芹菜胚性愈伤的诱导及高频植株再生体系的建立

通过对芹菜离体培养过程中激素配比、基因型、不定芽产生等条件的研究,建立了芹菜高频植株再生体系。研究表明,芹菜苗期的下胚轴最适于诱导愈伤组织,其愈伤组织诱导和继代培养的最佳培养基是MS+2,4-D1.0mg·L-1+KT1.0mg·L-1和MS+2,4-D0.5mg·L-1+BA0.2mg·L-1+CH500mg·L-1+4%甘露醇;基因型对愈伤组织和胚状体的诱导影响很大;60%以上的愈伤组织在继代培养基上可以从非胚性状态向半胚性和胚性状态转化。愈伤组织在1/2MS+1.5%蔗糖+CH500mg·L-1+KT0.25mg·L-1上获得不定芽或小试管苗;在无激素的MS或1/2MS固体培养基上继续培养不定芽或小试管苗,即可生根或长大,获得芹菜的完整再生植株。     

朱顶红幼嫩花梗胚性愈伤组织诱导和高效植株再生

为建立高效的朱顶红植株再生和种苗繁育技术体系,以幼嫩花梗为外植体开展胚性愈伤组织诱导和植株再生研究。对2,4-D和噻苯隆（TDZ）浓度、外植体发育时期及大小进行了筛选,结果表明：将切片厚度为1 mm的幼嫩花梗外植体置于添加0.5 mg ? L-1 TDZ 和2.0 mg ? L-1 2,4-D的MS固体培养基上培养8周,胚性愈伤组织诱导率最高,达85.3%。将胚性愈伤组织转移至相同的培养基上,每月继代1次,平均每月增殖10.6倍。在不含任何生长调节剂的MS培养基上,胚性愈伤组织的植株再生率达98.0%,平均每块愈伤组织可再生出12.3个小植株。经过36次（3年）继代培养后,胚性愈伤组织的增殖和植株再生效率没有显著变化。幼苗移栽至温室驯化,成活率达97.5%。再生植株移栽到田间,没有发现明显的表型变异。对随机选择的再生植株和母株进行简单序列重复区间（ISSR）扩增分析,证实再生植株没有发生DNA水平变异。     

中国特有濒危植物八角莲胚状体的发生及其植株再生研究

以我国特有濒危药用植物八角莲(Dysosma versipellis (Hance) M.Cheng)为试材,采用DPS软件正交设计法和SPSS的Duncan's multiple range test,研究了不同植物激素对其愈伤组织形成、胚状体诱导及植株再生的影响,以期为离体培养条件下快速诱导八角莲愈伤组织、胚状体及其植株的再生,以及将来深入研究真菌诱导子诱导八角莲活性成分鬼臼毒素累积的作用机理、信号调控机制和人工种子制作等提供参考依据.结果 表明:八角莲叶和叶柄最适合作为诱导愈伤组织的材料;植物激素对愈伤组织形成的影响效果从大到小依次为2,4-D＞ TDZ＞KT＞NAA＞2-ip,愈伤组织形成的最佳培养基为MS+2,4-D 1 mg·L-1 +NAA 0.05 mg·L-1 +TDZ 0.5 mg·L-1 +2-ip 1 mg·L-1;诱导颗粒状愈伤组织胚状体形成的最佳培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L-1 +NAA 0.1 mg·L-1,诱导率为71.33％;胚状体生根和植株再生培养基为MS+IBA 0.5 mg·L-1 +GA30.5 mg·L-1.     

辣椒细胞悬浮培养中体细胞胚形成及植株再生

本研究通过体细胞胚在液体培养基中的培养完来成辣椒(Capsicum annuum var.Ace)植株的再生。并以成熟合子胚为外植体,在含有9.05μM 2,4-D和3%蔗糖的MS液体培养基介质中,形成胚性愈伤组织。将胚性愈伤组织转移到含有4.52μM 2,4-D和3%蔗糖的MS液体培养基中进行继代培养。柠檬酸钾预处理胚性愈伤组织后,细胞放入含6 g/L的L-脯氨酸和铵浓度为10 m M的胚胎起始培养基中。胚胎在含脱落酸1.89μM的1/2 MS培养基中成熟,且体内和体外转化为植物的效率高达97%。     

