杂色鲍与九孔鲍种质资源研究进展

杂色鲍和九孔鲍是我国南方鲍养殖业的主要对象,九孔鲍与杂色鲍的分类关系,学术界一直存在着不同看法。文章综述了我国杂色鲍和九孔鲍在形态学、染色体核型、生化遗传学及分子遗传学方面种质研究的主要进展,得出二者间差异属于种群差异,台湾的九孔鲍和大陆的杂色鲍的种质差异达不到亚种水平的结论。提出了自己的观点,并提出了合理引种及保护原种的建议。     

杂色鲍与九孔鲍消化酶活力的比较

对人工养殖的、不同体长的杂色鲍与九孔鲍消化酶活力大小进行了研究。酶学分析表明,无论是杂色鲍还是九孔鲍,其纤维素酶随着鲍的体长的增大活性逐渐增强;淀粉酶随着其体长的增大活性逐渐减弱;脂肪酶活性均很小;九孔鲍的纤维素酶活力和淀粉酶活力均大于相同体长的杂色鲍。     

九孔鲍精子发生的超微结构

利用透射电镜观察九孔鲍（Haliotis diversicolor aquatilis）精子的发生过程。结果表明,九孔鲍精子的发生历经精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和成熟精子5个阶段。其中精细胞的分化可分为5期,主要特点为：Ⅰ期,一些高电子致密颗粒参与顶体的形成;Ⅱ期,核形态由椭圆形到近圆形,再逐渐拉长为长圆柱状;Ⅲ期,核染色质以颗粒状形式凝集,最后向高电子密度均质状态转变;IV期,线粒体逐步融合、体积增大和嵴发达;Ⅴ期,中心体移动及鞭毛形成,胞质逐渐减少。成熟精子为原生型,由头部、中段和尾部组成。通过观察精子发生过程中细胞形态结构的变化,分析了其演变规律,同时与软体动物的其他种类作了比较研究。     

盐度对九孔鲍胚胎发育的影响

本文采用单因素试验方法研究了盐度对九孔鲍胚胎发育的影响.结果表明九孔鲍胚胎发育的最低和最高临界盐度分别是20和38,适宜盐度范围为26～36,最适盐度范围为30～32.实验说明,在适宜盐度范围内,盐度对九孔鲍胚胎发育的影响是十分显著的.     

九孔鲍繁殖期性腺的组织学观察

通过采集不同性腺成熟阶段的九孔鲍,运用性腺外部形态观察,判断性腺发育的成熟度;通过性腺组织细胞切片的显微观察,发现九孔鲍性腺发育的不同步性,同一九孔鲍个体的性腺,靠近角状部的比较早成熟,后端的比较迟成熟;结合性腺外部形态和性腺组织细胞切片,分析外观形态与性腺细胞成熟之间的关系.本文并探讨了亲鲍性腺成熟度与催产、保证卵质和提高鲍的育苗效果等问题.     

九孔鲍血清凝集素凝集作用的研究

试验表明九孔鲍血清中存在凝集素,可以凝集多种脊椎动物和人各型的血细胞,尤其对兔血细胞有很高的凝集效价(28)。该凝集素具有一定的热稳定性,40~50℃处理20 m in,其凝集活性稳定,70℃以上处理20 m in,凝集效价完全被破坏;pH 6~12凝集活性均保持最高值;Ca2 、Mg2 和ED-TA不影响其凝集活力;盐度对凝集活性影响不大,盐度为6~48,凝集活性一致;乳糖、D-甘露糖、D-果糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、蔗糖、木糖、麦芽糖、L-鼠李糖和山梨糖等10种糖对其不产生凝集抑制作用。     

