刺参基因组DNA的提取及RAPD条件的优化

以野生刺参为试验材料,探索了刺参基因组的提取方法,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化,建立了刺参的优化反应体系和程序.反应体系总体积为25μL,各组分的含量为10倍缓冲液2.5μL,Mg2 (20 mmol·L-1)3μL,TaqDNA聚合酶(1 U·μL-1)1.5μL,dNTPs(10 mmol·L-1)2.5μL,随机引物(5pmol·μL-1)1μL,模板DNA(40 ng·μL-1)2.5μL.PCR循环程序为96℃预变性5 min;94℃变性0.5 min,36℃退火1 min,72℃延伸1 min,35个循环;最后72℃延伸10 min.     

平菇基因组DNA的提取及RAPD体系的优化

应用SDS与β-SH乙醇结合的方法对平菇菌丝体、原基、菇蕾和成熟子实体4种材料的基因组DNA进行了提取,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化,20 μL反应体系中,模板加入量为6～10 ng,引物加入量10 pmol,dNTPs(各2.5 mmol)加入量为1.5～2 μL,Taq酶加入量为0.5U,退火温度设置在略低于引物Tm值的范围.     

藏獒基因组DNA提取及RAPD引物筛选

分别采用酚-氯仿法和改进的盐析法对藏獒血液基因组DNA进行了提取,并对可用于藏獒RAPD分析的随机引物进行了筛选.结果表明,酚-氯仿法提取的藏獒血液基因组DNA在浓度和纯度上均显著高于改进的盐析法(P<0.05),并且通过筛选得到了27条可用于藏獒RAPD分析的随机引物.     

芨芨草基因组DNA提取与RAPD反应体系优化

本文选出适合芨芨草Achnatherum splendens (Trin.) Nevski基因组DNA提取方法,对RAPD反应体系中的一些重要参数进行优化,包括模板浓度、Mg2+、dNTP、引物和Taq酶浓度,建立了适合芨芨草RAPD分析的PCR反应体系.即在12.5uL的反应总体积中Mg2+浓度为1.5mmol·L-1,dNTPs 浓度0.2mmol·L-1,Taq酶0.5U,20ng模板DNA,10bp附机引物3.2pmol.反应程序为:前6个循环为95℃变性30s,35℃复性45s,72℃延伸80s,后36个循环为94℃ 45s,36℃ 40s,72℃ 70s,最后72℃延伸10 min.该反应体系具有良好的稳定性和重复性.     

苜蓿基因组总DNA提取及RAPD反应条件优化

采用CTAB改良法,从苜蓿成熟叶片中提取到高质量、高纯度的DNA.对RAPD反应程序的重要参数进行摸索和优化试验,建立的适合苜蓿RAPD分析应用的体系组成为:反应液总体积25μL,模板DNA浓度135 ng·μL-1,10×缓冲液浓度2.5 mmol·L-1,10碱基引物浓度15pmol,TaqDNA聚合酶1U,dNTP浓度1.5 mmol·L-1,Mg2 浓度2.5 mmol·L-1.     

藏獒随机扩增多态DNA分析

采用随机扩增多态DNA技术,对不同品种的20只藏獒个体之间的亲缘关系进行了分析。从80条随机引物中筛选出了27条引物,共扩增出369条条带,其中339条表现出多态性,多态性位点百分率为91.87%。根据20只藏獒个体之间的遗传距离,用UPGMA法构建了聚类分析图。结果表明,河曲藏獒和青海藏獒同类群个体之间亲缘关系较近,在聚类图上形成了河曲藏獒类群和青海藏獒类群各自独立的分支,这一结果有力地支持了按地域对藏獒进行类群划分的说法。     

苹果梨变异单系基因组DNA提取及RAPD扩增条件优化

采用CTAB改良法,以苹果梨及其变异单系叶片为材料,进行苹果梨基因组DNA提取及RAPD扩增条件优化.结果表明,提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析;RAPD扩增最佳反应体系为25μL(15 ng DNA模板,1.0 mmol·L-1dNTP,1.0 mmol·L-1MgCl2,2.5μL Buffer,15 pmol·L-1引物,1UTaqDNA聚合酶,15.67μL ddH2O).扩增反应程序为94℃预变性5 min,94℃变性1 min,37℃退火1 min,72℃延伸1.5 min;45个循环;最后72℃延伸7min;终止温度为4℃.     

大蒜RAPD反应体系的建立及优化

该试验以弥渡紫皮大蒜叶片基因组DNA为试材,采用不同浓度MgCl2、引物、dNTP、TapDNA聚合酶对大蒜的RAPD体系进行单因素反应条件优化.结果表明,25μL总反应体积中,最佳浓度配比为模板DNA 40ng,MgCl2 2.0 mmol/L,引物12 pmol,dNTP 50μmol/L,Taq DNA聚合酶1 unit,10×反应缓冲液2.5μL.扩增程序为94℃变性3 min,94℃变性30 s,37℃退火30 s,72℃延伸1 min,共35个循环,72℃最终延伸10 min.     

