硫辛酸和甜菜碱在小麦组织培养中的作用

为了研究不同浓度的硫辛酸和甜菜碱对农杆菌侵染后小麦愈伤组织的影响,选取小偃22、Z50和郑麦366的幼胚为外植体,进行农杆菌介导的遗传转化。在抑菌培养基中分别添加2、4和8 mmol·L~(-1)的硫辛酸和10 mmol·L~(-1)的甜菜碱,于5、10和15 d分别观察统计小麦愈伤组织的褐化和水渍化程度。结果表明,添加硫辛酸可有效降低愈伤组织的褐化程度,Z50中添加4 mmol·L~(-1)硫辛酸可使褐化程度较CK降低89.50%,但会提高愈伤组织的水渍化程度;添加10 mmol·L~(-1)甜菜碱对愈伤组织的褐化程度和水渍化程度均无明显影响。     

大豆科丰14子叶节遗传转化体系的优化

科丰14是一个适应性较广的大粒型大豆品种,以农杆菌介导的子叶节法为转化途径,研究农杆菌侵染时间、6-BA浓度及培养基中添加硫代硫酸钠对转化率的影响,以建立适宜科丰14的子叶节遗传转化体系。结果表明:当农杆菌侵染外植体时间为15 min、丛生芽培养基中6-BA的浓度为1.50 mg·L-1时产生的丛生芽率最高,可达72.92%;在共培养基中加入1 mmol·L-1的硫代硫酸钠能有效防止外植体褐化,提高丛生芽率;利用GUS基因染色技术检测转化效果,表明在大豆常规转化体系的基础上,上述措施可提高科丰14的转化效率。     

农杆菌介导大豆子叶节遗传转化体系的优化

利用农杆菌菌株EHA105,对17个栽培大豆品种的大豆子叶节进行了侵染,从大豆基因型、氯气灭菌时间、外植体状态、菌株活力、侵染浓度、侵染时间、共培养时间等方面进行了优化。结果表明:氯气灭菌14~18 h,可在不影响大豆种子活力的同时最大限度的减少污染;暗处理1 d的外植体活力高于光照处理5~7 d的外植体;菌液浓度(OD600nm)在0.8~1.0且侵染浓度(OD600nm)为0.6~0.8时GUS瞬时表达率最高;适宜的侵染时间和共培养天数分别为30 min和4 d。在上述优化研究基础上,形成一套综合的转基因体系,该体系的最高转化率可达3.33%。不同处理下的GUS瞬时表达率以及17个大豆品种的丛生芽诱导率综合评价显示,适宜转化的基因型为TL-1、HC-3、HC-6、Williams 82。     

二步培养和AgNO3对甘蓝型油菜子叶和下胚轴芽再生的影响

以甘蓝型油菜（Brassica napus L.）品种“浙双758”为材料,研究二步培养及添加AgNO3对甘蓝型油菜子叶和下胚轴外植体离体再生的影响。外植体先在含0.5-1.5 mg/L 2,4-D的MS培养基上 “预培养”3 d 或7 d诱导愈伤组织的产生,再转到含有3 mg/L BA和0.15mg/L NAA及添加或不添加2.5 mg/L AgNO3的分化培养基上诱导芽的分化。结果表明,外植体愈伤组织诱导率和芽再生率与2,4-D浓度、预培养时间和AgNO3密切相关;分化培养基中添加银离子可显著增加不定芽的再生频率;二步培养及添加AgNO3可使半子叶、完整子叶和下胚轴外植体芽再生频率分别达到了96.1%,96.7%和96.7%。     

大豆子叶节植株再生体系的研究

以大豆品种"辽豆17"、"辽豆18"和"辽豆23"子叶节为外植体诱导不定芽的发生.结果表明:随着培养基中6-BA浓度的增加,每块外植体上不定芽的数量呈增加的趋势,当向1/2MSB培养基中添加0.05 mg·L-1IBA和4.0 mg·L-16.BA时,不定芽的诱导率最高.比较不同的外植体获得方法,保留半片子叶的外植体诱...     

