小黑杨转抗真菌病基因的初步研究

以小黑杨为受体材料,在对传统的农杆菌介导的叶盘转化法改进的基础上进行了转化外源几丁质酶基因。试验表明,菌液浓度为0.3~0.4是小黑杨遗传转化的适宜浓度,0.3时分化率最高(24.75),菌液浓度超过0.45时,分化率逐渐下降。经过对转化子的PCR及PCR-Sothern鉴定,结果呈阳性,证明外源几丁质酶基因导入并整合进小黑杨基因组中。     

反义磷脂酶Dγ基因与几丁质酶基因转化美洲黑杨G2

建立美洲黑杨G2组培再生体系,确立美洲黑杨G2分化最适宜培养基和生根培养基.然后分别进行卡那霉素和潮霉素敏感性试验,利用叶盘法依次将反义磷脂酶Dγ(Anti-PLDγ)基因和几丁质酶(CH5B)基因转入美洲黑杨G2中.首先转入反义磷脂酶Dγ基因,经诱导不定芽及生根阶段卡那霉素(选择性抗生素)连续筛选,获得了21株卡那霉素抗性植株.抗性植株经PCR及PCR-Southern杂交检测,有13株均呈阳性,证明Anti-PLDγ基因成功整合到美洲黑杨G2基因组中.耐盐性试验表明,4株转基因植株抗NaCl能力比对照都有不同程度提高.选择4号株系继续转入几丁质酶基因,通过潮霉素(选择性抗生素)筛选不定芽及诱导生根获6株潮霉素抗性植株,经PCR及PCR-Southern杂交检测,6株均呈阳性,证明CH5B基因成功整合到美洲黑杨G2基因组中.由于CH5B基因与报告基因GUS处于同一开放阅读框(ORF)内,因此通过GUS基因的组织化学染色分析,证明了6株转化植株几丁质酶基因均获得正常表达.     

蜡梅几丁质酶基因的克隆与原核表达

在构建好蜡梅花cDNA文库并进行EST分析基础上,通过随机克隆测序,得到1个蜡梅几丁质酶的cDNA基因,命名为Cpchia(GenBank登录号:FJ749130).Cpchia cDNA全长为1 184 bp,开放阅读框为954 bp,编码317个氨基酸,其结构包括信号肽、几丁质结合域、可变交联区、催化区,无C端延伸区,为Class Ⅰ b型胞外几丁质酶,属于几丁质酶第19家族.将Cpchia克隆到原核表达载体pET-28a(+),在大肠杆菌BL21细胞中以包涵体形式表达融合蛋白,利用透析法获得复性蛋白,其几丁质酶活性经DNS法检测达到200 U·mL~(-1).酶活性和稳定性分析表明,试验条件下,pH 7.0有利于酶的稳定和活性发挥,40 ℃活性最高,在0 ℃低温下也有较高活性.上述结果说明,分离的Cpchia基因编码蛋白具有几丁质酶活性,而且可能与蜡梅花的抗寒性形成有关.     

转betA基因小黑杨的耐盐性分析及优良转基因株系的选择

在前期获得13个小黑杨转胆碱脱氢酶基因(betA)株系的基础上,选择9个生长正常的转基因株系与非转基因对照,用0、100、140、170、200 mmol·L-15种浓度的NaCl处理盆栽苗木,分2、7、12、17、22 d取处理材料叶片,测定转基因株系叶片中外源基因的最终合成产物--甜菜碱含量.盐处理60 d后,测定苗木高度及转基因株系的盐害指数.结果表明,转基因株系与对照间的甜菜碱含量差异达到极显著水平,9个转基因株系的甜菜碱平均含量超过对照的27.1%;转基因株系的平均盐害指数较对照低15.8%;转基因株系的平均高度超过对照44.1%.综合转基因株系的生长速度,兼顾其耐盐性,初步选择转基因株系T4、T6、T5、T1作为生长速度快耐盐性高的优良株系.     

