火龙果组培苗体细胞无性系变异及其分子检测

【目的】了解火龙果离体快繁体细胞无性系的遗传稳定性,并揭示变异系间的遗传关系。【方法】以单粒种子萌发的丛芽扩繁第1代和第4代再生幼苗为材料,分析繁殖系数及棱的形态变化,并采用ISSR、SRAP和IRAP标记技术进行遗传变异分析。【结果】繁殖系数为14.9。快繁第4代试管苗中有3棱、4棱等6种形态学变异,其中5棱丛芽最多(50.54%),8棱丛芽最少(1%左右);3棱和4棱丛芽在RNA水平上(SRAP标记)表现出差异。24条ISSR引物、11对SRAP引物和17条IRAP引物在70个样品中共产生405条带,其中多态性带29条。扩繁第1代植株未发生DNA水平的变异,第4代植株的DNA条带出现了增加或缺失现象,植株变异频率为24.2%。16株变异株与原始植株(种子萌发植株)的遗传相似系数为0.77~0.97。在相似系数为0.90时,可将16个变异株分为4类,其中第Ⅰ类包括原始植株和12个变异株,第Ⅳ类与原始植株的差异最大,是GA3缺陷型矮化突变体。采用IRAP、SRAP、ISSR标记检测出的变异植株数量及多态性位点均存在差异。【结论】建立的火龙果快繁体系的繁殖系数为14.9,随快繁次数的增加,繁殖系数、生长势及遗传稳定性有下降的趋势。快繁第4代的体细胞无性系变异频率为24.2%,主要表现在DNA水平和棱茎形态上的变化。获得的16个变异株与原始植株的遗传相似系数为0.77~0.97,被分为4类,第Ⅳ类是GA3缺陷型矮化突变体。3棱和4棱丛芽差异可能是基因差异表达的结果。新开发的IRAP标记是检测火龙果无性系变异的有效手段。     

体细胞无性系变异在枣育种中的应用展望

在枣组织与细胞培养过程中,体细胞无性系变异广泛存在,这为枣的品种改良和新品种选育提供了一个新的途径。各种人工诱导体细胞无性系变异方法的成功运用,使得枣育种的效率更高、可控性更强。现对体细胞无性系变异在枣育种方面的应用研究进展进行了综述,并通过对有关文献的分析,提出一些极具研究可行性的新方向;最后讨论了体细胞无性系变异在枣育种中存在的问题。     

体细胞无性系变异技术在园艺植物育种中的应用

综述了园艺作物中体细胞无性系变异诱变技术在育种中的应用,以及利用离体诱导技术结合物理化学诱变所获得的育种进展。体细胞无性系变异结合诱导突变大大提高了变异率,获得了许多有用的突变性状,最近有人利用体细胞无性系变异克隆获得番茄抗腐烂病突变体Cmm(Clavibacter michiganense subspmichiganense),另外结合γ射线诱变,获得香蕉早熟品种“Klue Hom Thong KU1”和“Novaria”。同时利用分子标记辅助选择可以在早期对有用的候选基因型做出鉴别。     

通过体细胞无性系变异获得马铃薯优良新材料

为建立马铃薯（Solanum tuberosum L.）试管薯切片再生体系并评价其体细胞无性系变异的应用潜力,以马铃薯品种‘米拉’的试管薯切片为外植体,通过调节培养基植物生长调节剂配比和蔗糖浓度建立再生体系并获得再生植株;通过逆境胁迫快速筛选出优良再生株系‘M-13’,并比较其生长特性及稳定性;利用SCOT和RAPD分子标记检测其遗传变异。结果表明：不添加蔗糖MS + 2 mg ? L-1 6-BA + 0.25 mg ? L-1 TDZ + 0.1 mg ? L-1 2,4-D可获得最高芽分化率65.33%。与母本‘米拉’相比再生植株‘M-13’生长更为健壮,其试管苗和试管薯质量均约为母本的2倍;‘M-13’的根/冠比和叶绿素含量较母本分别升高了112%、23.78%,而叶片可溶性磷含量和过氧化物酶POD活性则分别下降了16.36%和30.37%。SCOT和RAPD两种分子标记均能在‘M-13’中检测到新条带或缺失条带,与母本间的遗传相似系数分别为0.9323（SCOT）和0.9256（RAPD）,表明‘M-13’的DNA发生变异但仍保持母本的大部分特性。     