凌云白毫茶组培无菌体系的建立与抗褐化研究

以凌云白毫茶嫩芽为外植体,建立凌云白毫茶无菌体系,探讨抗褐化措施,建立白毫茶组织培养体系,为白毫茶优良品种产业化种植提供种苗技术基础。结果表明:以白毫茶树带腋芽茎段和顶芽为外植体,浓度为0.1%HgCl2溶液对外植体进行灭菌10 min,污染率最低;在此基础上,预处理采用0.1%高锰酸钾溶液浸泡10 min,抗褐化效果和降低污染率都较明显,褐化率低至30%;选用腋芽茎段的褐化率和污染率均比顶芽低,在培养基中添加活性炭1.5 mg/L,能降低褐化率至16.7%。凌云白毫茶初代培养使用6-BA诱导腋芽效果好,浓度为2.0 mg/L的诱导率达到100%;对无菌芽增殖来说较适宜的培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+7g/L琼脂+30 g/L蔗糖,增殖倍数为3.3,长势最好。     

大豆子叶节遗传转化体系的优化研究

为了提高大豆转化效率,建立一个稳定高效的大豆遗传转化体系,选择了4个代表性基因型大豆子叶节为外植体,以子叶节和丛生芽GUS瞬时表达率为指标,优化了大豆遗传转化过程。结果表明:在侵染阶段分别进行超声波和抽真空辅助处理,GUS染色显示,4个基因型品种处理不同时间后遗传转化效率均有不同程度提高,超声波30 s或者抽真空2 min后农杆菌的侵染效率提高最为明显,转化效率分别提高8%~42%、16%~41%。在芽诱导前期进行PPT浓度筛选,4种基因型的最适PPT浓度均为0.2 mg·L~(-1),转化效率提高18%~33%。     

抗氧化剂对橡胶树胚状体农杆菌侵染效果的影响

以体细胞胚为侵染受体，通过在共培养基添加抗氧化剂来研究抗氧化剂对橡胶树农杆菌侵染效率的影响。结果表明，参试的4种抗氧化剂中，GUS基因瞬时表达效率高低顺序为硝酸银＞二硫苏糖醇＞L-半胱氨酸＞硫代硫酸钠，共培养基中添加20 mg/L硝酸银的GUS瞬时表达率最高，染色总胚数最高达96.7%，显著高于对照76.7%。因此，抗氧化剂的应用有助于提高体细胞胚的农杆菌侵染效率。     

海马齿再生体系的优化及GUS基因的转化

以海马齿无菌实生小苗的叶片为外植体,对不同激素浓度和组合以及不同pH值等培养条件进行实验比较.结果表明:适于愈伤组织诱导的培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖3%,诱导率达100%;适于芽分化的培养基为MS+NAA 3.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L,分化率达到77.4%;诱导愈伤组织形成培养基的最适pH值为4.5,而诱导愈伤组织分化培养基的最适pH值为5.0.以小苗叶片为外植体材料和农杆菌介导的方法进行GUS基因的转化,组织化学染色检测发现共培养2 d后的外植体中有蓝色斑点产生,在转化2个月后的外植体上形成的愈伤组织也存在点状的蓝色斑点.说明GUS基因已转入海马齿外植体中.     

花生组织培养及高频率植株再生

以14个花生品种为材料,对花生组织培养及植株再生进行了研究。将花生成熟胚幼叶、子叶和下胚轴外植体接种到添加0～2 mg/L NAA 和0～10 mg/L BAP的MSB5（MS无机盐 + B5有机）培养基上诱导愈伤,再转到添加0～10 mg/L BAP的分化培养基上诱导不定芽。结果表明,诱导培养基中添加的激素及其浓度对以后在分化培养基上不定芽分化有重要作用,以添加1 mg/L NAA 和6 mg/L BAP最利于不定芽分化;分化培养基中添加4 mg/LBAP利于不定芽伸长及植株再生;幼叶外植体分化不定芽频率明显高于子叶和下胚轴;不同基因型不定芽分化率存在明显差异,白沙1016和花育23幼叶外植体获得了较高的不定芽分化率,分别达到91.8%和88.5%。再生苗经生根培养和驯化后,移栽花盆可正常开花结果。     