几丁质酶在植物抗真菌病害中的作用

几丁质酶对于植物抗真菌病害有重要作用,它可水解真菌细胞壁的重要组成成分———几丁质。正常情况下,植物体内几丁质酶的含量很低,如果将外源几丁质酶基因导入植物,可增强植物抗真菌病害的能力,而将几丁质酶基因与其他防卫蛋白基因一同导入植物,植物抗真菌病害的能力将会大大提高。     

黄蓝状菌一种几丁质酶的纯化、性质及抗菌活性

黄蓝状菌Talaromyces flavus在SMCS液体培养基中置于恒温摇床(200r/min,27．5℃)上培养13d，诱导产生大量的几丁质酶。培养滤液经硫酸铵分级沉淀，DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析、Phenyl-Sepharose Fast Flow疏水层析、Sephacvl S—100分子筛层析得到了凝肢电泳(SDS-PAGE)谱带单一的几丁质酶，其分子量为41kD。其最适反应温度为50℃，最适pH值是5。Mn^2 对其有明显的激活作用，Cu^2 、Fe^2 对其有强烈的抑制作用。抗菌活性显示，其对供试病原菌具有明显的抑菌作用。     

橡胶树胶乳中几丁质酶的研究进展

几丁质酶是一种分解N-乙酰氨基葡萄糖分子的糖苷酶。在高等植物中，几丁质酶虽然普遍存在，但迄今未发现其底物的存在。据研究，几丁质酶在植物抗病机制中起重要作用。近年来，通过对橡胶胶乳中几丁质酶的研究，认识到它不仅是橡胶树防御病原微生物的抗病系统的重要组成部分，而且还参加了胶乳的凝固过程，与橡胶树的排胶及产量具有密切的关系。文章概述了几丁质酶研究的现状及最新进展，介绍了橡胶树胶乳中几丁质酶的理化性质、生理学功能、在细胞中的定位及其调控。     

HearNPV几丁质酶对CypoGV的协同增效作用

利用大肠杆菌可溶性表达棉铃虫核型多角体病毒(HearNPV)几丁质酶,用表达粗产物与苹果蠹蛾颗粒体病毒(CypoGV)按不同比例混合喂食3龄苹果蠹蛾幼虫,测定其对CypoGV的增效作用。生测结果显示,表达的可溶性He-arNPVChiA在2.0μg/mL的添加水平时,LT50和LT90分别比对照缩短了13.7%和20.7%。研究结果说明HearN-PVChiA对CypoGV具有明显增效作用。     

黄蓝状菌几丁质酶E2纯化、性质及抗菌活性研究

黄蓝状菌在SMCS液体培养基中置于恒温摇床（200r／min,27．5C）上培养13天,诱导产生大量的几丁质酶。培养滤液经硫酸铵分级沉淀,DEAE--Sepharose FastFlow阴离子交换层析、Phenyl—Sepharose Fast Flow疏水层析、Sephacryl S-100分子筛层析得到了凝胶电泳（SDS—PAGE）谱带单一的几丁质酶E2,其分子量为32KD。其最适反应温度为50℃,最适pH值是5。Mn^2＋对其有明显的激活作用,Cu^2＋、FeCu^2＋对其有强烈的抑制作用。抗菌活性显示．其对供试病原菌具有明显的抑菌作用。     

几丁质酶及其在转基因植株内活力的测定及定位

介绍了几丁质酶的作用原理,植物中几丁质酶的分类及表达特点,采用荧光定量法测定转几丁质酶基因植株中几丁质酶的活性,对转基因植物的叶片进行体外包埋与切片,然后利用激光共聚焦显微镜扫描,以确定所转几丁质酶基因的表达部位。     

昆虫几丁质酶及其在植物害虫防治中的应用前景

昆虫几丁质酶可以降解昆虫体壁和中肠围食膜的主要组成成分几丁质,近年来受到了越来越多的关注.综述了昆虫几丁质酶的生理作用及影响因素、基因结构、体内表达特性及其在植物抗虫中的应用前景.     

