两例犬细小病毒与犬冠状病毒的混合病例诊疗

应用犬细小病毒胶体金快速测试板和犬冠状病毒胶体金快速测试板检测2例收治于西宁市好伙伴宠物医院的雄性小泰迪犬病例,诊断为犬细小病毒和犬冠状病毒混合感染.采用注射犬单克隆抗体、犬免疫球蛋白、犬五连血清等特异性抗体疗法,结合抗感染、补液和对症治疗,取得了满意的治疗效果.     

犬冠状病毒分子生物学研究

本研究根据Ｗｅｓｓｅｌｉｎｇ发表的犬冠状病毒（ＣＣＶ）Ｋ３７８株纤突蛋白（Ｓ）基因序列，设计合成了４条寡聚核苷酸引物Ｐ１（１８ｂｐ，１５２０－１５３７ｂｐ），Ｐ２（１９ｂｐ，２０７２－２０９０ｂｐ）和Ｐ３９（２０ｂｐ，２６２１－２６４０ｂｐ），Ｐ４（２０ｂｐ，２９４４－２９６３ｂｐ），以Ｐ１，Ｐ２和Ｐ３，Ｐ４为引物，以美国ＣＣＶＮＬ－１８株反转发产物为模板，建立了ＣＣＶＲＴ－ＰＣＲ方法，并将其中纯     

检测犬冠状病毒中和抗体的方法与应用

在２４孔组织培养板上应用从美国引进的犬冠病毒（ＣＣＶ）参考株ＮＬ－１８与猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）采用固定病毒（１００ＴＣＩＤ５０）稀释血清法建立了ＣＣＶ中和试验,运用该方法测定了１４２条群养犬和３５条散养犬的中和抗体水平,以１：４作为阳性血肖的判定标准,群养犬与散养犬的血清阳性率分别为１００％和８２．９％,测定了母犬的血清与乳汁,所产仔犬脐带血的ＣＣＶ抗体效价,证实母犬可以通过胎盘及乳汁将抗体转移     

犬冠状病毒的分子生物学研究进展

本文对犬冠状病毒的蛋白组成和功能，病毒的基因组结构，复制和转录机制等分子生物学研究的最新进展进行了综述。     

犬猫冠状病毒研究进展

犬冠状病毒（canine coronavirus,CCoV）与猫冠状病毒（feline coronavirus,FCoV）同属于冠状病毒科冠状病毒属α属,与其同属的病毒还有猪传染性胃肠炎病毒（porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV）、猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）等。遗传进化分析表明,该种属不同基因型病毒通过基因重组能产生新型变异毒株,为疾病的诊断与防控造成了很大的阻碍。β属冠状病毒包括牛冠状病毒（bovine coronavirus,BCoV）、犬呼吸道冠状病毒（canine respiratory coronavirus,CRCoV）、严重急性呼吸综合征冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV）等,其中CRCoV与BCoV同源性较高,该类病毒与α属冠状病毒在基因组结构、致病机制、感染症状等方面差异较大。CCoV与FCoV在全球范围内广泛传播,具有发病率高、死亡率低的特点。由于RNA病毒本身的特点和环境选择压力的影响,这两种病毒不断变异进化,新的强致病力毒株相继出现。经FCoV基因突变演化而来的猫传染性腹膜炎病毒（feline infectious peritonitis virus,FIPV）毒力大大增强,病毒基因组中某些特异性的点突变使得针对宿主的细胞嗜性发生改变,该病毒的致病机制主要依赖于病毒感染后诱导机体产生的抗体依赖性增强作用（ADE）。针对犬猫冠状病毒的流行病学调查及防控不能仅依赖于疫苗免疫单一因素,还应综合考虑病毒毒力、环境条件、宠物自身免疫抵抗力状态等。针对犬猫冠状病毒的诊断应根据临床症状,结合常规血液学检查、血清生化检查和实验室诊断技术来进行全面的鉴定,防止出现假阳性及假阴性结果。     