"小粒黄"大豆子叶节丛生芽的诱导

为建立大豆子叶节高频再生体系,以"小粒黄"大豆子叶节为外植体,研究了萌发天数、6-BA及TDZ浓度对大豆子叶节丛生芽诱导的影响.结果表明: 随着萌发天数的增加丛生芽诱导率下降,萌发7 d的子叶节外植体对丛生芽诱导率最高,达到82.6%.附加不同浓度6-BA 和 TDZ的1/2MSB5的基本培养基上均能诱导出丛生芽,但丛生芽诱导率也不同,以1.5 mg·L-16-BA 和 0.2 mg·L-1 TDZ配比时,丛生芽诱导率最高,达到85.7%.     

大豆胚尖再生体系的研究

以吉大豆1号、2号等5个大豆品种为材料,胚尖为外植体,研究不同浓度6-BA对不同基因型胚尖丛生芽诱芽率和再生率的影响,筛选得到适合于胚尖再生系统的基因型吉大豆2号,并以吉大豆2号为材料,研究侵染阶段加入脯氨酸和硝酸银对胚尖褐化率的影响,将获得的再生植株进行生根试验.结果表明:共培养基中添加3.0 mg·L-1脯氨酸和3...     

蝴蝶兰花梗腋芽诱导及防褐化的研究

以蝴蝶兰花梗腋芽为外植体,研究基本培养基对外植体诱导的影响,并通过比较转接培养基周期、低温暗培养和添加防褐化剂等对缓解外植体褐化的作用。结果表明,1/2MS培养基诱导腋芽萌发效果好,培养初期低温暗处理、缩短转接周期和0.5g/L的Vc可有效抑制植株体褐化,促进外植体诱导萌发。     

根癌农杆菌介导大果西番莲基因转化

以大果西番莲种子无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,在添加不同质量浓度BA和IAA的MS系列培养基上进行不定芽的诱导,确定MS+BA2.0mg·L-1+IAA0.1 mg·L-1为最适的不定芽诱导培养基,下胚轴、子叶外植体诱导芽分化率分别为88.33％,90.00％。将诱导出的不定芽接种在添加不同质量浓度IBA和NAA的MS系列培养基上,进行不定根的诱导,确定MS+NAA0.5mg·L-1+IBA0.2mg·L-1为最适的不定根诱导培养基,生根率达92.86％。用三亲交配法将质粒pBICr先转移到E.coli DH5α,然后转移到根癌农杆菌。利用含有NPT-Ⅱ基因和CaMV35S启动子控制下的黄瓜花叶病毒外壳蛋白（CMV-CP）反义基因的表达载体,通过根癌农杆菌介导法将其导入西番莲受体细胞,在质量浓度为50mg·L-1的Kan+选择压力下培养,获得大果西番莲CP转基因再生植株。      

PP_(333)对马铃薯试管叶片与茎段愈伤组织诱导与分化的影响

以马铃薯试管叶片和茎段为外植体,研究不同浓度PP333对愈伤组织诱导及分化的影响效应,结果表明:在诱导培养基中添加0.01mg·L-1PP333可使叶片和茎段均形成较优质的愈伤组织,且茎段愈伤组织芽和根的分化率达到最高,分别为22.8%和14.8%;对叶片诱导愈伤组织而言,各PP333浓度处理均无芽的分化,而随浓度的增加,根的分化也逐渐受到抑制。     

