无子刺梨的体内外抗氧化活性及化学成分分析

采用DPPH和ABTS自由基清除活性和ROS清除活性测试方法,评价无子刺梨果汁及果渣提取物的体内外抗氧化活性,采用紫外分光光度法分别对果汁和果渣中多酚、黄酮和三萜等主要化学成分的含量进行测定分析。结果表明：果汁提取物对DPPH自由基和ABTS自由基的半清除浓度分别为(17.58±0.48)μg/mL和(56.26±3.07) μg/mL,果渣提取物对DPPH和ABTS自由基的半清除浓度分别为(45.38±0.68) μg/mL和(101.67±1.15) μg/mL,果汁提取物的体外抗氧化活性均强于阳性对照Vc和果渣提取物。果汁提取物和果渣提取物的ROS清除率分别为(84.80±3.40)%和(83.80±3.60)%,表明2种提取物的体内抗氧化活性相当,且均强于阳性对照。果汁中总多酚、总黄酮和总三萜的含量分别为(32.81±0.19)、(29.62±0.06)、(61.88±0.62) mg/g,果渣中总多酚、总黄酮和总三萜的含量分别为(21.66±0.29)、(12.11±0.05)、(15.16±0.22) mg/g,果汁中主要化学成分的含量均高于果渣,并与其抗氧化能力呈正相关关系。     

鹰嘴豆多肽的免疫活性研究

【目的】探究鹰嘴豆多肽对机体免疫功能的调节作用。【方法】用复合酶解方法制备鹰嘴豆多肽,对其分子质量分布及氨基酸组成进行分析。给小鼠腹腔注射环磷酰胺建立免疫功能低下的动物模型,建模成功后将小鼠随机均分为模型组（灌胃生理盐水）、阳性对照组（灌胃匹多莫德25 mg/kg）和鹰嘴豆多肽低、中、高剂量组(分别灌胃鹰嘴豆多肽50,100和200 mg/kg),另取10只健康小鼠作为空白组（灌胃生理盐水）。各组小鼠每日灌胃1次相应物质,连续灌胃21 d后采样,研究鹰嘴豆多肽对小鼠体质量、脾脏和胸腺指数及形态变化、脾淋巴细胞增殖率、血清细胞因子（IFN-γ、IL-6、IL-2）及免疫球蛋白（IgG、IgA和IgM）质量浓度的影响。研究不同质量浓度（50,100,200和400 μg/mL）鹰嘴豆多肽对RAW264.7细胞功能的免疫调节作用,以MTT法、中性红法和酶联免疫吸附检测试剂盒来检测细胞增殖率、吞噬活性以及分泌的细胞因子（NO、TNF-α、IL-6、IL-1β）水平。【结果】制得分子质量在1 000 u左右、纯度为97.12 %的鹰嘴豆多肽,其中富含谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸等氨基酸。与空白组相比,模型组小鼠脾脏和胸腺受损严重,多项检测指标显著降低;而鹰嘴豆多肽各剂量组小鼠的各项检测指标均较模型组小鼠显著增加,且呈剂量效应关系。鹰嘴豆多肽可促进RAW264.7细胞的增殖率和吞噬能力,并提升其产生的NO、IL-6、IL-1β和TNF-α的水平。【结论】鹰嘴豆多肽可以显著改善环磷酰胺导致的小鼠多项免疫相关指标的下降情况,同时可刺激巨噬细胞,增强其吞噬能力,促进其分泌白介素等细胞因子,表明鹰嘴豆多肽具有良好的免疫增强作用。     

灵芝孢子粉总三萜的提取优化及其体外生物活性

对灵芝孢子粉总三萜的提取过程进行优化,以得率为指标,通过单因素试验、Plackett-Burman试验筛选出影响灵芝孢子粉总三萜得率的显著因素,利用响应面设计优化灵芝孢子粉总三萜的提取条件。对于提取出的灵芝孢子粉总三萜,评价其清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基和ABTS⁺自由基的方法,并采用CCK-8比色法就其抗人肝癌细胞HepG-2增殖的活性进行研究。结果表明,最佳提取条件为乙醇体积分数80%,固液比1:23,超声功率540 W,提取温度40 ℃,提取时间60 min。此优化条件下提取的灵芝孢子粉总三萜具有较好的抗氧化能力,清除ABTS⁺的能力强于清除DPPH,对人肝癌细胞HepG-2亦具有一定的抑制作用。     