不同类群九孔鲍免疫防御机能的比较

对不同类群的九孔鲍细胞与体液免疫机能进行比较,结果表明,不同类群的九孔鲍免疫机能具有显著的差异性,复壮鲍(养殖10个月,个体大小为51.8～59.2mm)细胞与体液免疫机能都明显高于退化鲍(养殖20个月,个体大小为37.4～43.1mm)(P<0.01),与野生九孔鲍(个体大小为67.7～76.7mm)相比,复壮鲍细胞免疫机能略高于野生鲍,体液免疫机能则明显低于野生鲍。九孔鲍血细胞在吞噬活动中具有呼吸爆发产生活性氧的功能与特点,活性氧的产生与九孔鲍自身生理、环境温度以及异物数量等因素有显著的相关性(P<0.01)。环境温度由25℃下降至18℃,九孔鲍的细胞与体液免疫机能都有明显的下降。退化鲍在25℃和18℃条件下血淋巴液的抗菌活力水平差异性不明显。酚氧化酶存在于九孔鲍血淋巴液中,但其活性水平不高,在各类九孔鲍之间的差异性也不明显,不能确认为九孔鲍的主要体液免疫因子。     

九孔鲍褐藻酸酶降解褐藻胶的反应条件与酶解产物的分析

以九孔鲍(Haliotis diversicoloeaquatilis)为原料制备一定纯度的褐藻酸酶,并对影响其降解褐藻胶的条件和产物的性质进行分析。该酶的最适温度和pH分别为45℃和7.0;与磷酸盐缓冲液相比,其在Tris-HCl缓冲液中与底物的亲和力相对较高。动力学曲线表明酶解反应主要发生在1 h之内,在2 h之内达到平衡,酶的剂量和底物的浓度对该平衡起到一定的影响作用。反应2 h之后,添加同数量的酶或者底物发现,产物的反馈抑制只是反应达到平衡的一个影响因素,而酶的变性失活也起到了重要的作用。金属离子对酶的活性具有明显的影响,Co2 、Mg2 对酶的活性具有较强的促进作用,而Cu2 、Ag 和Zn2 则具有较强的抑制作用。产物特性黏度的变化主要是在1 h内,2 h后基本不再改变。1HNMR图谱分析发现随着聚甘露糖片段,特别是M-M二聚体的降解,MG二聚体、GGM和MGM三聚体的量相应增多,表明该酶属于甘露糖裂解酶(EC 4.2.2.3)。     

皱纹盘鲍4个群体与九孔鲍16S rRN A基因遗传差异分析

采用PCR方法扩增了皱纹盘鲍（4个群体）和九孔鲍（1个群体）共5个群体（53个样本）16S rRNA基因片段（16S）,测序获得了1000 bp核苷酸序列,其中669 bp核苷酸序列用于遗传差异分析,旨在评估我国皱纹盘鲍不同群体间及其与九孔鲍间的遗传差异。从52个序列中共检测到17种单倍型,其中皱纹盘鲍4个群体有13种单倍型,九孔鲍1个群体（9个样本）有4种单倍型。单倍型核苷酸序列比对显示,变异位点占比对位点的20．5％,基于单倍型的皱纹盘鲍4个群体间的遗传距离为0．002～0．011,平均为0．005;九孔鲍群体内的平均遗传距离为0．004,两种鲍间的平均遗传距离为0．218;两种鲍间的遗传分化系数 F‐统计量 FST平均为0．982,皱纹盘鲍4群体间的 FST值为0．0051～0．0065。本研究显示2种鲍群体内16S变异很小。系统发育分析鲍属11种鲍的聚类关系,显示皱纹盘鲍与盘鲍、日本鲍交叉聚为一支,九孔鲍与杂色鲍也交叉聚为一支,4个种类未聚成单系支。     

九孔鲍人工育苗技术探讨

采用阴干加紫外线处理海水催产的方法，进行九孔鲍室内人工育苗研究，使用雌亲鲍1343粒，平均规格5．7cm，雄亲鲍117粒，平均规格5．8cm，共获得受精卵9500万粒，受精率91．5％，以塑料薄膜作为附着基质，共附着匍匐幼体607万粒。经过64～73d的附着期间的管理，剥离0．21～1．0cm稚鲍347万粒，成活率达57．2％，又经过98～102d的培育，获得规格1．0～2．5cm的鲍苗121．5万粒，平均成活率达35．0％。     

