辽宁绒山羊胎儿皮肤中Bcl-2\Bax基因表达变化的研究

胎儿期是辽宁绒山羊皮肤及毛囊形成的时期,在这个时期,Bax与Bcl-2基因能否在皮肤及毛囊表达,则与其发育及成熟密切相关.采用免疫组织化学方法,对辽宁绒山羊胎儿期的45、60、75、90、105、120和135 d胎儿皮肤上Bax和Bcl-2蛋白的表达量变化进行研究.结果表明:初级毛囊和次级毛囊、表皮、皮脂腺、汗腺上都存在Bax和Bcl-2阳性表达;两种蛋白在内根鞘上呈强表达,而在真皮乳头则弱表达.初级、次级毛囊上Bax平均光密度先增加后维持,而Bcl-2的平均光密度则是先不断增加,后稍有降低,Bax/Bcl-2比值的变化趋势也是降低的,表明随着初级和次级毛囊发育逐步成熟,细胞凋亡现象也逐渐减弱.     

Bax/Bcl-2基因在成年辽宁绒山羊皮肤次级毛囊表达及年周期变化规律

绒山羊的皮肤毛囊具有在一个生物年内呈周期性发育的特性,已有研究表明,在绒山羊毛囊周期性发育的各时期存在细胞凋亡现象。而作为调控细胞凋亡的Bax/Bcl-2基因在绒山羊皮肤毛囊的表达是否与其各个发育时期相关,尤其是二者在毛囊发育哪个时期为优势基因,将对阐明绒山羊毛囊发育过程中细胞凋亡所发挥的生物机制具有重要意义。本研究采用免疫组化方法,检测成年辽宁绒山羊母羊皮肤中Bax和Bcl-2蛋白表达部位及表达量年周期变化情况。研究结果表明:在不同月份辽宁绒山羊成年母羊皮肤次级毛囊的毛球、内根鞘、外根鞘上,以及汗腺、皮脂腺以及表皮上均可见Bax和Bcl-2阳性表达;次级毛囊Bax表达量在5月份和9月份最高,Bcl-2表达量在5月份最高,次级毛囊Bax/Bcl-2比值在每年的4月份和7月份出现2个峰值,10月则为全年的最低点。     

蒙古绵羊在不同季节的生长过程中Bcl-2与Bax基因在皮肤中的表达

笔者应用免疫组化s-p法,检测个不同月份石蜡包埋组织切块Bcl-2和Bax基因的表达情痀。试验结果：Bcl-2在皮肤细胞内表达情痀各个月份不同,4月和10月之间无显著差异（P＞0.05）,而分别与5,6,8,12月4个月份之间差异显著（P＜0.05）;5,6月和8月之间无显著差异（P＞0.05）,而分别与4,10,12月3个月份之间差异显著（P＜0.05）。皮肤的厚度与Bcl的表达呈正比关系。4月份起开始变薄,5-6月份为最薄。Bax在皮肤细胞内表达4,5;6,8;10,12三组组内不同月份Bax表达差异不显著（P＞0.05）,而组间表达差异均显著（P＜0.05）Bax在5-6月份Bax表达水平急剧上升（7.313%-42.813%）;在8-10月份Bax蛋白的表达水平急剧下降（32.263%-23.00%）。结论：细胞凋亡引起的蒙古锦羊毛的生长和脱落可能与Bcl-2和Bax的表达有关,并且发重要的调控作用。Bax基因表达促进细胞凋亡。     

辽宁绒山羊胎儿发育的初步研究

了解辽宁绒山羊胎儿期的发育过程对于指导其妊娠期和出生后饲养管理及培育具有重要意义。本研究分别对妊娠后45、60、75、90、105、135 d的辽宁绒山羊胎儿外形、体尺、体重及部分器官发育速度进行了测定,结果表明:辽宁绒山羊的胎儿在45日龄时已经具备其固有体型;135日龄时其形态、机体的所有器官均已发育完全;135日龄的胎儿体重、体尺已经接近出生羔羊;胎儿在90 d胎龄前,绝对增重不大,但相对体重增长快速;90 d胎龄后绝对增重加快,尤其是120d胎龄后,日增重可达40~80 g,说明辽宁绒山羊与其他羊一样,胎儿发育主要以后3个月为主;胎儿器官的发育速度与相应器官的生理机能是密切相关的,凡是代谢旺盛的器官均优先发育;胎儿的粗毛在105d时已全部生长于皮肤之外,而胎儿绒则是在120 d开始出现,在135 d时能够覆盖全身。     