锈毛莓总三萜超声提取工艺的优化及其抗氧化活性研究

[目的]研究锈毛莓总三萜最佳提取工艺及其抗氧化活性。[方法]在单因素试验基础上,采用Box-Benhnke对影响锈毛莓总三萜提取率的4个因素进行优化分析,并通过对·OH、DPPH·和ABTS~+·的清除能力考察锈毛莓总三萜的体外抗氧化活性。[结果]在超声温度为80℃、料液比为1∶28(g∶mL)、超声时间为70 min、超声功率为400 W、乙醇体积分数为83%时,锈毛莓总三萜提取率为5.06%,与理论值偏差较小。随着样品浓度的增加,其抗氧化能力逐渐增强,其中对DPPH·和ABTS~+·的清除能力较强,半抑制浓度(IC_(50))分别为0.097和0.047 mg/mL;对·OH有较弱的清除能力。[结论]优选工艺适用于锈毛莓总三萜的提取,锈毛莓总三萜具有较好的抗氧化性。     

超声提取山楂总三萜酸的研究

研究了超声提取山楂总三萜酸的工艺条件,结果表明:适宜工艺条件为95%乙醇溶液、超声功率200 W,提取时间20 min.此条件下提取得率为0.381%.     

无刺刺梨的抗氧化物质含量及其抗氧化活性

为无刺刺梨的开发利用提供参考,以贵农5号刺梨和无刺刺梨为试验材料,采用亚硝酸钠-比色法、Folin-Denis、pH示差法等对无刺刺梨的抗坏血酸、总酚、可溶性糖等抗氧化物质含量及其抗氧化能力进行测定。结果表明：无刺刺梨的抗坏血酸和花青苷含量与贵农5号刺梨相差不大,无刺刺梨的抗坏血酸含量为2 202.03 mg/100g,贵农5号刺梨的抗坏血酸含量为2 199.75 mg/100g,无刺刺梨的抗坏血酸较贵农5号刺梨高2.28 mg/100g,二者的抗坏血酸含量均大于2 000 mg/100g,无刺刺梨的总酚、类黄酮、可溶性糖含量分别为696.75 mg/100g、992.5 mg/100g、97.25 mg/100g,贵农5号刺梨的总酚、类黄酮、可溶性糖含量分别为533.5 mg/100g、927.75 mg/100g、90.5 mg/100g,无刺刺梨和贵农5号的FRAP值分别为321.00和299.75,无刺刺梨和贵农5号的DPPH自由基清除率分别为68.8%和60.825%,无刺刺梨的抗氧化活性较贵农5号高。     

分光光度法快速测定灵芝中总三萜含量

选用熊果酸为对照品,5%香草醛—冰醋酸和高氯酸为显色剂,以分光光度法测定灵芝中总三萜的含量。实验结果表明:在548 nm波长下,标准品在12~53μg范围内,吸光度与含量呈良好的线性关系,在4~45 m in内稳定。该方法操作简便,快速,灵敏度高和重复性好,可用于灵芝及其相关产品的质量控制。     

太子参须多糖粗提物对小鼠免疫功能的调节作用

研究了太子参须多糖粗提物对RAW264.7巨噬细胞体外增殖及细胞免疫活性的影响,进一步评价了太子参须多糖对隐球菌感染模型小鼠的免疫调理作用.结果表明,太子参须多糖粗提物能显著提高RAW264.7巨噬细胞的相对增殖率,促进巨噬细胞对中性红和隐球菌的吞噬能力;太子参须多糖能恢复隐球菌感染小鼠的体质量,增加IL-10,IL-1β及TNF-α的分泌,降低IL-6的分泌,减少感染小鼠肺部和脑部的隐球菌数量,并增强了肺部TLR4受体、 CREB和p-CREB的表达.因此得出,太子参须多糖能通过提高巨噬细胞的免疫活性调节小鼠免疫功能,从而增强机体的抗炎能力.     