盐度对九孔鲍胚胎发育及幼体附着率的影响

采用梯度试验研究了盐度和密度对九孔鲍胚胎发育及附着率的影响。试验盐度（‰）为24、26、28、30、32和34,在受精后96h统计各试验组中幼体的变态附着率。结果显示,各盐度组中的幼体均可发育至浮游担轮幼虫,盐度越低,发育速度越快。盐度24组的幼虫不能完成变态继续发育;而在盐度26～34范围内,盐度越高,幼虫的96h变态附板率越高,分别为：5．83±1．12％,12．50±2．33％,16．67±1．87％,16．67±3．33％和18．33±3．12％。密度试验设计5个密度组,选择1、10、100、500、1000只健康浮游幼体分别随机放人500mL水体中,观察密度与九孔鲍幼体附着变态之间的关系,受精后96h的计数。结果表明,不同密度对幼体的附着变态产生影响,1只／500mL密度组中的幼体未完成附着,10～1000只／500mL密度组中,附着变态率随着密度的升高而降低,其中100、500、1000只,500mL三密度组中幼体的附着变态率无显著性差异（P〈0．05）。     

不同单胞藻饵料培养九孔鲍早期稚贝的研究

以单种培养的6种底栖硅藻和具有底栖习性的亚心形扁藻(Platymoras sp.)为饵料,培养九孔鲍(Haliotis diversi-color supertexta)受精后12 d的早期稚贝并观察其生长和存活,培养期为28 d,目的是筛选能维持早期稚贝高存活率和生长率的藻种。实验结果表明,培养稚贝成活率最高的3个藻种由大到小依次是爪哇曲壳藻亚缢变种(Achnanthes javanica var.)、流水双眉藻(Amphora fluninensis)和亚历山大菱形藻(Nitzschia alexandrina),使稚贝生长最快的3个藻种由大到小依次是流水双眉藻、爪哇曲壳藻亚缢变种和亚历山大菱形藻。研究结果揭示了适宜的底栖硅藻种类对鲍早期稚贝阶段生长和存活的重要性。个体小或者胞外产物量大的藻类很可能对九孔鲍早期稚贝的培养是有利的。     

鲍破腹病的防治技术研究

破腹病是鲍养殖生产中的常见病，每年的3-6月和8-10月为其高发期，外套膜破裂是其最主要症状，病鲍的死亡率可达50-90％。通过研究确认了副溶血弧菌（Vibrio parahaemo-lyticus）为鲍破腹病的致病菌。该菌对鲍具有较强的致病性，注射、创伤、浸泡等多种感染方式皆可引起鲍出现破腹和死亡现象，其对21种常用抗菌药物的敏感性都不太强，中度敏感药物只有庆大霉素、妥布霉素、卡那霉素、新霉素、红霉素、复方新诺明等。通过药敏性、经济性、便捷性比较，确定复方新诺明为鲍养殖生产中破腹病的主要防治药物，有效率达80％以上。     

杂色鲍杂交及选育育苗的效果研究

利用杂交结合选育的方法对我国南方主要鲍鱼养殖品种杂色鲍进行了育苗试验.试验共设置2个杂交组合,每个组合分5个试验平行组.结果表明,2个组即TW♀×HN♂和TW ♂×HN♀都取得了良好的育苗效果,其受精率分别为(97.23±1.52)%和(96.30±2.25)%;幼体附着率分别为77.02%和76.69%;幼体存活率分别为66.39%和66.89%;稚鲍壳长日增长分别为136. μm和133.8μm.剥离印d后,2个组合稚鲍的存活率分别达到了64.1%和74.2%,体现出良好的杂种优势和对环境的适应能力.TW#♀×HN ♂组合在受精率、幼体附着率和稚鲍壳长日增长率都高于其反交组合TW♂×HN ♀,而幼体和稚鲍的存活率都低于反交组合,但方差分析表明2个组合正反交的育苗效果在受精率、幼体附着率、幼体存活率和稚鲍壳长日增长率上无显著性差异(P>0.05),但在稚鲍的存活率上存在显著性差异(P<0.05).     

