毁灭炭疽菌RAPD和ISSR-PCR最佳反应体系的建立

对影响PCR反应的主要因子-Md2+、dNTP、Taq酶、引物浓度进行优化,建立起适合于毁灭炭疽菌基因组DNA的RAPD和ISSR反应体系.RAPD反应体系(25μL):Mg2+浓度为2.5 mmol/L,dNTP浓度为200 μmol/L,Taq酶用量为1U,引物浓度1μmol/L.ISSR反应体系(25μL)为:Mg2+浓度为2 mmol/L,dNTP浓度为150μmol/L,Taq酶用量为0.5 U,引物浓度为1.25 μmol/L.     

外源NO供体硝普钠和镍对玉米生长及抗氧化酶活性的影响

【目的】研究外源NO供体硝普钠(SNP)和镍(Ni)共同作用下玉米幼苗生长及抗氧化酶活性的变化,为镍污染防治提供参考。【方法】以"吉农669"为供试玉米品种,以NO供体SNP和镍处理玉米幼苗,共设6个处理(1.Ni 0mmol/L+SNP 0mmol/L,对照;2.Ni 0mmol/L+SNP 0.05mmol/L;3.Ni 0mmol/L+SNP 0.1mmol/L;4.Ni 1.0mmol/L+SNP 0mmol/L;5.Ni 1.0mmol/L+SNP 0.05mmol/L;6.Ni 1.0mmol/L+SNP 0.1mmol/L),分析各处理下玉米幼苗生长生理指标和抗氧化酶活性的变化。【结果】SNP能够明显缓解由于镍所造成的玉米鲜质量、干质量下降及根系生长受阻的情况;1.0mmol/L镍(处理4)使玉米植株体内镍含量升高的同时还抑制了铁从玉米根系向地上部分的转移,导致植株地上部铁含量下降,而SNP能够缓解这种抑制作用,使植物体内镍含量降低,铁含量升高。另外,SNP可缓解镍造成的玉米叶片SPAD值下降以及过氧化氢和丙二醛含量升高,增加玉米叶片的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)等抗氧化酶活性,且高浓度(1.0mmol/L)SNP效果较好。【结论】外源NO供体SNP能减轻镍对玉米幼苗生长所产生的伤害。     

华山松SRAP-PCR反应体系的优化

为建立华山松SRAP-PCR反应体系,研究先采用L16(45)正交设计对影响华山松SRAP反应的5个因子(DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq酶)在4个水平上进行优化试验。结果表明:各因素对SRAP反应的影响依次为:Mg2+>dNTPs>Taq酶>DNA模板>引物;对SRAP反应结果影响较大的3个因子(Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq酶浓度)进行单因素试验;确立华山松SRAP反应最佳体系为:20μL的PCR体系中含有Mg2+2.2mmol/L、dNTPs0.25mmol/L、DNA模板60ng、Taq酶0.8mol/s、引物0.8μmol/L。将该体系用于华山松的SRAP扩增能获得稳定、清晰的多态性条带。     

中药艾总DNA的提取及ISSR-PCR反应体系的优化

为探索艾的遗传多样性,采用正交试验方法 L16(45)与单因素分析法相结合对其PCR反应的5个主要因素(Mg2+、引物、模板DNA、dNTPs以及Taq酶)在4个水平上分别进行优化。结果表明:得到最佳的反应体系(20μL)为模板DNA 60ng,Mg2+2.5mmol/L,引物0.8μmol/L,dNTPs 0.15mmol/L,Taq酶1.0U。通过统计数据分析,对艾ISSR-PCR反应的影响程度依次为Mg2+浓度引物模板DNAdNTPs浓度Taq酶。     

蚕豆RAPD反应体系的建立与优化

利用正交设计L16(45)对蚕豆RAPD-PCR反应的5因素(Taq酶、Mg2+、dNTP、模板DNA、引物)在4个水平上进行优化试验,结果表明蚕豆最佳的RAPD-PCR的反应体系(20μl)为:10×缓冲液2.0μl,1.0 U Taq DNA 聚合酶、1.5 mmol/L Mg2+、0.4mmol/L dNTPs、3 mmol/L引物、200 ng 模板 DNA.     