辽宁绒山羊皮肤毛囊细胞凋亡特点的研究

采用TUNEL法在一个生物年的周期内每隔两月对绒山羊体侧部的皮肤毛囊进行检测,观察毛囊细胞凋亡的周期性变化特点。结果表明,控制毛囊生长变化的凋亡细胞是成簇分布的,毛乳头的成纤维细胞很少有凋亡现象,细胞凋亡与毛囊周期性生长具有相关性,兴盛期毛囊凋亡细胞减少,退行期凋亡细胞显著增多。常年长绒型与季节长绒型品系在一年内的凋亡细胞变化情况基本一致,只是常年长绒型品系在兴盛前期的细胞凋亡明显低于季节长绒型品系。     

辽宁绒山羊胚胎期皮肤VEGF基因mRNA表达的研究

为探讨VEGF基因对山羊皮肤发育的影响,采用实时定量PCR法,分别对45、60、75、90、105、120和135 d的辽宁绒山羊胚胎皮肤组织中VEGF基因mRNA的表达水平进行了检测。结果表明:VEGF基因mRNA在45-135 d辽宁绒山羊胚胎皮肤组织中均有表达,且随日龄增长表达量逐渐上升,在135 d时达到高峰。75、90、105、120和135 d胚胎皮肤组织表达量均显著高于45 d和60 d(P<0.05);但相邻日龄间表达量变化不同,60 d与75 d、105 d与120 d间差异极显著(P<0.01),120 d与135 d间差异显著(P<0.05),45 d与60 d间、75 d与90 d间、90 d与105 d间无明显差异(P>0.05)。因此,VEGF基因表达的发育性变化可能与辽宁绒山羊胚胎皮肤组织发育调控相关。     

内蒙古绒山羊105 d胎儿皮肤的基因表达

选择105d绒山羊胎儿体侧部皮肤组织构建cDNA文库，随机挑取克隆进行表达序列标签（ESTs）测序，共测序1152个质粒，合格的大于100bp的高质量ESTs846个，平均长度为443．2bp。对525个绒山羊胎儿皮肤组织已知功能基因的ESTs进行分类，可分为细胞分裂类18个，细胞信号类65个；细胞结构蛋白基因73个；细胞防御类21个；基因／蛋白表达126个；代谢类的69个；未分类的153个。发现了Wnt-4、Bmpr-Ib、ASIP gene、Ectodysplasin等重要的与毛囊分化相关的基因。     

内蒙古绒山羊与辽宁绒山羊皮肤毛囊周期性变化的比较研究

对内蒙古阿尔巴斯白绒山羊和辽宁绒山羊皮肤及毛囊的组织学周期性变化作了比较研究，结果表明：表皮生发层细胞从3月份开始活动并向下延伸，此时毛囊也开始重建，绒山羊毛囊8-9月份进入兴盛期，12月份进入退行期，2-3月份为休止期。它们进入兴盛期和持续的时间不同，初级毛囊除毛球宽外，其它各性状阿尔巴斯白绒山羊均大于辽宁绒山羊，而次级毛囊各性状辽宁绒山羊都大于阿尔巴斯白绒山羊，在大多数月份二者差异显著。毛囊深、密度、S／P、毛球宽和生长期是影响产绒量的因素。     

辽宁绒山羊卵泡闭锁中颗粒细胞凋亡特点的研究

本试验采用TUNEL原位法和DNA梯度电泳法等方法对卵巢上闭锁卵泡中凋亡的颗粒细胞类型和分布状况等进行研究。结果表明,辽宁绒山羊闭锁卵泡是细胞凋亡引起的。DNA梯状电泳表明,不同健康程度卵泡颗粒细胞凋亡程度不同;而颗粒细胞TUNEL原位标记表明,健康卵泡、轻度闭锁卵泡及闭锁卵泡中颗粒细胞凋亡比例分别为13.21%±1.23％、32.13%±2.13％、51.31%±3.02％;不同健康程度卵泡中类固醇激素水平不同,健康卵泡中E2水平较高,孕酮浓度较低;闭锁卵泡中E2浓度较低,P4浓度较高,健康、轻度闭锁和闭锁三类卵泡中E2/P4比值分别是2.62±0.03、0.074±0.0003、0.028±0.0004。     

辽宁绒山羊皮肤毛囊VEGF基因表达的RT-PCR检测

从辽宁绒山羊常年长绒和季节长绒2个品系皮肤毛囊组织中提取总RNA,以总RNA为模板进行RT-PCR扩增血管内皮生长因子(VEGF)基因并进行相对定量表达研究.结果显示,VEGF基因mRNA在辽宁绒山羊常年长绒和季节长绒2个品系的皮肤毛囊组织中均有表达,并且2个品系在1年内同一月份VEGF基因mRNA的相对表达量差异不显著(P＞0.05),2月份VEGF基因mRNA的相对表达量与其他月份差异显著(P＜0.05).结果表明,常年长绒型新品系VEGF基因mRNA的相对表达量除2月外,其他月份均常年维持在一个较高的水平.     