红姜花体细胞胚胎发生及植株再生的研究

以红姜花（Hedychium coccineum）的花丝和花药为外植体,通过体细胞胚胎发生途径建立了植株再生体系。结果表明：外植体在MS + 4 mg ? L-1 2,4-D + 4 mg ? L-1 NAA + 1 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 7 g ? L-1 琼脂的培养基上经过120 d诱导出愈伤组织,愈伤组织在MS + 1 mg ? L-1 2,4-D + 0.25 mg ? L-1 NAA + 0.25 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的培养基上经过继代筛选,获得浅黄色松散易碎的胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在MS无机盐 + B5维生素+ 100 mg ? L-1谷氨酰胺 + 230 mg ? L-1 脯氨酸 + 100 mg ? L-1麦芽提取物 + 0.02 mg ? L-1 NAA + 0.02 mg ? L-1 TDZ + 0.5 ~ 1.0 mg ? L-1 2,4-D + 45 g ? L-1蔗糖的培养基中通过3个月的悬浮培养,可得到均质稳定的胚性细胞悬浮系（ECS）。胚性悬浮细胞在SH无机盐 + B5维生素 + 100 mg ? L-1谷氨酰胺 + 230 mg ? L-1脯氨酸 + 100 mg ? L-1麦芽提取物 + 0.25 mg ? L-1 NAA + 0 ~ 0.20 mg ? L-1 TDZ + 45 g ? L-1蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的体胚诱导培养基中培养10 d,可见到白色半透明体胚发生,20 d后体胚发育成熟。当TDZ浓度为0.15 mg ? L-1时,体胚诱导率高达4 500个 ? mL-1 PCV ECS（PCV：细胞密实体积）。在SH无机盐 + B5维生素 + 0.20 mg ? L-1 IAA + 0.25 ~ 1.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的体胚萌发培养基上,体胚萌发率高达100%。将萌发的体胚转移到1/2MS + 1 g ? L-1活性炭成苗培养基中,进一步发育成正常的再生植株,植株室外栽培成活率达90%。     

白鹤芋胚性细胞悬浮培养和高效植株再生体系的建立

以白鹤芋（Spathiphyllum cannifolium）试管苗叶柄为外植体诱导获得胚性愈伤组织,建立了胚性细胞悬浮培养系并高频率再生出植株。结果表明,最优的悬浮培养条件为：装有20 mL液体培养基的100 mL三角瓶中接种0.3 g胚性细胞团,悬浮培养基为MS + 0.5 mg ? L-1 TDZ + 1.0 mg ? L-1 2,4-D + 30 g ? L-1蔗糖或麦芽糖,pH 5.8;继代间隔14 d;每个继代周期,胚性细胞团可增殖至接种量的5倍以上;植株再生最优的分化培养基为1/2MS + 0.3 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖 + 8.0 g ? L-1琼脂粉,pH 5.8,平均每个胚性细胞团可分化再生出25.1株小植株;胚性细胞的快速增殖和高频率植株再生的状态可保持24周。     

正交试验法在荔枝体胚诱导过程中的应用

应用正交试验方法,研究MS培养基中附加的BA、KT、NAA、2,4-D以及琼脂和蔗糖浓度对荔枝胚性愈伤组织体胚诱导的影响。结果表明,BA 0.5 mg.L-1 KT 0.5 mg.L-1组合有利于荔枝胚性愈伤组织诱导体胚,NAA及2,4-D对体胚诱导效果不明显;在高浓度蔗糖(60 g.L-1)和琼脂(10 g.L-1)作用下,荔枝体胚诱导率较高,其中琼脂的作用效果明显高于蔗糖。通过正交试验方法选用MS BA 0.5 mg.L-1 KT 0.5 mg.L-1 LH 500 mg.L-1 蔗糖60 g.L-1 琼脂10 g.L-1组合,荔枝胚性愈伤组织诱导的体胚达9.05百个.g-1,是MS基本培养基的4.6倍,减少了试验次数,提高了荔枝体胚诱导的工作效率与准确性。     

草地早熟禾高频再生体系建立

研究了草地早熟禾愈伤组织的诱导和分化的最适培养基,建立了早熟禾高频率的再生体系.结果表明:品种优异的胚性愈伤诱导率最高,其中含2.0 mg/L 2,4-D和0.2 mg/L6-BA的培养基处理胚性愈伤组织的诱导频率最大,可以达到65.26%.早熟禾品种肯塔基、午夜、优异与新哥莱德最适分化激素浓度与配比分别为6-BA 1.0 KT 0.2、6-BA 2.0 2,4-D 0.1、6-BA1.0 2,4-D 0.2、KT 2.0,愈伤组织分化率分别达到27.93%、52.38%、66.67%和60%.早熟禾再生芽在1/2 MS 0.2 NAA培养基上生根率可达到100%.     

