茭白黑粉菌及茭白植株中DNA的提取方法

研究了茭白黑粉菌及茭白植株中基因组DNA的高效提取方法。采用改进的CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法提取DNA,根据琼脂糖凝胶电泳检测、A260/A280的测定和PCR扩增结果表明,用改进的CTAB法提取茭白黑粉菌及茭白植株基因组DNA,所得DNA无论是纯度还是完整性都比较好,适合于酶切和PCR扩增,可以用于分子生物学研究。     

菰黑粉菌分离方法的研究

以龙茭2号正常茭为材料,分别采用切片、研磨2种方法分离菰黑粉菌,并通过形态观察及ITS-5.8S rDNA序列克隆测序确认.结果表明,对膨大茎进行切片或研磨均能分离得到菰黑粉菌,其ITS序列大小在750 bp左右,通过NCBI比对分析确认,其中研磨法对新鲜组织的分离效率更高.     

茭白黑粉菌耐热突变体的辐射诱变选育与生长特征研究

来自茭白正常膨大肉质茎的黑粉菌（M—T菌株）经5kGy和10kGy 60Co-γ射线辐照后,筛选获得耐40℃的耐热突变体（H—T菌株）各10个菌株,而来自灰茭的黑粉菌（T菌株）未观察到耐热突变体。对3种菌株在不同温度下的生长特性作了初步分析。研究结果表明,M—T和T菌株均不能在32℃及以上温度生长;15～28℃范围内,H—T菌株的生长速率显著快于T菌株,后者又显著快于M—T菌株;相对于最适温度下的延滞期,显著延长延滞期的临界温度分别为15℃（M-T菌株）、20℃（T菌株）和20℃（H-T菌株）。因此,H-T菌株与M-T菌株的生长特性存在较大差异。     

菰黑粉菌不同菌株比较研究

从野生茭、单季茭、双季茭及灰茭中分离7个菌株,比较了其冬孢子的萌发率、菌落的形态、在不同温度下该菌的生长情况。研究表明,从野生茭和灰茭上分离的菌株与正常茭的菌株存在较大差异。初步认为灰茭和正常茭是由黑粉菌不同生理小种引起。     

茭白黑粉菌不同培养形态及能谱分析

将茭白灰茭内的黑粉菌厚垣孢子放置在PSA培养基上培养,结果表明:茭白黑粉菌能够在PSA培养基上完成其生活史,但形成菌丝体及厚垣孢子需要较长的时间;X-EDS分析发现不同培养形态之间的原子比值存在差异,其中采集的与培养的厚垣孢子差异明显.     

茭白遗传多样性与育种技术

茭白产品器官是茭白植株受菰黑粉菌侵染膨大后形成的肉质茎。通过分析茭白遗传多样性和遗传变异,认为茭白遗传变异来源很可能主要来自菰黑粉菌的遗传变异。讨论了茭白育种技术及需要研究的问题。     

脉冲电泳技术及其在食用菌研究中的应用

脉冲电泳是一种可用于分离20Kb到10Mb大分子量DNA的新型凝胶电泳技术,已应用于双孢蘑菇,香菇、侧耳、草菇等多种食用菌的核型分析及核型多态性的研究。本文介绍了真菌电泳核型分析的基本操作程序和主要影响因素,并阐述了脉冲电泳在食用菌种群特异性鉴定、染色体作图和遗传分析等方面的应用前景。     

菰黑粉菌对60Co-γ辐射的抗性研究

对PDA培养基上生长的菰黑粉菌进行了剂量范围为0～50 kGy的60Co-γ射线辐照.研究结果表明,菰黑粉菌对射线辐照具有极高的抗性,在10 kGy的60Co-γ射线辐照下仍可生长.本研究为筛选生产上有益性状黑粉菌突变体,用于创制茭白新品种作了探索.     

不同海拔高度对茭白生长及孕茭的影响

对在海拔高度200～1 000 m 地区栽培的单季茭的生长和孕茭特性进行研究。结果表明：高海拔地区栽培的茭白萌芽期、出叶和株高增速峰值均比低海拔处明显延迟。高海拔处茭白萌芽较低海拔处需要更多5 ℃以上的有效积温;各海拔处茭白出叶速率和株高增速与有效积温间呈正相关。各海拔高度孕茭先后顺序为：410 m ＞ 650 m ＞ 1 008 m ＞ 815 m。各海拔处茭白的孕茭期均发生在气温适宜孕茭的时间段内。因此,海拔高度对茭白生长和孕茭的影响主要是通过不同海拔高度的温度差异来实现的,高温抑制茭白黑粉菌的正常生长及代谢可能是茭白夏季高温条件下难以孕茭的重要原因。     