三角紫叶酢浆草叶色变异株系的RAPD和ISSR标记初步鉴定

 以三角紫叶酢浆草叶色变异株系和其野生型植株为材料,对其遗传物质进行分子水平上的初步检测。采用DNA混合样本池法,构建变异型样本池和野生型样本池,并以这两个DNA池做模板分别进行RAPD-PCR和ISSR-PCR 扩增。从70个RAPD随机引物和100个ISSR随机引物中分别筛选出2个RAPD特异引物（S76,S118）和2个ISSR特异引物（UBC818,UBC868）,均能在上述两个DNA池之间扩增出稳定的差异性条带共6条。其中,变异株系的差异性缺失带S118 700-800测序成功,其序列包含编码叶绿体光系统Ⅰ第Ⅶ亚基的基因。研究结果表明,与其野生型相比,该叶色变异株系的确发生了遗传物质的变化,且在一定继代范围内能通过无性繁殖方式稳定存在。     

菜薹杂交种ISSR和SRAP的指纹图谱构建

利用ISSR和SRAP两种分子标记技术,对1份菜薹杂交组合进行分析。结果表明,3个ISSR引物和3对SRAP引物可扩增出供试材料双亲的互补特征带,将双亲及杂种F1区分开;另有2个ISSR引物也可有效鉴别双亲及杂种F1。从而建立了由ISSR和SRAP两种标记技术组成的鉴定该杂交组合的分子指纹图谱,并转化为数字指纹图谱,为菜薹种子纯度的鉴定开辟了新的技术途径,为菜薹新品种知识产权的保护提供了重要手段。     

ISSR和SRAP标记技术在兰花植物种质资源研究中的应用

分子标记技术在兰花种质资源的亲缘关系鉴定与遗传多样性分析、分子遗传图谱的构建与目的性状基因的标记定位、基因库的构建和基因克隆、辅助育种选择及品种纯度鉴定等研究领域被广泛利用与推广.现从简单重复序列间扩增(Inter-simple sequence repeat,ISSR)和相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记技术的基本原理、方法、特点以及在兰花植物种质资源的遗传育种中的应用现状和前景进行了综述与探讨.     

基于ISSR和SRAP分子标记的22株鸡腿菇遗传多样性和亲缘关系分析

为进行鸡腿菇(Coprinus comatus)的种质资源鉴定和及其分子育种提供理论依据,以22株鸡腿菇菌株为试材,采用ISSR和SRAP分子标记技术,对样本进行遗传多样性分析.采用筛选出的24条ISSR引物和24对SRAP引物以22株鸡腿菇的基因组DNA为模板进行PCR扩增,共获得清晰的条带368条,其中多态性条带3...     

ISSR和SRAP标记技术在葫芦科植物种质资源研究中的应用

阐述了简单重复序列间扩增(ISSR)和相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记技术的基本原理和特点,综述与探讨了分子标记技术在葫芦科植物种质资源的亲缘关系鉴定与遗传多样性分析、分子遗传图谱的构建与目的性状基因的标记定位、基因库的构建和基因克隆、辅助育种选择及品种纯度鉴定等研究领域的广泛利用与推广,以期更合理高效地保护和利用葫芦科植物种质资源。     

中国石蒜SSR体系的建立及性状对应分析

 为开发利用石蒜属球根花卉资源和开展分子标记辅助选择育种,利用正交试验和单因素试验建立了中国石蒜的SSR分子标记体系：20 μL含Taq酶0.5 U、Mg ²⁺ 1.5mmol · L^-1、dNTP 0.125 mmol · L^-1、Primer 0.5 mmol · L^-1、DNA 50 ng。利用该体系对石蒜属的8个物种和中国石蒜种内35个无性系进行扩增,每对引物在种间平均得到7个多态性位点,在中国石蒜种内得到9.5个多态性位点,反映出该体系具有较好的通用性和稳定性。利用对应分析法对中国石蒜的花葶高度、开花期等性状和SSR扩增条带之间的对应关系进行关联分析,初步得到与迟花期‘Oct’性状相关的Ly97和Ly98条带,与中矮花葶高度‘Mid’、‘Low’性状相关的Ly84、Ly87和Ly97条带等,并提出开展进一步的杂交和遗传测定,对辅助选择标记的可靠性进行验证。     

广西野生濒危植物掌叶木遗传多样性的ISSR与SRAP分析

采用ISSR和SRAP技术对中国野生濒危植物掌叶木[Handeliodendron bodinieri（Lévl.）Rehd.]的5个野生居群的95份材料进行分析,10条ISSR引物共扩增得到114个条带,其中多态性条带68个,多态性条带百分率（PPB）59.65%,掌叶木在物种水平上的Nei’s基因多样性（H）为0.1817,Shannon’s遗传多样性信息指数（I）为0.2792;观测等位基因数（Na）为1.5965,有效等位基因数（Ne）为1.2984,居群间基因间分化度（Gst）为35.17%。15组SRAP引物共扩增出292个条带,其中多态性条带269个,多态性条带百分比为92.12%,物种水平上,掌叶木的Nei’s基因多样性（H）为0.3171,Shannon’s遗传多样性信息指数（I）为0.4758;观测等位基因数（Na）为1.9212,有效等位基因数（Ne）为1.5380,居群间基因间分化度（Gst）为23.17%。结果显示两种标记均能检测到掌叶木具有较高的遗传多样性,掌叶木不同居群间存在一定的遗传分化和基因流动,但遗传分化主要存在于居群内。     