山刺玫叶总黄酮的抗衰老作用研究

【目的】研究山刺玫叶总黄酮的抗衰老作用机制,为山刺玫叶的开发利用提供参考。【方法】选取SPF级昆明种小鼠60只,雌雄各半,随机分为空白组、衰老模型组、维生素E组和山刺玫叶总黄酮低、中、高剂量组共6组(n=10),其中空白组小鼠用等体积生理盐水灌胃;衰老模型组小鼠颈背部皮下注射125 mg/(kg·d) D-半乳糖,灌胃等体积生理盐水;维生素E组小鼠颈背部皮下注射125 mg/(kg·d) D-半乳糖,灌胃维生素E溶液50 mg/(kg·d);山刺玫叶总黄酮低、中、高剂量组小鼠均颈背部皮下注射125 mg/(kg·d) D-半乳糖,并依次灌胃山刺玫叶总黄酮溶液1.0,2.0,4.0 g/(kg·d),同样条件下饲养。6周后分别测定各组小鼠免疫器官指数及血清、脑和肝脏组织中的SOD、GSH Px活性和MDA浓度,HE染色法观察各组小鼠脑组织的形态学变化,ELISA法检测各组小鼠血清中细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α的质量浓度。【结果】山刺玫叶总黄酮能显著或极显著提高衰老模型组小鼠脑、胸腺和脾脏指数(P＜0.05,P＜0.01),显著或极显著提高其脑、肝脏、血清中的SOD、GSH-Px活性(P＜0.05,P＜0.01),同时显著或极显著降低小鼠肝脏、血清和脑组织中的MDA浓度(P＜0.05,P＜0.01)。与衰老模型组比较,山刺玫叶总黄酮剂量组小鼠脑组织的神经元细胞数量增加,细胞的坏死及变性情况减轻,且随着山刺玫叶总黄酮剂量的增加恢复程度逐渐增加,即存在剂量依赖性。山刺玫叶总黄酮高、中剂量组小鼠血清中细胞因子IL-2、IL-4的质量浓度显著或极显著高于衰老模型组小鼠(P<0.05,P<0.01),而IL-6、TNF-α的质量浓度则显著或极显著低于衰老模型组小鼠(P<0.05,P<0.01)。【结论】山刺玫叶总黄酮对机体的衰老有延缓作用,其机制与清除过多自由基、预防脂质过氧化及增强免疫功能有关。     

7个月季和5个玫瑰品种的核型分析

【目的】对7个月季和5个玫瑰品种的染色体核型进行分析,为玫瑰和月季种间杂交育种研究提供细胞遗传学资料。【方法】采用常规压片法,对7个现代月季品种和5个玫瑰品种的倍性及核型进行研究。【结果】7个现代月季品种中除"霍尔恩"是三倍体(2n=3x=21)外,其余均为四倍体(2n=4x=28),5个玫瑰品种均为二倍体(2n=2x=14)。7个月季品种的核型包括1A、2A和1B3种,5个玫瑰品种则包括1B和2B2种核型。月季品种"霍尔恩"染色体相对长度为10.33%～20.67%,其余品种染色体相对长度均在4.63%～10.97%。玫瑰品种染色体的相对长度为7.62%～24.07%,与月季品种相比明显不同。7个月季品种最长与最短染色体的比值小于2.00与大于2.00的品种比例为3∶4,而5个玫瑰品种的最长与最短染色体比值均大于2.00。本研究所涉及的月季与玫瑰品种的染色体臂比、核不对称系数以及着丝粒指数差异性不大,分别介于1.00～2.14、54.63%～60.86%和31.82%～50.00%,染色体类型以中部(m)和近中部(sm)染色体为主,未发现端部染色体(t)和随体。【结论】现代月季品种和玫瑰品种的核型和倍性存在明显差异,玫瑰品种的核型总体较现代月季品种进化。     

部分蔷薇和现代月季杂交亲和性

为丰富国内自育品种并解决现代月季夏季病害严重开花不良的问题,2011-2012年对蔷薇与月季品种杂交、杂种香水月季品种间杂交及不同类型月季品种间的63个组合的杂交进行研究,分析不同组合结实情况,发现杂种香水月季品种间杂交亲本亲和性较好,而蔷薇与月季品种的杂交亲和性较差。同时通过对38个组合的坐果情况跟踪观察,得出杂交果落果规律,月季杂交的落果时期主要出现在授粉后1月内及授粉3个月后。从亲和性分析这些组合的落果情况,同一类型品种间杂交果实严重落果期集中于果实成熟后期(授粉3个月后),而另外2类组合严重落果期在前(授粉1个月内)、后期(授粉3个月后)均有分布,与结实情况表现的亲和性一致。     

山刺玫化学成分及药理作用研究概况

山刺玫,又名野玫瑰,是蔷薇科之蔷薇属的一种落叶小灌木山刺玫的成熟果实,有健运脾气、调理月经、消食、敛肺止咳等功效,通过文献查阅,对山刺玫化学成分及药理作用的研究进行综述,为其进一步开发应用提供支持。     