盐度和胁迫时间对九孔鲍α-淀粉酶基因表达量的联合效应分析

采用中心复合设计和响应曲面法研究了盐度和胁迫时间对九孔鲍(Haliotis diversicolor supertexta)?-淀粉酶基因表达量影响的联合效应,旨在为九孔鲍盐度驯化及海区推广提供指导。实验设定盐度范围为22~40,时间范围为0~72 h,建立了盐度、胁迫时间与?-淀粉酶基因表达量之间关系的定量模型,并通过分析明确了盐度和胁迫时间的最优组合。结果表明,盐度对九孔鲍?-淀粉酶基因表达量影响的一次效应不显著(P0.05),而二次效应极显著(P0.01),说明盐度与九孔鲍?-淀粉酶基因表达量之间为非线性关系。随盐度升高,淀粉酶基因表达量呈先上升后下降的变化趋势,当盐度为31时淀粉酶基因表达量最大,此时九孔鲍消化能力最强。胁迫时间对淀粉酶基因表达量影响的一次效应显著(P0.05),二次效应不显著(P0.05),表明胁迫时间与九孔鲍?-淀粉酶基因表达量之间呈线性关系,即随着胁迫时间的延长,淀粉酶基因从开始低水平表达逐渐升高并恢复至正常表达水平。盐度和胁迫时间之间不存在交互作用。对实验结果建立模型可知,?-淀粉酶基因表达回归模型达极显著水平(P0.05),且失拟项不显著(P0.05),表明实验拟合出的方程有效。回归方程的决定系数为80.05%,校正系数65.80%,预测系数50.18%,表明方程拟合度较好,模型选择较为恰当,可以为不同盐度和胁迫时间诱导下的淀粉酶基因表达量变化提供参考依据。     

湛江东海岛鲍鱼养殖场水质分析

为了监测湛江东海岛鲍鱼养殖场的水质状况,2011年春季对湛江东海岛九孔鲍养殖场的水质进行采样分析,并应用单项指标评价和富营养化评价等方法,对水质状况进行了评价。结果表明,该养殖场水体采样点的水温为16.0～17.5℃,盐度是22,pH值在7.83～7.90之间,均符合我国第二类海水水质标准。各采样点的溶解氧(DO)和生化需氧量(BOD5)也符合第二类海水水质标准,但化学需氧量(COD)值在14.88～15.36 mg/L之间,与第二类海水水质标准相比严重超标;各采样点的无机氮(DIN)均以NO 3--N为主,DIN值在1.053～1.569 mg/L之间,DIN含量严重超过我国第二类海水水质标准。该养殖场水体属于氮富营养化。     

杂色鲍健康苗种与患病苗种异养细菌致病毒力因子的比较研究

2002年以来,南方杂色鲍苗出现大规模死亡的问题,严重影响到南方鲍产业的发展。为寻找病因,于2004年自广东深圳下沙鲍鱼场培苗过程中变白掉板的杂色鲍苗以及官湖养殖场健康鲍苗各分离到19株和15株异养细菌,在此基础上研究了它们蛋白酶、淀粉酶、明胶酶、磷脂酶的产酶能力及溶血现象,并对它们的产酶能力及溶血能力进行了比较分析。结果表明,虽然来自下沙病鲍苗的菌株比来自官湖的健康鲍苗的溶血能力差;但它们大多数具有较强的分泌蛋白酶、明胶酶、淀粉酶、磷脂酶的能力。考虑到胞外酶是细菌的毒力因子之一,据此推测,下沙鲍鱼场鲍苗发生脱板死亡的原因可能与这些菌株能分泌胞外酶有关。     

盐度对九孔鲍摄食_生长及存活的影响

九孔鲍摄食人工饲料的盐度范围为２０￣３８,其中较适宜的盐度范围为２５￣３５,在此盐度范围内,小规格鲍（平均壳长１．３０ｃｍ,平均体重０．３７ｇ）的壳长日增长为９１．５￣１０２．３μｍ,日增重为８．６０￣１２．５５ｍｇ;大规格鲍（平均壳长２．７ｃｍ,平均体重２．３ｇ）的壳长日增长为５６．３０￣８１．８０μｍ,日增重为１２．６８￣２２．４８ｍｇ,其最适生长的盐度为３０￣３５,存活率为９７％￣１００％。