外源蔗糖对离体条件下换锦花小鳞茎发生的影响

从形态学、组织细胞学、生理生化水平、分子水平等多层面探究外源蔗糖浓度对换锦花(Lycori sprengeri)离体小鳞茎发生的影响。结果表明,MS培养基中外源蔗糖缺失时,离体换锦花鳞茎无法产生小鳞茎,蔗糖浓度为30或60 g·L^-1时小鳞茎正常发生,但对小鳞茎发生数量影响不大。鳞片内的蔗糖及可溶性糖含量在腋芽形成前不断积累,且鳞片基部淀粉粒的积累为此处小鳞茎的发生提供物质基础。蔗糖促进了茉莉酸甲酯(MeJA)在植物体内的积累,抑制了LsWIP1、LsERS2和LsEIN2基因表达量的异常上升,表明蔗糖可能作为信号分子启动了相关损伤保护机制,并促进了小鳞茎的发生。     

菊花营养生长期观赏性状的RAPD和ISSR标记

（College of Horticulture,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China）     

利用ISSR技术检测梅菜试管苗的遗传稳定性研究

利用植物组织培养方法建立起梅菜无性系,并连续进行5次继代培养;利用已优化的ISSR-PCR反应体系对不同继代次数(1~5代)的梅菜试管苗进行遗传稳定性分析。结果表明:在梅菜无性系继代过程中,从试管苗的形态方面观测没有发生明显的变化。但利用已优化的ISSR-PCR检测技术对2个梅菜品种亲本及不同继代试管苗进行检测,2个品种之间带型差异明显,同1个品种在不同世代带型基本一致,但从第4代开始,部分引物带型发生变化,但变化甚微,具有较高的遗传稳定性,在4代以内仍可稳定遗传。     

Use of ISSR,SRAP, and RAPD markers to assess genetic diversity in Turkish melons

The genetic relationships among 63 melon (Cucumis melo L.) genotypes collected from various regions of Turkey were determined by comparing their molecular ISSR, SRAP, and RAPD markers with those of 19 foreign melon genotypes to investigate the taxonomic relationships and genetic variation of Turkish melon germplasm. Total 162 polymorphic markers (69, 18, and 75 obtained from ISSR, SRAP, and RAPD primers, respectively) were used to define the genetic similarity among the melon genotypes by dendrogram or two and three dimensional scalings. The average similarity (SM coefficient) between any two pairs of accessions examined as estimated by molecular variation was 0.73 ± 0.48. Within-group genetic similarities ranged between 0.46 and 0.96. Related genotypes or genotypes collected from similar regions were partitioned to similar clusters. Southeastern Anatolian genotypes were distinctly apart from group inodorus and group cantalupensis (sweet) genotypes. This reinforced the position of Turkey in the secondary genetic diversity center of melon. The genetic diversity among Turkish genotypes (H = 0.28 and I = 0.42) was only a little less than that of the world accessions (H = 0.30 and I = 0.45). On the other hand, the percentage of polymorphic loci among Turkish melon genotypes (90.7%) was even higher than that of the world accessions (87.6%).     

Effects of bud scales and gibberellins on dormancy of in vitro cultured Japanese pear leaf buds

Leaf buds of Japanese pear were collected in early June and early November and regarded as summer and winter dormant buds, respectively. Bud explants with and without scales were prepared from each of them, and cultured in vitro for 75 days at 25°C with 14 h photoperiod, on a medium either without growth regulators, or supplied with BA and GAs (GA₃ and GA₄₊₇), singly or in combination.When either BA or GA₄₊₇ was contained in the medium, bud expansion occurred. Thereafter, summer dormant buds grew into shoots in the presence of BA, while winter dormant buds, although they swelled profusely, remained in a rosette. In the presence of BA, GA₄₊₇ markedly stimulated shoot elongation of summer dormant buds, but GA₃ did not. In winter dormant buds, GA₄₊₇ not only failed to stimulate shoot elongation, but also interfered with the BA-induced swelling described above.The presence of bud scales delayed expansion of summer dormant buds, while it had little effect on winter dormant buds. The delaying effect of scales on expansion of summer buds was effectively removed by application of GA₄₊₇ to the medium.