结缕草愈伤组织诱导及植株再生

 以日本结缕草种子为外植体，2份材料在附加2,4-D 2.0 mg/L水平的Ms培养基上愈伤组织诱导率较高；在含不同水平2,4-D的培养基中添加6-BA对非胚性愈伤组织转变成胚性愈伤组织起重要作用，其中2,4-D 2.0 mg/L配合6-BA 0.1mg/L的Ms培养基诱导出的胚性愈伤组织比例较高；胚性愈伤组织在2,4-D为0.1mg/L的分化培养基上分化率和生根率最高，为46.8％~ 48.1％。     

酿酒葡萄‘神索’体胚发生及再生体系遗传稳定性分析

 以酿酒葡萄‘神索’未成熟合子胚为外植体, 通过植物生长调节剂、光照、温度等因素的控制, 研究了葡萄体胚的产生、保存及植株再生。结果表明, 以NN为基本培养基, 诱导胚性愈伤组织的适宜植物生长调节剂水平是1.0 mg·L ^{- 1} 2,4-D; 诱导体胚的生长调节剂水平是1.0 mg·L ^-1 NAA + 0.5 mg·L ^{- 1} BA, 体胚诱导率为37.5%; 5℃微光条件, 适宜体胚的保存; 体胚成熟及植株再生的植物生长调节剂水平是0.05 mg·L ^{- 1} NAA + 0.5 mg·L ^{- 1} BA, 成苗率为42.1%。利用流式细胞仪并结合染色体计数对体胚及再生植株细胞核DNA含量及染色体鉴定表明, 体胚细胞染色体存在一定的变异, 而体胚再生植株倍性稳定, 细胞核DNA含量及染色体数与供体母株一致。     

翠菊‘花束绯红’叶片的植株再生体系建立

以翠菊‘花束绯红’无菌苗为材料,研究了植物生长调节剂浓度及组合、光照条件、不同附加物对叶片及其愈伤组织再生植株的影响。结果表明:(1)在光照培养条件下,诱导翠菊叶片不定芽形成的最适培养基为MS+6-BA3.0mg·L-1+IBA1.0mg·L-1,诱导率为56.7%,平均不定芽数为3.3;(2)黑暗培养不利于叶片不定芽的分化,但促进叶片愈伤组织的形成;(3)培养基中分别添加脯氨酸、水解酪蛋白和NH4NO3等均能明显促进愈伤组织不定芽的诱导,最适培养基为MS+6-BA1.0mg·L-1+IBA0.1mg·L-1+脯氨酸300mg·L-1,诱导率为82.8%,平均不定芽数为4.5;(4)不定芽移到幼苗生根培养基(1/2MS+IBA0.1mg·L-1)上,生根率为89.1%,移栽后成活率达89.3%。     

樱桃不同基因型再生植株的比较

对甜樱桃(PrunusaviumL.)、杂种优系F系(P.avium L.×P.pseudocerasusL.)和H系(P.cerasus L× P.pseu-docerasusL.)等不同基因型的离体再生植株方式进行了比较研究。结果表明,不同遗传背景的樱桃试材,其再生方式和途径存在差异。其中甜樱桃品种美早的离体叶片在WPM+6-BA2.0mg·L-1+IAA2.0mg·L-1+GA30.1mg·L-1培养基上,不定芽再生率可达到90%,H10、萨米脱、F10、F8在6-BA(2～2.5mg·L-1)、IAA(1.0～2.0mg·L-1)的激素配比,也获得了76%、86%、80%、64%的再生率;杂种H10叶柄接种于改良MS+6-BA2.0mg·L-1+IBA0.1mg·L-1+2,4-D0.5mg·L-1的培养基,可以得到40%的再生率,其他品种仅有H8的叶柄获得了少量的再生植株;杂种F10的幼嫩节间接种于LS+6-BA1.0mg·L-1+NAA2.0mg·L-1+CH100mg·L-1培养基,最高再生率为40%,6-BA(1～2mg·L-1)和NAA(1～2mg·L-1)配比,H8、H10的离体节间再生率最高分别为25%和30%;杂种H8整体根在MS+6-BA1.0mg·L-1+2,4-D2.0mg·L-1+IBA0.05mg·L-1+NAA0.05mg·L-1的培养基上,再生率为96.7%,6-BA(0.5～2mg·L-1)和2,4-D(0.5～2.0mg·L-1)配比,H10、F8、F10离体根再生率分别为93.3%、96.7%和93.3%。     

Assessing the influence of subcultures and liquid medium during somatic embryogenesis and plant regeneration in oil palm (Elaeis guineensis Jacq.)