阿尔泰瑞香提取物的体外抗炎及抗氧化活性

目的 探讨阿尔泰瑞香二氯甲烷提取物（Da-Dm）的体外抗炎及抗氧化活性。方法 以不同浓度（1、6、30 μg/mL）的Da-Dm作用于脂多糖（LPS,1 μg/mL）诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞,采用CCK-8法测定Da-Dm对细胞增殖的影响;Griess法检测细胞上清液中一氧化氮（NO）的释放量;ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）的分泌量。以维生素C为对照,采用FRAP法、DPPH法评价Da-Dm总抗氧化能力。结果 Da-Dm在浓度为30 μg/mL及以下时对RAW264.7细胞增殖没有影响。与LPS组比较,1~30 μg/mL的Da-Dm可明显降低LPS诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子NO、IL-1β、IL-6和TNF-α的含量（P<0.05,P<0.01）,并呈现浓度依赖性。Da-Dm对DPPH自由基有较好的清除能力,其清除率的IC50为318.1 μg/mL,在FRAP实验中其对Fe²⁺离子具有较强的还原能力。结论 Da-Dm可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,它的抗炎作用可能与抑制NO、IL-1β、IL-6和TNF-α的释放有关。Da-Dm具有较好的抗氧化活性。     

月季RhPR10.2基因克隆及生物学功能分析

为解析月季PR-10家族基因RhPR10.2在月季花瓣衰老中的生物学功能,采用Real-Time PCR、RACE PCR、异源过表达、VIGS(病毒诱导的基因沉默)等生物技术方法,分析了月季RhPR10.2基因在月季不同开放阶段花瓣中的表达谱,克隆了RhPR10.2基因全长,构建了pSuper1300-RhPR10.2异源过表达载体以及pTRV2-RhPR10.2VIGS载体.结果表明,RhPR10.2基因的表达受月季花瓣衰老显著诱导,其开放阅读框为483bp,编码160个氨基酸,含有PR-10家族特有的P-loop基序;蛋白分子式为C796H1250N204O239S2,分子量为17 566.02,等电点(pI)为6.07;RhPR10.2蛋白与葡萄VvPR10.1亲缘关系最近;与拟南芥野生型植株(WT)相比,异源过表达RhR10.2基因的拟南芥T2代纯合子植株表现出显著延迟叶片衰老的表型,伴随着更高的叶绿素含量以及更低的离子渗透率;此外,与TRV2对照相比,沉默RhPR10.2基因的月季花瓣表现出加速衰老的表型,伴随着更高的离子渗透率以及衰老marker基因RhSAG12的表达.     

立枯丝核菌和菌核菌对人参总皂苷化学趋向性的响应

【目的】探讨人参立枯丝核菌和菌核菌对人参总皂苷化学趋向性的响应。【方法】采用平板法测定人参立枯丝核菌和菌核菌在不同人参总皂苷质量浓度(200,20,2,0.2mg/L)、温度(10,15,20,25,30℃)和pH(5,6,7,8)下的化学趋向性响应,以及初生菌丝受此趋化影响下的生长状况。【结果】人参立枯丝核菌对25℃、pH=6、质量浓度为2mg/L的人参总皂苷表现出较强的正趋向性,而人参菌核菌则对15℃、pH=7、质量浓度为2mg/L的人参总皂苷表现出较强的正趋向性,趋化移动指数(CMI)分别为0.136和0.149。【结论】人参总皂苷作为趋化因子能够诱导人参立枯丝核菌和菌核菌产生化学趋向性响应。     

粗毛纤孔菌总三萜的纯化及对胆酸盐结合能力分析

为提高粗毛纤孔菌菌丝体和子实体总三萜的纯度及体外胆酸盐结合能力,研究有机溶剂、高径比(硅胶高∶硅胶柱直径)、上样量和硅胶量质量比、洗脱体系和洗脱剂比例对总三萜纯度的影响。并且在最佳的纯化条件下与其它纯化方法作对比。通过红外光谱对总三萜的结构进行初步分析。并通过体外模拟体内环境试验对比了粗提物和纯化物总三萜的体外胆酸盐结合能力。结果表明:在高径比55∶22、上样量和硅胶量质量比4∶80、洗脱体系为丙酮∶石油醚、洗脱剂体积比3∶1时,粗毛纤孔菌菌丝体和子实体乙酸乙酯萃取后的总三萜纯度最高分别为65.35%、42.32%,是粗提物总三萜的4.26和4.60倍,该技术与大孔树脂和单纯硅胶纯化技术相比菌丝体与子实体总三萜纯度均最大。红外光谱分析显示,菌丝体和子实体总三萜存在—CH_2、—CH_3、—S-O等官能团的差异,但都符合三萜类物质的特征结构。粗毛纤孔菌菌丝体和子实体总三萜纯化后体外胆酸盐结合能力明显提高,其中菌丝体总三萜的胆酸钠、甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠结合能力最强,分别为1.14、1.78和2.06μmol/100mg,是菌丝体粗提物总三萜胆酸盐结合能力的1.56、1.73和1.72倍。