EDTA和金属离子对多聚半乳糖醛酸酶酶活力的影响及其动力学研究

实验以EDTA和不同金属离子为效应物,果胶为反应底物,研究不同浓度的EDTA,Na+,K+,Ca2+,Cu2+,Zn2+,Mn2+,Fe2+,Fe3+,Ag+和Ba2+对多聚半乳糖醛酸酶(PG)催化活性的影响。结果表明,一定浓度的Cu2+,Zn2+,Mn2+,Fe2+和Fe3+对PG有激活作用,对PG产生最大激活作用的浓度分别为0.3mmol/L,0.4mmol/L,0.3mmol/L,0.3mmol/L和0.6mmol/L,EDTA,Ca2+,Ag+和Ba2+对PG有抑制作用,Na+和K+对PG活性没有影响。动力学研究表明,0.3mmol/LNa+和K+处理后,PG的Km和Vmax基本没有发生变化,2mmol/LEDTA和0.3mmol/LCa2+处理后,PG的Km和Vmax均下降,0.3mmol/LCu2+,Zn2+,Mn2+,Fe2+,Fe3+处理后,PG的Km和Vmax都上升,0.3mmol/LAg+和Ba2+处理后,PG的Km上升,Vmax下降。     

磷对平邑甜茶根系质膜H~+-ATPase活性的调控

用含NaH2PO4浓度分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mmol/L的营养液处理后,平邑甜茶根系质膜H+-ATPase的活性随着根区磷浓度的升高而升高,并在1.0 mmol/L处达到峰值;该酶的对硝基苯磷酸(PNPP)水解活性也明显升高,其Km值由3.48 mmol/L下降至0.97 mmol/L;同时结合抑制剂试验,钒酸钠对幼苗根系质膜H+-ATPase的抑制效应也得到了加强。     

Ca2+对NaCl胁迫下番茄种子萌发和幼苗的影响

采用培养皿发芽法和沙培盆栽法,以150 mmol/L NaCl模拟盐胁迫条件,分别研究了外源Ca2+对盐胁迫下番茄种子萌发和幼苗生长的影响.结果表明:较低浓度的Ca2+ (5～20 mmol/L)总体上对盐胁迫下番茄种子的发芽和幼苗的生长有明显的促进作用,丙二醛(MDA)的含量显著降低;较高浓度(＞20 mmol/L)的Ca2+,抑制了种子的发芽和幼苗的生长,MDA含量极显著上升;Ca2+浓度在0～25 mmol/L范围内,对盐胁迫条件下生长的番茄体内过氧化物酶(POD)活性影响无显著性差异.     

Hg2+胁迫对小麦幼苗POD、CAT和SOD同工酶的影响

[目的]为研究Hg2+对植物的毒害机理提供理论依据。[方法]以小麦为材料,研究了不同浓度Hg2+胁迫对小麦幼苗中的过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)同工酶活性变化的影响。[结果]在Hg2+浓度低于0.100 mmol/L时,对小麦幼苗生长的影响不明显;在Hg2+浓度高于0.100 mmol/L时,将会显著阻碍小麦的正常生长发育。小麦幼苗的不同组织对Hg2+胁迫的抵抗强度有所不同,表现为其叶片和根的抗胁迫性比萌发的种胚要强。在小麦幼苗受Hg2+胁迫时,POD、CAT和SOD 3种抗氧化酶同工酶中,CAT同工酶最为敏感。[结论]0.100 mmol/LHg2+浓度是小麦幼苗能否正常生长的阈值。     

重金属铜、锌、铁、铅污染对白菜幼苗鲜重及叶绿素含量的影响

以大白菜幼苗为试验材料,研究了不同浓度铜(Cu)、锌(Zn)、铁(Fe)、铅(Pb)等重金属因子胁迫对白菜幼苗单株鲜重和叶绿素含量。结果表明:随着重金属Cu、Zn、Fe、Pb溶液处理浓度的提高,大白菜幼苗的单株鲜重均逐渐降低,而叶绿素含量则随着重金属处理浓度的增加呈现先升后降的趋势。另外,低浓度的重金属(Cu2+0.1mmol/L、Zn2+1mmol/L、Fe2+0.2mmol/L、Pb2+1mmol/L)并不影响白菜叶绿素的合成,甚至有促进作用;当达到一定处理浓度(Cu0.1mmol/L、Zn1mmol/L、Fe2+0.2mmol/L、Pb2+1mmol/L)时,大白菜生长明显受到抑制。     