椰子基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化

以椰子叶片为实验材料,探索了椰子基因组DNA的提取方法,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化,建立了椰子的优化反应体系和程序。试验最终建立的椰子RAPD反应总体积为20μL,各有关成分的最佳浓度分别为Mg2＋2.5 mmol/L,Taq DNA0.75 U,dNTP 0.2 mmol/L,Primer 1μmol/μL,模板DNA2.5 ng/μL。PCR循环程序为：94℃预变性1.5min;94℃变性20 s,36℃退火20 s,72℃延伸45 s,35个循环;最后72℃延伸3 min。     

葡萄基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化

[目的]建立适合该地区部分葡萄品种RAPD扩增反应体系.[方法]采用阿克苏地区部分葡萄品种(系)为试材,采用改良的CTAB法提取葡萄基因组DNA,对影响葡萄RAPD反应的Mg2+、Taq酶、dNTPs、引物、模板DNA浓度进行优化.[结果]其最佳反应体系为:模板DNA 100 ng,dNTPs 0.1 mmol/L,Mg2+2.0 mmol/L,引物0.3 μmol/L,Taq酶1.5 U,反应体系总体积为20 μL.[结论]改良的CTAB法具有步骤少、费用低、效率高等特点,比较适用于葡萄基因组 DNA的提取.优化后的体系,扩增产物稳定,条带清晰,重复性好.     

RAPD法鉴定紫花苜蓿品种的条件优化

以阿尔冈金等6个地方主栽的紫花苜蓿品种为材料,对随机扩增多态性DNA标记(random amplified polymorphic DNA,RAPD)法鉴定不同紫花苜蓿品种的试验条件进行了优化。结果表明,使用改良的CTAB法提取紫花苜蓿基因组DNA蛋白较少,质量较高;PCR扩增反应体系中使用1 U/μL的TaqDNA聚合酶、10 ng/μL的DNA模板和300μmol/L的dNTP,扩增的条带较多,且较清晰,适宜于后续RAPD法鉴定;从100条10个碱基的随机引物中筛选出S37与S140两条引物,适用于6个不同苜蓿品种的鉴定。     

藏獒群体遗传变异的RAPD分析

[目的]从分子水平上研究藏獒群体的遗传变异状况,为藏獒种质资源的保护提供依据。[方法]采用RAPD技术对不同地区的20份藏獒基因组DNA进行分析,并用群体遗传学软件PopGene32测定藏獒群体的有效等位基因数（Ne）、Nei氏平均预期基因杂合度（H）和Shannon遗传信息指数（I）。[结果]共扩增出369条带,其中339条表现出多态性,多态性位点百分率为91.86%。PopGene32软件得到的藏獒群体的Ne、H和I值分别为1.7512、0.4162和0.6021。[结论]藏獒群体内存在着丰富的遗传变异。     

春兰基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

以春兰为研究材料,对春兰基因组DNA的提取以及RAPD-PCR反应体系进行了优化。结果表明,在提取液中加入PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,采用高盐沉淀DNA和多次洗涤去除糖类,可以得到高质量春兰基因组DNA。电泳检测表明,所获得的DNA完整,无降解,完全可以满足R-APD等分子标记分析的需要。同时对春兰RAPD-PCR反应体系中各个影响因素进行了优化,建立了适合春兰R-APD分子标记的最佳反应体系,即20μl反应体系中含1UTaqDNA聚合酶,60μmol／L dNTPs,2．25mmol／L Mg^2＋,1．0μmol／L引物,1．5ng／μl模板DNA。     

油葵种子DNA提取和RAPD反应体系的优化

[目的]为利用RAPD技术进行油葵的亲缘关系分析及杂种鉴定奠定基础。[方法]以6种杂交油葵种子为试材,采用改良的CTAB法提取油葵基因组DNA,并对提取DNA的浓度和纯度进行测定。通过单因子梯度试验,筛选出优化、稳定的RAPD-PCR反应体系。[结果]采用改良CATB法提取的油葵DNA质量好、得率高,且无蛋白质和酚类的污染。油葵的最适RAPD-PCR反应体系为:2.0μl 10×Buffer、2.0 mmol/L Mg2+、150μmol/LdNTPs、1.5UTaq酶、2.0 ng/μl DNA模板、0.25μmol/L引物,总体积为20.0μl。利用该体系对不同含油量的6个油葵杂交种进行扩增,均表现为带形清晰稳定、带数适宜。[结论]该RAPD技术体系适用于各种油葵杂交种的DNA分析。     

长果种黄麻DNA的提取及SRAP分子标记体系的建立

以宽叶长果和甜麻杂交产生的F2代为材料,研究长果种黄麻DNA的提取方法和SRAP分子标记技术中的主要影响因素(包括模板DNA浓度、Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶浓度、dNTPs浓度及上下游引物浓度).最终建立了适于长果种黄麻DNA提取的CTAB法与SRAP-PCR反应体系(25 μL):模板DNA 100 ng,引...     

枣树基因组DNA提取及其RAPD体系优化

以不同生长期的枣和酸枣为研究对象,采用CTAB法提取枣基因组DNA;通过单因素5水平试验,筛选模板、Mg2+、Taq酶、dNTPs和随机引物的浓度及其用量,建立了枣和酸枣RAPD技术最优体系,即25μl反应体系中各组分含量为10×Taq Buffer+KCl 2.5μl;Taq DNA聚合酶0.04 U/μl;MgCl22.0 mmol/L;模板DNA2 ng/μl;引物0.3μmol/L;dNTP为0.2 mmol/L。适宜的扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃循环变性50 s,36℃退火50 s,72℃延伸1.5 min,38个循环;72℃延伸10 min。     

枸杞基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化

[目的]研究枸杞基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化。[方法]采用了进一步优化的CTAB法提取枸杞基因组DNA,检测所提取的DNA的浓度范围,并对RAPD反应体系进行了科学、合理的优化。[结果]结果表明,浓度范围在3．5～5．5μg/μl,完全能够满足RAPD—PCR的要求。[结论]该方法具有步骤少、费用低、效率高等特点,比较适用于枸杞基因组DNA的提取。