究提供了重要依据。     

滇重楼组织培养技术研究

本文以滇重楼为试验材料,研究了不同外植体种类、不同消毒剂及不同消毒时间对其组织培养技术的影响。结果表明,以二年生滇重楼根状茎的顶芽和第一节间、成熟种子自然发芽的带柄叶片作为外植体时,二年生滇重楼根状茎的第一节间为滇重楼组织培养的最佳外植体;以滇重楼二年生根状茎的第一节间为外植体,以2%次氯酸钠、0.1%升汞和0.5%新洁尔灭为消毒剂分别处理8 min、10 min、15 min、20 min时,以0.1%升汞处理外植体8 min,污染率最低,诱导率最高,在综合考虑外植体启动培养和丛生芽形成时间,以及外植体褐化情况、丛生芽多少和长势时,以0.5%新洁尔灭处理外植体15 min为最好。     

小叶朴组织培养无菌体系的建立

[目的]建立小叶朴组织培养初代无菌体系。[方法]通过对不同消毒剂及消毒时间的对比,筛选出能够有效控制小叶朴初代培养的污染率,且不抑制小叶朴茎段萌发的消毒处理。[结果]小叶朴茎段经70%乙醇消毒30 s 2次,再用氯化汞消毒6 min所得茎段污染率低,萌发率高。对于后期出现的真菌污染采用多菌灵作为消毒剂和添加剂,用200 mg/L多菌灵浸泡外植体60 min能有效地控制污染,且具有较高的萌发率。在培养基中添加200 mg/L多菌灵也能抑制真菌污染,且效果优于多菌灵浸泡处理。[结论]建立了小叶朴组织培养无菌体系,为小叶朴组培苗的增殖和生根提供参考。     

辣木外植体消毒试验研究

[目的]探讨辣木茎段的最佳消毒方法。[方法]以辣木茎段为外植体,用不同消毒剂(升汞、次氯酸钠),选用不同浓度,在不同消毒时间下对辣木茎段进行消毒处理。[结果]次氯酸钠最佳消毒组合为浓度15 g/L消毒20 min,污染率为26%,成活率为34%。升汞最佳消毒组合为0.20 g/L消毒液消毒5 min,污染率为2%,成活率达84%。[结论]辣木茎段最佳消毒方法为:在75%酒精中浸泡30s后,用0.20 g/L升汞处理5 min,污染率为2%,成活率达84%。     

长白落叶松愈伤组织诱导与不定芽分化

以长白落叶松成熟胚作为外植体进行消毒和不定芽诱导。研究结果表明:将去皮种子用流水冲洗3d,用70%酒精消毒1min,转入1%的次氯酸钠消毒50min后,再将剥出的胚放入0.5%的次氯酸钠中浸泡2s为最佳消毒方法;在光照条件下(约1600lx),BM培养基中填加1.0mg/LBA,愈伤组织与不定芽的诱导效果最好,愈伤组织诱导率达到100%,不定芽分化率为73.8%;在BM培养基中加入1%活性碳对不定芽有伸长作用。     

红颜草莓的离体培养与快速繁殖

以红颜草莓的茎尖作为外植体,研究了外植体的消毒方法、激素组合对其离体培养与快速繁殖的影响。结果表明,幼茎段在0.1%氯化汞+3滴吐温-80溶液中浸泡5 min灭菌效果最好;茎尖以0.35 mm大小为宜;诱导丛生芽的最适培养基为:MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA;诱导试管苗生根的最适培养基为:1/2MS+0.1 mg/L IBA。