几种化学物质诱导草莓抗根腐病的初步研究

利用叶圆片法对水杨酸(SA)、草酸(OAA)、磷酸氢二钾(K2HPO4)和壳聚糖(CTS)4种化学物质诱导草莓抗根腐病(Pestalotiopsis photiniae(Thuem)Y.X.Chen)的作用进行了研究,并对其机理进行了初步探讨。结果显示,SA在0.5 mmol/L浓度下诱导抗病效果达91.9%,OAA在20 mmol/L浓度下诱导抗病效果达96.4%,K2HPO4和CTS在供试浓度范围内均无诱导抗病作用;4种化学物质中只有CTS有直接抑菌作用,对根腐病菌丝生长的抑制中浓度为1.983 mg/mL,其余3种均无直接抑菌作用;用SA和OAA诱导处理后,草莓叶片中多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性变化表明,0.5 mmol/L SA诱导处理草莓叶片POD活性至第1天达到最大值,比对照增加了252.3%,而PPO和PAL活性变化不大;20 mmol/L OAA诱导处理草莓叶片PAL活性至第4天达到最大值,比对照增加了37.8%,而PPO和POD的活性变化不明显。     

茉莉酸甲酯和剪叶互作研究

[目的]研究茉莉酸甲酯（MeJA）与剪叶互作对烟草防卫性酶一苯丙氨酸解氨酶（PAL）与多酚氧化酶（PPO）的影响。[方法]以云烟85为供试烟草,通过测定PAL和PI）o活性并利用SPSS12．0版统计软件对测定结果进行Duncan’s分析,研究了机械损伤与同源信号激发子MeJA闻的互作。[结果]浓度5mmol／LMeJA单独激发的PAL活性最高,其次是浓度5mmol／LMeJA＋剪叶双激发的PAL活性．再次是浓度1mmol／LMeJA单独激发和浓度1mmol／LMeJA＋剪叶双激发的PAL活性,对照的PAL活性最低,MeJA单激发的PAL活性高于其对应双激发的PAL活性,但差异不显著。浓度5mmol／LMeJA单独激发的PPO活性最高,其次是浓度5mmol／LMeJA＋剪叶双激发的PPO活性,再次是浓度1mmol／LMeJA单独激发和浓度1mmol／LMeJA＋剪叶双激发的PPO活性,对照的PP0活性最低。MeJA单激发的PP0活性高于其对应双激发的PP0活性,且差异显著。[结论]该试验初步研究了MeJA与剪叶的互作。     

乌贼墨多酚氧化酶的部分特性

以乌贼墨为材料，用0.05mol/L pH7.2的磷酸盐缓冲液提取多酚氧化酶（PPO），30%-80%的硫酸铵分级沉淀后通过DEAE-Sepherose CL-6B层析柱分离，合并具有较高酶活性的洗脱液，透析、浓缩后用于酶的特性研究。通过金属离子对该酶活性影响的研究表明，在mmol/L水平，铜离子和铅离子对该酶具有强烈抑制作用，但铜离子在20μmol/L浓度时，对酶却有显著激活作用。在mmol/L水平，Na^ 、K^ 、Mg^2 和Ca^2 对PPO活性无显著影响。在无机阴离子中HSO3^-对酶活性有强烈抑制作用，在10mmol/L时抑制效率达100%，而Cl^-、Br^-、I^-和SO4^2-则对PPO活性无显著影响。     

乌贼墨多酚氧化酶的部分特性

以乌贼墨为材料，用0.05mol/L pH7.2的磷酸盐缓冲液提取多酚氧化酶（PPO），30%-80%的硫酸铵分级沉淀后通过DEAE-Sepherose CL-6B层析柱分离，合并具有较高酶活性的洗脱液，透析、浓缩后用于酶的特性研究。通过金属离子对该酶活性影响的研究表明，在mmol/L水平，铜离子和铅离子对该酶具有强烈抑制作用，但铜离子在20μmol/L浓度时，对酶却有显著激活作用。在mmol/L水平，Na^ 、K^ 、Mg^2 和Ca^2 对PPO活性无显著影响。在无机阴离子中HSO3^-对酶活性有强烈抑制作用，在10mmol/L时抑制效率达100%，而Cl^-、Br^-、I^-和SO4^2-则对PPO活性无显著影响。     

石榴果皮中多酚氧化酶测定最佳试验条件的确定

以陕西天红蛋石榴品种为试材,对石榴果皮中的多酚氧化酶(PPO)活性测定的最佳试验条件进行了初步研究,确定了其催化邻苯二酚氧化后产物的最高吸光度值,并分别研究了底物浓度、pH值、温度、反应后放置时间以及酶抑制剂浓度等条件对PPO活性的影响。结果表明:以邻苯二酚为底物时,底物浓度宜大于20mmol/L,其最适波长为420nm,最适pH值为6.8,最适温度为50℃,反应时间不宜超过20min,反应完成后在20min后测定PPO的活性最为稳定。抑制剂NaHSO4的有效抑制浓度为0.8mmol/L。     