美味黑粉菌冬孢子萌发条件的研究

研究了疏亲水界面、温度、pH值和不同物质对美味黑粉菌冬孢子萌发的影响,以探讨美味黑粉菌冬孢子在自然生境条件萌发的适应性。研究结果表明,疏水界面促进美味黑粉菌冬孢子萌发,在疏水的聚苯乙烯塑料培养皿和茭白茎表皮上,萌发率高;冬孢子萌发的最适温度为27～30℃,温度过高或过低均抑制萌发;酸性条件促进冬孢子萌发,最适pH值为3～4;蔗糖促进冬孢子萌发,且以1%浓度最适,但同样浓度的甘露醇、葡萄糖、海藻糖、D-果糖等抑制冬孢子萌发。     

一种快速观察美味黑穗菌菌丝的新方法

茭白是一种水生蔬菜,是由美味黑穗菌侵染菰草形成的。当菰草植株逃避了真菌侵染,这些植株被称为＂雄茭＂。主要介绍了一种简单、迅速的细胞学染色方法,可清楚观察真菌在茭白植株中的的菌丝分布,以及用于早期迅速区分茭白和雄茭植株。     

草菇染色体核型的鉴定

利用等高锁状同源电场凝胶电泳（CHEF）,获得草菇的电泳核型.综合两组脉冲电泳的电泳条件、溴化乙锭染色以及DNA杂交分析结果,草菇染色体DNA至少可分为9个谱带.这一结果和以前用光学显微镜观察草菇的染色体数目的结果相一致.以混浊酿酒酵母和粟酒裂殖酵母等的相对迁移率为基准,草菇染色体长度估计在1.32～5.4Mb之间,染色体组总长约25Mb.     

茭白“雄茭”和“灰茭”的形成及遗传特性

以浙茭2 号（双季茭）的“雄茭”、“灰茭”和正常茭植株为试材,比较了“雄茭”、“灰茭”
和正常茭植株的株高、叶数、分蘖数、植株地上部（叶片、叶鞘和地上茎）生物量和地上茎的质量、形态
指标,同时研究了杀菌剂、水分、辐照等环境因子对“雄茭”和“灰茭”形成的影响,以及“雄茭”和“灰
茭”的遗传特性。结果表明：“雄茭”植株最高,“灰茭”次之,正常茭最矮;正常茭和“灰茭”分蘖数和
每墩植株地上部鲜质量显著高于“雄茭”;正常茭单个地上茎的鲜质量和体积最大,“灰茭”次之,“雄茭”
最小。田间施用杀菌剂可能是影响“雄茭”形成的主要因素,而辐照、干旱和自然环境条件下“灰茭”均
可形成。“雄茭”和“灰茭”具有遗传稳定性。     

桃叶片总蛋白双向电泳技术的研究

采用改进的O'Farrell双向电泳系统,研究适于桃树叶片蛋白质组分析的双向电泳方法。通过对不同蛋白样品提取方法、不同pH梯度范围、不同上样量的比较,探索出一套适合桃树叶片总蛋白分析的双向电泳方法,即以TCA/丙酮沉淀法提取叶片蛋白质样品,采用两性电解质配比pH3～10︰pH5～7为1∶4的IEF胶条,按90μg蛋白上样量,并结合适宜的双向电泳参数,可获得背景清晰、重复性较好、蛋白分辨率高的双向电泳图谱。经此方法分离的桃叶片蛋白质经串联质谱分析(MS/MS)得到了较好的鉴定。     

山葡萄花序蛋白质双向电泳技术体系的建立

【目的】为开展山葡萄花序蛋白质组学研究。【方法】以山葡萄(Vitis amurensis Rupr)花序为试材,通过对蛋白质提取方法、裂解液成分、胶条pH梯度的改进,建立了适于山葡萄花序蛋白质组学研究的最佳双向电泳技术体系。【结果】采用酚提取法提取花序蛋白质,用含有硫脲和DTT的裂解液Ⅱ裂解,选用17 cm pH 4～7的IPG胶条在适宜的双向电泳条件下分离,可以获得分辨率高、背景清晰且重复性好的双向电泳图谱,可以检测出1 088个清晰的蛋白点。【结论】酚提取法适于山葡萄花序蛋白质的提取,硫脲和DTT可增强花序蛋白质的溶解性。     

苹果叶片总蛋白提取及其双向电泳分析

蛋白质提取方法和电泳条件的建立是蛋白质组学研究中双向电泳分析的关键。通过比较不同提取方法,包括酚/SDS抽提、TCA-丙酮沉淀法、甲醇/醋酸铵沉淀法以及改良HB-酚抽提方法。此外,还优化了样品上样量、等电聚焦程序设置等条件。从所得2-D图谱分离效果来看,改良HB-酚抽提方法所得蛋白点数最多,2-D图谱背景清晰、分离效果好,明显优于其他3种方法。300μg上样量可作为苹果叶片总蛋白2-DE分析的理想的上样量,同时优化了等电聚焦程序,最终得到的2-D图谱分离效果较为理想。该研究的开展也为苹果叶片蛋白质组学后续研究奠定了基础。