转基因小黑杨对舞毒蛾的抗性测定

对转Bt-C肽 蜘蛛杀虫肽基因小黑杨的抗虫性做了系统的测定,取食转基因杨树舞毒蛾幼虫与对照相比,其发育速率为54·6%~72·8%、校正死亡率为72·8%~96·9%、体重降低率为11·2%~62·4%。证明抗虫基因已成功转入杨树中,并且表现出显著的抗虫性。     

单倍体小黑杨对潮霉素的敏感性研究

以单倍体小黑杨的叶片、不定芽和茎段为材料进行潮霉素敏感性研究的结果表明,在叶片筛选阶段,潮霉素的适宜浓度为3.0mg/L;在抗性芽和茎段生根筛选阶段,适宜浓度分别为2.0和6.0mg/L.     

单倍体小黑杨抗生素敏感试验

4种抗生素对单倍体小黑杨叶片愈伤组织的诱导及丛生芽形成影响的研究结果表明：哈尔滨制药总厂和上海制药四厂生产的头孢唑啉钠可为首选，各浓度梯度(250，500，750，1000，1250mg／L)对分化无明显抑制，甚至对分化还有一定的促进作用；鼎国公司生产的头孢唑啉钠对分化的抑制较大，其分化率随浓度梯度的上升而下降。而且长势差，分化较慢；卡那霉素的选择作用表现得很明显，浓度在15mg／L时，叶片分化，20mg／L时则不分化。所以在选择抗生素时，浓度以大于20mg／L为宜。     

耐盐基因Bet—A转化小黑杨的研究

本研究建立了小黑杨 (Populussimonii×P .nigra)组培再生体系 ,确定小黑杨芽分化最适宜培养基、生根培养基 ,然后进行卡那霉素敏感性试验。以小黑杨无菌苗叶片为转化受体材料 ,通过根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefacien)介导法将外源基因Bet A(编码胆碱脱氢酶 ,催化胆碱生成甘氨酸甜菜碱 )导入小黑杨(P .simonii×P .nigra)。对获得的 11株转化苗进行了PCR扩增检测和斑点杂交检测 ,其中 7株获得了 1 7Kb特异性扩增条带和杂交斑点 ,表现为阳性。从斑点杂交检测的转化苗中选取 3株杂交斑点明亮的转化子进行Southern印迹杂交分析 ,结果证实外源基因已整合到小黑杨基因组中     

华北沙地不同密度小黑杨林生长特征

The growth characteristics and correlation between the canopy index and growth characteristics of Populus×xiaohei plantation with different densities and stand ages were studied by the methods of sampling typical plot and allometric dimension analysis in Xuejiazhuang Forest Farm in Shanxi Province.The results showed that the DBHs of Populus×xiaohei plantations with various tree densities were different.The Logistic growth model could accurately describe the tree height and DBH growth of Populus×xiaohei.The ...     

苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因转化美洲黑杨的研究

本研究首先建立了美洲黑杨叶片外植体的再生系统，并利用Ｈｏｒｓｃｈ等人１９８５年发明的叶盘法，将分别带有嵌合基因ＮＰＴＩＩ和１．８ｋｂ或２．１ｋｂ Ｂｔ．基因的土壤杆菌ＬＢＡ４４０４与美洲黑杨叶片共培养。采用３０ｍｇ／ｌ和５０ｍｇ／ｌ两种浓度的卡那霉素筛选转子，约２８天左右的时间，有不定芽从外植体切口处形成。两种卡那霉素浓度下共形成２７５个伸长芽，存活了１８７株。这１８７株分别进入卡那霉素３０ｍｇ／     

鸭梨果实接种轮纹病菌后的生长期、贮藏期几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性变化

梨是我国栽培历史久、面积大、产量高的果树之一.鸭梨(Pyrus bretschneideri'Yali')果实具有很高的食用和药用价值,并且价格低廉,是我国主要消费水果.     

木材蓝变生物控制菌康氏木霉胞外几丁质酶的纯化及特性

本研究以木材蓝变生物控制菌康氏木霉(6111-ET)为供试菌株进行胞外几丁质酶纯化和特性的研究.将液态PDA培养基中的康氏木霉(Trichoderma koningii)置于恒温播床(200 r/min,28℃)培养10天.培养滤液经过硫酸铵分级沉淀、Q-HP强阴离子交换柱层析、Phenyl-Sepharose疏水层析...