犬冠状病毒YS1株人工感染犬试验

使用从腹泻犬体内分离获得的犬冠状病毒ＹＳ１第５代ＣＲＦＫ细胞培养物,以不同剂量人工感染５０只２￣３月龄健康幼犬 ,１４ｄ内计有１６只犬发病,其中１４只耐过,２只死亡,发病率为３２％,死亡率为１２．５％,患犬粪便经电镜检查和ＲＴ－ＰＣＲ检测,前者见有ＣＣＶ样病毒,后者扩增出ＣＣＶ特异核酸片段。４８只试验犬血清对该病毒的ＳＮ抗体效价随接毒量的不同分别平均为１：３１０、１：２４５、１：１８５、１：１１５     

犬冠状病毒诊断技术研究进展

犬冠状病毒（canine coronavirus,CCoV）是导致犬胃肠道疾病的常见病原,与其他肠道病原共同感染时犬死亡率显著升高,严重影响养犬业的健康发展。快速、灵敏和特异的诊断技术对该病的防控起到至关重要的作用。除临床诊断外,常见的CCoV实验室诊断技术主要有病毒分离培养、电镜观察及血清学诊断技术,然而这些技术往往耗时长且工作量较大,分子诊断技术主要包括普通RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR、纳米PCR等检测方法,这些诊断技术在准确性、敏感性及特异性上有极大提高,诊断效率也显著提高。近年来,随着分子免疫诊断技术与新型材料研发技术的迅速发展,新的检测方法应运而生,纳米金、核酸探针、芯片技术及纳米生物传感器等技术更加敏感、便捷、高效且都具有制备试剂盒的可能性,从而在诊断上具有简洁性和普适性。文章将针对CCoV的诊断技术进行全面综述,以期为CCoV诊断试剂的研发提供参考。     

犬冠状病毒N蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

本研究旨在克隆犬冠状病毒（canine coronavirus,CCV）N基因,体外表达N蛋白,并制备抗该蛋白质的多克隆抗体,用于CCV的诊断及其抗原的检测。参考GenBank中CCV的N基因序列（登录号：KY063618.2）,选择CCV流行毒株的N基因,通过对该基因密码子进行优化和基因合成,最后选择一段有效基因构建重组表达质粒pET-B2M-N,将成功构建的重组质粒转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆提取质粒,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,通过0.5 mmol/L IPTG 30 ℃进行诱导表达。结果表明,优化诱导条件后成功表达出大小约为49 ku的重组蛋白。将重组蛋白与弗氏佐剂按一定比例混合,每隔2周免疫G767、G768两只日本大耳白兔数次,用间接ELISA检测G768抗体效价可达1∶512 000,选用G768抗体进行抗体纯化,纯化后浓度可达10 mg/mL,用间接ELISA、Western blotting和间接免疫荧光试验对N蛋白纯化后制备的兔多克隆抗体进行检测分析,表明表达的重组N蛋白免疫原性良好,制备的多克隆抗体具有良好的反应原性。本研究为犬冠状病毒抗原抗体检测以及靶标CCV诊断试剂盒的建立奠定了一定的基础。     

犬冠状病毒胶体金检测卡制备与评价

为快速检测犬冠状病毒,研究利用胶体金免疫层析技术制备和评价犬冠状病毒抗原检测卡。试验通过将胶体金标记的CCV Ab1和鼠IgG涂布于聚酯纤维膜上作为标记垫,生物素耦联的CCV Ab2处理在样品垫上,链霉亲和素和羊抗鼠IgG包被于NC膜上分别为检测线和质控线,与吸水纸和PVC底板制备犬冠状病毒抗原胶体金检测卡,并对其评价。结果:该检测卡不与其他病毒发生交叉反应,可检测浓度低至2 ng/mL的样本,24月是稳定的。结论:该测试板具有良好的特异性、灵敏度、重复性和稳定性,并且与RT-qPCR的结果较符合。因此,该检测卡能快速、准确地检测犬冠状病毒,为动物临床诊断和治疗提供参考。     