水杨酸对大丽花多酚氧化酶的影响

目的探讨如何提高大丽花的抗病性．方法以大丽花为实验材料,使用水杨酸（SA）叶面喷施处理方式,分析在水杨酸处理其植株叶片后,随时间变化,不同浓度的水杨酸对PPO活性的影响,为研究大丽花的抗病性提供实验依据．结果本品种大丽花的PPO最适pH为5．8;SA对大丽花PPO有一定的影响．用低于0．5mmol／L的SA处理后的大丽花,PPO活性无显著影响;1～2mmol／L的SA对PPO活性起促进作用,并且于24h达到高峰;而3mmol／L的SA对PPO活性起明显的抑制作用．而用以上几组浓度的SA处理大丽花后,PPO活性在48～60h之后逐渐恢复到未处理状态．结论外源SA对大丽花进行处理后对PPO活性在一定时间内有诱导作用．     

黄冠梨果皮多酚氧化酶的酶学特性

[目的]研究黄冠梨果皮中多酚氧化酶(PPO)的酶学特性,为黄冠梨的贮藏保鲜和加工提供理论基础。[方法]采用分光光度法分别测定在不同反应pH值、不同反应温度、不同底物和抑制剂条件下的PPO活性。[结果]该酶的最适温度为25℃,50℃以上PPO活力明显受抑制;最适pH值为6.0;以邻苯二酚为底物时,Km=0.031 7 mol/L;以绿原酸作为底物时,Km=0.018 9 mol/L;在选定的浓度范围内(0.2~1.0 mmol/L),所用抑制剂的抑制能力从强至弱排列为L-Cys>Vc>Na2S2O3>NaHSO3>EDTA-Na2。较高浓度的CaCl2、NaCl也可对黄冠梨果皮PPO产生抑制作用。Cu2+能提高黄冠梨果皮PPO活性。[结论]绿原酸在黄冠梨果皮酶促褐变中的作用值得重视;采取调节pH值、热烫、添加安全抑制剂可以明显控制该PPO活性。     

采后硅酸钠处理对苹果梨青霉病的抑制

离体条件下,硅酸钠可抑制Penicillium expansum的菌丝生长,当浓度达到50 mmol/L时菌丝生长可被完全抑制.采用不同浓度的硅酸钠浸泡果实,可显著降低苹果梨损伤接种P.expansum的病斑面积,其中以200mmol/L的处理效果最好.硅酸钠处理可有效提高果实体内的过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)活性,促进过氧化氢(H2O2)和超氧化物阴离子(O2-)的产生,但对过氧化氢酶(CAT)和超氧化物岐化酶(SOD)活性的影响不大.由此表明,硅酸钠对梨果实青霉病的抑制与其的直接抑菌作用和诱导体内的抗性有关.     

外源茉莉酸对菜豆和番茄幼苗3种防御酶的诱导效应

为明确外源茉莉酸（JA）对菜豆和番茄化学防御的诱导作用,以鲁阳地豆菜豆和红珍珠番茄为材料,研究4种浓度（0.001、0.01、0.1和1 mmol/L）JA喷施2种植物幼苗后叶片多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD) 和脂氧合酶(LOX)的活性变化。结果表明,JA处理可以提高菜豆和番茄叶片3种防御酶的活性,活性提高与诱导的JA浓度和诱导时间有关。0.001 mmol/L JA对菜豆叶片3种防御酶诱导作用不明显,0.1 mmol/L JA诱导效果均显著。4种JA浓度对番茄叶片POD和PPO均具有显著的诱导作用,但0.001和1 mmol/L JA对LOX诱导效果不明显。0.1 mmol/L JA处理72 h后对番茄叶片LOX诱导作用最强,但处理24 h后对番茄叶片POD和PPO以及菜豆叶片3种防御酶诱导作用最强。     

外源过氧化氢处理对采后荔枝褐变及活性氧代谢的影响

【目的】研究外源过氧化氢（H2O2）处理对采后荔枝褐变及活性氧代谢的影响,为荔枝采后保鲜提供途径,以期提高果实的贮藏品质。【方法】以清水处理为对照（CK）,采用不同浓度（1、5和10mmol/L）的外源H2O2浸泡荔枝3min,在4℃下冷藏放置,每隔3d取样一次,进行失重率、褐变指数、丙二醛（MDA）含量、细胞膜透性、...