玉米成熟胚愈伤组织诱导及褐化控制研究

玉米成熟胚组织培养过程中发生褐化可影响愈伤组织的诱导、生长和组培过程的进行。实验研究探讨3种防褐剂硝酸银(AgNO3)、活性炭和PVP及培养条件对玉米成熟胚愈伤组织诱导和继代过程中褐化控制的作用。结果表明,一定浓度的AgNO3能明显减轻褐化,其中愈伤组织诱导时10.0 mg/LAgNO3控制外植体褐化的效果最佳;愈伤组织继代培养时7.0 mg/LAgNO3控制较为适宜。2.0 g/L活性炭能有效抑制外植体的褐化,高于此浓度会抑制愈伤组织的诱导;继代培养初期在含2.0 g/L活性炭的培养基中培养7 d,不仅能有效控制褐化,还在一定程度上促进了愈伤组织的生长。愈伤组织诱导时1.0 g/LPVP能在有效控制外植体褐化的同时促进愈伤组织的形成。暗培养能显著减轻褐化的发生,有利于愈伤组织的诱导。     

火焰兰茎段侧芽离体再生及褐化的研究

以火焰兰的茎段为外植体，探讨不同植物激素配比对茎段侧芽萌发和生根壮苗的影响，以及不同培养基配方和不同添加剂对火焰兰生长过程中褐化现象的抑制作用。结果表明：最佳侧芽诱导培养基为MS＋6-BA 3.0 mg/L＋NAA 0.5mg/L，培养40 d，后诱导率可达97.95%；添加活性炭0.3 g/L可有效抑制侧芽诱导过程中的褐化现象，褐化率仅为13.17%；1/2 MS＋6-BA 0.2 mg/L＋NAA 1.0 mg/L＋AC 0.5 g/L生根效果最好，生根率达到100%，且植株生长健壮。利用火焰兰茎段侧芽能够离体再生获得瓶苗，建立高效的火焰兰茎段为外植体的离体再生体系，为扩大拓宽火焰兰组织培养外植体来源和快速繁殖技术提供技术支撑。     

大豆组织培养再生植株研究

不同基因型的大豆子叶节在添加适宜BA和IBA的1/2MS培养基上经过二周的预培养和二周芽诱导培养，可获得高频率的丛生芽，及时将丛生芽从高浓度的BA转至低浓度BA培养时芽可长出植株，再转至添加NAA的生根培养基上形成完整的植株。经过40-60天的培养，每个外植体可得到20-30个芽。芽增殖数和植株再生率因基因型、激素、切割位点、诱导时间等不同而有明显差异。初步确立了丛生芽发生和植株再生的适宜条件和程序，建起了以子叶节为外植体适合用于农杆菌介导和基因枪方法进行遗传转化的高频再生体系。     

TDZ和暗培养对蝴蝶兰叶片不定芽发生的影响

以蝴蝶兰幼嫩花梗诱导的无菌苗叶片为外植体,以MS为基本培养基,研究不同暗培养时间和TDZ浓度对蝴蝶兰叶片诱导不定芽的影响。结果表明：暗培养和TDZ对接种的蝴蝶兰叶片的成活率均具有显著影响,暗培养60 d时,叶片的存活率在90%以上,而在同一暗培养时间条件下,叶片的存活率随着TDZ浓度的增加而上升;在TDZ浓度为3.0 mg/L,暗培养60 d时,蝴蝶兰存活叶片不定芽的诱导率最高,达到93.45%;诱导的不定芽数最多,平均每个外植体诱导的不定芽数为13.22个。综合考虑外植体的成活率、不定芽诱导率和诱导的不定芽数,蝴蝶兰叶片诱导不定芽的最佳条件为：MS＋TDZ 3.0 mg/L,暗培养60 d。     

IBA和6-BA浓度配比对诱导大豆下胚轴不定芽的影响

以大豆黑农44下胚轴为外植体,研究不定芽诱导培养基中IBA和6-BA浓度及配比对不定芽诱导与伸长的影响。结果表明,以MS基本培养基+1.0 mg·L-16-BA为大豆无菌苗培养基,在诱导培养基中不添加6-BA时有利于下胚轴不定芽的诱导,添加0.1 mg·L-1IBA时,培养14 d不定芽诱导率可达96.69%,每个下胚轴形成2.31个芽(芽长≥0.5 cm);不定芽诱导培养基中添加高浓度6-BA和IBA组合不利于大豆下胚轴不定芽的诱导与伸长。