不容忽视的犬的冠状病毒感染

犬冠状病毒（CCV）是引起犬胃肠炎的主要病原之一,1971年首次从腹泻的德国军犬中分离到病毒以来,世界上相继有CCV感染的研究及新病毒株分离的报道。我国对该病的研究起步较晚,1985年证明有CCV的流行并且广泛存在感染现象,但临床工作者对该病的重视程度还远远不够。     

犬瘟热病毒分子生物学研究进展

犬瘟热病毒基因组长约16kb,包括6个非重叠基因区,按3'-5'端顺序依次为前导序列、N-P-M-F-H-L以及引导序列,分别编码核衣壳蛋白、磷蛋白、基质膜蛋白、融合蛋白、附着或血凝蛋白和大蛋白6种结构蛋白.文章对犬瘟热病毒基因组和结构蛋白的结构和功能进行了综述,并对犬瘟热病毒基因工程疫苗和分子生物学诊断方法做了概述,同时论述了犬瘟热病毒与人Paget畸形骨炎的关系.     

犬冠状病毒病的免疫预防研究进展

犬冠状病毒病是由犬冠状病毒引起的以胃肠炎为主的一种高度接触性传染病,对幼犬危害尤其严重,发病率和死亡率都很高,是目前对养犬业危害较大的疾病之一.文章就犬冠状病毒感染的流行病学、发病机理、机体免疫、免疫程序和免疫预防进行了综述,特别是对犬冠状病毒病的免疫类型、疫苗种类以及免疫预防存在的问题进行了详细阐述.     

狂犬病病毒的分子生物学研究进展

狂犬病是由狂犬病病毒引起的一种急性致死性人兽共患病,危害极大,因此,对狂犬病病毒的研究已成为一大热点。目前各国研究的重点主要集中在其病毒的分子生物学方面,以便更有效地防制本病。文章从病毒基因组及其编码的蛋白、致病机理等方面系统综述了狂犬病病毒分子生物学方面的研究进展,为该病的早期诊断、有效预防和控制该病提供理论基础。     

火鸡出血性肠炎病毒分子生物学研究进展

本文阐述了火同血性肠炎病毒近年来在分子生物学方面的研究进展。HEV基因组全长26263bp，是目前所知道最短的禽腺病毒。基因组中G＋C含量为34.93%。与其它腺病毒相似，含有39bp的末端重复序列，晚期蛋白基因（52k,Ⅲa，五邻体，核心蛋白，六邻体，肽链内切酶，100k,P^Ⅷ，和纤维蛋白），早期基因（聚合病毒，末端蛋白，DNA结合蛋白）和中期基因VIa2及其编码蛋白与其它腺病毒相比具有相似性，基因组中无明显的E1、E4区。然而，作为腺病毒分类的三个标准即基因组长度、末端重复序列及G＋C含量，其与牛腺病毒在分类地位上最接近，开放阅读框架与已发表的禽腺病毒无相似性。     

猪附红细胞体分子生物学研究进展

猪附红细胞体又称为猪血营养支原体,可以引起猪的贫血、黄疸性疾病,危害较大。作者主要对猪附红细胞体的分子生物学方面的研究进行了综述,包括依据16S rRNA序列对猪附红细胞体进行重新分类,对猪附红细胞体的Illinois和KI3806 2个菌株进行全基因测序,MSG1和α-烯醇化酶2种蛋白基因进行研究,以及应用PCR方法对病原的诊断。     