小花棘豆中毒对家兔睾丸细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

将24只家兔随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,试验组饲粮分别按照Ⅰ组15%(苦马豆素含量30mg/kg)、Ⅱ组30%(苦马豆素含量60mg/kg)、Ⅲ组45%(苦马豆素含量90mg/kg)的比例添加小花棘豆,对照组仅饲喂青干草,试验期70d;分别于攻毒后第14,35,70天每次每组随机采集2只家兔的睾丸,通过TUNEL法检测细胞凋亡,real-time PCR检测Bcl-2、Bax mRNA的表达,免疫组化检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果显示:从第35天开始,试验Ⅱ组和Ⅲ组家兔睾丸细胞凋亡指数、Bcl-2和Bax mRNA的表达均与对照差异极显著(P<0.01),试验Ⅰ组家兔睾丸细胞凋亡指数、Bcl-2和Bax mRNA的表达均与对照差异显著(P<0.05);试验组家兔睾丸组织Bcl-2蛋白表达均明显低于对照,Bax蛋白表达均明显高于对照,其差异性随中毒时间的延长而变化。结果表明:小花棘豆中毒可导致家兔睾丸组织生精细胞凋亡,且与小花棘豆中毒呈现一定的时间-剂量效应,这种作用可能与Bcl-2和Bax基因表达有关。     

辽宁绒山羊BMP-2基因表达的检测

本文研究了BMP-2基因在常年长绒型和季节长绒型辽宁绒山羊皮肤组织中的表达情况,以β-actin基因作内标基因,分析了BMP-2 mRNA在季节与常年长绒型辽宁绒山羊皮肤中的表达量,结果发现在常年长绒型和季节长绒型辽宁绒山羊皮肤组织中,BMP-2 mRNA的表达量常年长绒型略高于季节长绒型(P=0.079)。     

圆弧青霉菌毒素—青霉酸对小鼠脾脏组织细胞凋亡和Bcl-2、Bax及Fas/FasL基因mRNA表达的影响

为探讨圆弧青霉菌毒素—青霉酸对小鼠脾脏组织的毒性作用,采用TUNEL法和RT-PCR对染毒后脾脏细胞凋亡和Bcl-2、Bax及Fas/FasL等凋亡相关基因mRNA表达的影响进行研究。结果表明,随着青霉酸染毒剂量的增加,脾脏组织中细胞凋亡数量逐渐增多。染青霉酸低剂量组脾脏组织中Bcl-2、Fas和FasL的表达增加,Bax表达下降,高剂量组和中剂量组中Bax、Fas和FasL表达增加,Bcl-2表达下降,说明青霉酸可能通过促使Bax、Fas/FasL表达增加和Bcl-2表达降低来诱导小鼠脾脏细胞的凋亡。     

辽宁绒山羊2品系皮肤毛囊周期性变化的比较研究

皮肤切片采用HE染色方法,对辽宁绒山羊常年长绒型品系和季节长绒型品系皮肤表皮厚、真皮厚、次级毛囊和初级毛囊深度、密度,次级毛囊和初级毛囊毛球宽度,S／P值等作了详细统计观察,从形态学方面研究了辽宁绒山羊皮肤毛囊在1年内的变化规律。结果表明：两品系辽宁绒山羊毛囊的兴盛期为4～10月,退行期为11～12月,休止期为1～3月,持续时间分别为7、2、3个月。兴盛期经历时间最长,退行期最短。但在毛囊的退行期,因为大多数毛囊的活性还很高,因此在退行期绒毛仍在生长,特别是在退行前期（10、11月份）还是绒毛的快速生长期。     