The current analysis describes an improved protocol for somatic embryogenesis and plant regeneration in oil palm (Elaeis guineensis) through liquid medium, and assesses the influence of successive subcultures during induction of calluses in three Brazilian oil palm varieties. Calluses were induced in a Murashige and Skoog (MS) medium with 450 Picloram, 0.5 g L^?1 glutamine, 2.5 g L^?1 activated charcoal, 30 g L^?1 sucrose, and solidified with 2.5 g L^?1 Phytagel. In a first experiment, the effect of continued subculture of explants every 30 days to fresh culture medium was determined. During a second experiment, part of the embryogenic calluses obtained were transferred to a liquid medium under agitation, consisting of MS with 5 µM picloram or 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D). After 210 days, the calluses were transferred to semi-solid media for differentiating somatic embryos. It was observed that continued subculture of explants monthly was a determinant in stimulating and improving the formation of embryogenic calluses. Embryogenic calluses in liquid medium with 2,4-D significantly improved the percentage of differentiated somatic embryos (up to 80.2%), with the largest amount of torpedo embryos (8.3 per callus). Regenerated plants with roots were individualised and transferred to a greenhouse, with close to 95% survival.     

Production of a useful mutant by chronic irradiation in sweetpotato

Sweetpotato cultivar Kokei No. 14 was planted in a ⁶⁰Co gamma field. Shoot apices from the plants irradiated with different doses were cultured on MS medium supplemented with 2.0 mg/l 2,4-D for the induction of embryogenic calluses and the formation of somatic embryos. Embryogenic calluses with somatic embryos were transferred to MS medium supplemented with 1.0 mg/l ABA to induce the germination of somatic embryos. Plantlets from somatic embryos developed into whole plants on the basal MS medium. The regenerated plants were transplanted in a field and from them one mutant with alteration of root flesh color and yield was obtained. The root flesh color had changed from light-yellow in the wild-type plant into orange in the mutant. The yield of storage roots increased significantly from 218.8 ± 60 g (FW) in the original plant to 646.9 ± 150 g (FW) in the mutant per plant. Carotenoids content of the storage roots in the mutant had significant difference compared to the wild-type at the 1% level. Peroxidase isozymes and RAPD polymorphism were also analyzed between the mutant and the wild-type plants.     

白姜花胚性愈伤组织的诱导与植株再生体系的建立

将白姜花（Hedychium coronarium）未成熟花丝接种在MS + 4 mg ? L^-1 2,4-D + 4 mg ? L^-1 NAA + 1 mg ? L^-1 6-BA的培养基上,经过180 d的培养,诱导出3种愈伤组织：Ⅰ,浅黄色松散易碎;Ⅱ,白色疏松半透明水渍状;Ⅲ,黄色致密颗粒状。对愈伤组织继代培养基中的2,4-D、NAA和6-BA浓度进行优化,结果表明培养基中含有1 mg ? L^-1 2,4-D、0.25 mg ? L^-1 NAA、0.25 mg ? L^-1 6-BA时可获得胚性状态良好的愈伤组织。胚性愈伤组织在MS无机盐 + 0.25 mg ? L^-1 NAA + 0.5 mg ? L^-1 TDZ + 维生素B₅ + 100 mg ? L^-1谷氨酰胺 + 230 mg ? L^-1脯氨酸 + 100 mg ? L^-1麦芽提取物 + 45 g ? L^-1蔗糖的体胚诱导培养基中培养20 d后,转移到MS基本培养基上培养30 d,1 g胚性愈伤组织可获得50 ~ 60个体胚。成熟体胚在MS + 0.2 mg ? L^-1 IAA + 0. 5 mg ? L^-1 6-BA的萌发培养基上培养20 d时,体胚萌发率为85%。萌发的体胚转移到1/2 MS + 1 g ? L^-1活性炭的成苗培养基中可发育成正常植株,植株室外栽培成活率达90%。对100株再生植株的染色体数进行分析,发现3株三倍体（2n = 3x = 51）、6株四倍体（2n = 4x = 68）和2株六倍体（2n = 6x = 102）。     

油松未成熟合子胚离体培养诱导胚性愈伤组织

研究了油松未成熟合子胚不同发育时期和不同植物生长调节剂组合对油松胚性愈伤组织诱导的影响。结果表明:在沈阳地区,油松未成熟合子胚诱导胚性愈伤组织的最佳采种时间为7月10日左右;以DCR为基本培养基,添加较低浓度的KT和较高浓度的2,4-D有利于油松胚性愈伤组织的诱导,其中以添加2,4-D 2mg/L和KT 0.5mg/L时诱导率最高,可达88.3%。