犬冠状病毒JS1706和JS1712毒株基因组3'端分子特性分析

为了全面了解犬冠状病毒（CCoV）分离毒株JS1706和JS1712基因组3'端主要结构蛋白基因和非结构蛋白基因的分子特征,本研究设计了8组引物进行RT-PCR扩增,产物经测序和拼接后,获得了约8.7 kb基因组片段,该基因组结构及其编码蛋白顺序为5'-S-3abc-E-M-N-7ab-3'。对CCoV JS1706、JS1712株8.7 kb基因组核苷酸序列与α冠状病毒属参考毒株的相同区域核苷酸序列进行比对,结果表明,2个分离株与CCoV Ⅱ型参考毒株相似性最高（83.4%~93.1%）,其次为FCoV Ⅱ型参考毒株（87.1%~87.9%）、TGEV参考毒株（86.1%~86.8%）、CCoV Ⅰ型参考毒株（72.0%~72.1%）和FCoV Ⅰ型参考毒株（67.5%~69.9%）。JS1706、JS1712毒株与同属冠状病毒参考株的结构蛋白S、E、M和N蛋白氨基酸相似性分别为46.4%~95.2%、75.6%~100%、82.8%~99.2%和78.5%~99.7%。说明同属内冠状病毒的S基因变异度大,E、M、N基因相对保守。根据基因组3'端8.7 kb核苷酸序列和S蛋白氨基酸序列相似性比对结果,JS1706和JS1712毒株均与泛嗜型原型株CB/05相似性最高,分别为93.0%~93.1%、94.8%~95.2%,其他结构蛋白包括E、M和N氨基酸序列比对也发现与CB/05株的相似性较高,分别为97.6%~100%、92.4%~93.1%和97.9%。S蛋白氨基酸序列的进一步分析表明,JS1706和JS1712毒株的S蛋白N端有一些特有氨基酸,S蛋白氨基酸序列中没有明显的S1/S2蛋白酶切位点（RRARR）,但在958—963位氨基酸有S2'裂解位点特征基序（KRKYRS）。基于S蛋白氨基酸序列构建的系统发育进化树分析显示,CCoV JS1706和JS1712株与CCoV Ⅱa亚型参考毒株和FCoV Ⅱ型参考毒株聚集形成一个分枝。CCoV JS1706和JS1712株非结构蛋白的编码基因ORF3abc和ORF7,其结构、大小与经典疫苗株INSAVC-1相似,无明显插入、缺失和移码突变。本研究有助于深入了解国内CCoV流行毒株的分子特性,为后续分子流行病学调查、诊断试剂和疫苗研发奠定了基础。     

Research Progress of Canine Coronavirus and Feline Coronavirus

Canine coronavirus (CCoV) and feline coronavirus (FCoV) belong to α-genus coronavirus of coronavirus family,porcine transmissible gastroenteritis virus (TGEV),porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) also belong to the same genus.Genetic evolution analysis showed that different genotype of the virus could produce new variant strains through gene recombination,which caused great obstacles to the diagnosis and control of the disease.β-genus coronaviruses include bovine coronavirus (BCoV),canine respiratory coronavirus (CRCoV) and severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV).Among them,CRCoV has the highest homology with BCoV,but there are great differences in genomic structure,pathogenic mechanism and infection symptoms between this kind of coronavirus and α-coronavirus.CCoV and FCoV are widely spreading around the world,characterized by high morbidity and low mortality.Due to the characteristics of RNA virus and the influence of environmental selection pressure,the viruses continue to mutate and evolve,and new virulent strains appear one after another.The virulence of feline infectious peritonitis virus (FIPV) is greatly enhanced,some specific point mutations in the virus genome change the cellular tropism against the host.The pathogenesis of the virus mainly depends on the antibody-dependent enhancement (ADE) induced by virus infection.The epidemiological investigation and prevention and control of CCoV and FCoV should not only rely on the single factor of vaccine immunity,but also comprehensively consider the virulence of the virus,environmental conditions,pet self-immune resistance, and so on.The identification of CCoV and FCoV should be based on clinical symptoms,combined with routine hematological examination,serum biochemical examination and laboratory diagnosis techniques to prevent false positive and false negative results.