辽宁绒山羊胎儿发育初步研究

<正>辽宁绒山羊作为世界上最高产的绒山羊品种资源,其羔羊的发育状况对生后绒山羊的生长至关重要,决定着羔羊生后的生长速度、发情期的早晚、生绒性能等多个方面。因此,通过对辽宁绒山羊胎儿初步研究,可以为其生后饲养管理提供理论依据。1材料和方法1.1试验羊及饲养管理在辽宁绒山羊育种中心科技示范场育种核心群中随机选取60只2.5岁成年母羊,经同期发情后,采用人工授精进行配种。配种后经2个情期观察,最终确认48只母羊妊娠。对妊娠后的母羊按同一标准进行饲养管理。对妊娠后的母羊在妊娠期第45天、60天、75天、90     

血管内皮生长因子基因在辽宁绒山羊胎儿期皮肤毛囊发育中表达及其与微血管密度关系的研究

为探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在辽宁绒山羊胎儿期皮肤毛囊发育中的表达规律及其与皮肤微血管密度(microvessel density,MVD)的关系,采用免疫组化方法对VEGF辽宁绒山羊胎儿期不同阶段的表达及MVD进行检测。结果表明,VEGF在辽宁绒山羊胎儿期75 d后的各个时期皮肤毛乳头及毛囊内根鞘上表达,同时随着胎龄的增加,VEGF阳性区域的平均光密度亦随之增加;且皮肤中MVD也随着日龄的增加而逐渐增加,毛囊上的VEGF平均光密度与MVD呈极强正相关(r=0.966,P=0.007)。     

辽宁绒山羊和内蒙古绒山羊K-酪蛋白基因的比较研究

对辽宁绒山羊和内蒙古绒山羊,采用PCR-RFLP技术对K-酪蛋白基因(CSN3)的TaqⅠ酶切多态性进行分析,结果表明,辽宁绒山羊和内蒙古绒山羊2个山羊群体中均存在CSN3基因TaqⅠ酶切位点的多态性,且均有A、B两个等位基因。辽宁绒山羊群体等位基因A和B的基因频率分别为0.46和0.54;内蒙古绒山羊群体中等位基因A和B的基因频率分别为0.31和0.69。CSN3基因TaqⅠ酶切位点的基因型分布在辽宁绒山羊群体中极显著偏离Hardy-Weinberg平衡定理(P<0.01),在内蒙古绒山羊群体中符合Hardy-Weinberg平衡定理(P>0.05),但两个群体间不存在显著差异(P>0.05)。     

辽宁绒山羊RARG基因的初步研究

以视黄酸受体γ(retinoic acid receptor-gamma,RARG)基因为候选基因,,运用测序法寻找辽宁绒山羊RARG基因第3外显子单核苷酸多态性.结果表明,在辽宁绒山羊中RARG基因第3外显子区域内未发生突变,可初步判定辽宁绒山羊双羔性状与RARG基因第3外显子不相关.     

雌激素对大鼠小脑中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

采用免疫组织化学超敏SP法检测摘除卵巢及用外源性17β-雌二醇治疗后SD大鼠小脑中Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果显示,摘除双侧卵巢后,SD大鼠小脑皮质及深层核团中Bcl-2的表达有不同程度的降低,而Bax的表达出现不同程度的上升;给予外源性17β-雌二醇治疗后,2种蛋白的比例基本恢复正常.表明,雌激素能够下调小脑皮层及小脑深层核团中Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白的表达,对小脑神经元具有保护作用.     

固始鸡免疫器官内细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的动态表达

应用免疫组织化学技术和Leica 显微图像处理系统,对细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2在固始鸡免疫器官内的动态表达进行了研究。结果：Bax蛋白在不同发育阶段固始鸡免疫器官内均有表达,但表达量不同;Bax蛋白表达于固始鸡免疫器官内淋巴细胞细胞膜、细胞质和细胞核;Bax蛋白表达阳性细胞在固始鸡不同免疫器官内分布位置不同,呈散在或簇团状分布：脾脏内不同部位均有分布,主要在动脉周围淋巴鞘、红髓、淋巴小结边缘、边缘区,很少出现在淋巴小结内;胸腺内主要分布于胸腺小叶的皮质与髓质交界处,其次是胸腺小叶髓质,极少出现于皮质;法氏囊内阳性细胞主要分布于黏膜靠近上皮细胞的固有膜层内、淋巴滤泡间的区域,在淋巴滤泡边缘的少量淋巴细胞也有Bax蛋白表达,淋巴滤泡内极少有阳性细胞。Bcl-2蛋白在固始鸡免疫器官内的表达与Bax相似,但表达量与Bax相比较少。以上结果表明,细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2参与了固始鸡免疫器官内淋巴细胞发育分化过程中的凋亡调控,对免疫器官的稳定发挥重要作用。