AtDREB1A基因过量表达对马铃薯盛花期生理生化指标的影响

以马铃薯品种陇薯3号及其转AtDREB1A基因株系T1为研究对象,在干旱胁迫条件下,研究了AtDREB1A基因过量表达对盛花期生理生化指标的影响。分析表明,在不同程度的干旱胁迫下,转基因株系T1盛花期叶片的超氧化物歧化酶(SOD)活性及脯氨酸(Pro)含量均高于同期非转基因陇薯3号对照,而丙二醛(MDA)含量和相对电导率均低于陇薯3号。以上结果初步表明,AtDREB1A基因的过量表达明显提高了马铃薯对干旱的抗性。     

花青素合成调节基因B1/C1转化东方百合'索邦'的研究

百合是全球著名的切花商品花卉,较低的遗传转化效率限制了百合转基因育种的发展,建立高效、稳定的遗传转化体系对于培育转基因新品种至关重要。外源花青素合成调节基因的表达可使花青素在植物细胞内积累, 使植物体外观上表现出色彩的变化,易于观察, 因此可作为报告基因用于植物转基因研究,快速报告细胞、组织、器官或植株是否被转化。本文以东方百合‘索邦’无菌苗鳞片为受体材料,利用农杆菌介导法将花青素合成调节基因B1/C1导入‘索邦’中。通过草甘膦敏感性试验,确定了草甘膦筛选的质量浓度为2.1 mg/L,对农杆菌介导的遗传转化体系进行了优化,研究了侵染液及共培养基成分对抗性芽诱导率的影响,以MS培养基为基本培养基,设置了7种类型改良MS培养基。结果表明:当MS培养基中去除大量元素时,抗性芽获得率相对较高,可达(18.31±1.71)%。在此条件下,将培养基中30 g/L的蔗糖替换成70 g/L的麦芽糖,可使抗性苗诱导率增至(22.27±3.48)%。热激和超声波结合使用能够明显提高抗性苗的获得率,其中以42 ℃热激1.5 min、120 W超声波超声20 s抗性苗获得率最高,可达(26.80±2.24)%。抗性植株经PCR和Southern检测,获得了1株单拷贝转基因植株,初步证明B1/C1基因已整合到‘索邦’基因组DNA中,并且转基因植株叶片、叶柄、鳞茎的花青素含量均高于非转基因植株,说明花青素合成调节基因B1/C1在转基因百合中获得了表达。      

盐胁迫下MaAQP1转基因拟南芥幼苗的生长和生理响应

为了探讨盐胁迫对香蕉水通道蛋白质基因(Ma AQP1)转基因拟南芥幼苗的生长及抗逆性生理指标的影响,以Ma AQP1转基因拟南芥为研究对象,研究不同盐(Na Cl)浓度(0 mmol/L、50 mmol/L、100 mmol/L、150mmol/L)处理下转基因拟南芥的表型及生理指标变化。结果显示:(1)经过盐胁迫后,野生型和转基因株系钾离子(K+)浓度降低,钠离子(Na+)浓度升高,而转基因株系K+和Na+浓度均明显低于野生型株系,同时,转基因株系具有较高的K+/Na+;(2)随着盐胁迫浓度的增加,野生型和转基因株系中电导率、丙二醛含量、脯氨酸含量及过氧化氢酶活性均逐渐升高,当盐胁迫浓度达到150 mmol/L时4个指标均达到高峰,其中,转基因株系中的电导率、脯氨酸含量及过氧化氢酶活性均比野生型的高,而丙二醛含量比野生型的低;(3)随着盐胁迫浓度的增加,野生型株系幼苗的根长缩短程度大于转基因株系,同时,转基因株系的根毛要远多于野生型。表明Ma AQP1能够提高转基因拟南芥的耐盐性。     

农杆菌介导的转拟南芥AtCHX23基因玉米及其耐盐性

本研究通过农杆菌介导法将拟南芥耐盐基因AtCHX23导入玉米自交系郑58中,用PCR、Southern blot和RT-PCR法对转化玉米进行检测,并在150 mmol/L盐(NaCl)胁迫下对T3代转基因玉米和野生型进行耐盐性分析。结果显示:共获得26株转基因阳性植株;挑选长势较好的2个PCR阳性株系进行Southern blot鉴定,确定AtCHX23基因以单拷贝的形式成功插入到玉米基因组中,且AtCHX23基因在转基因玉米中过量表达。非盐胁迫条件下,野生型和2个转基因株系间生长状态及其可溶性糖、脯氨酸和丙二醛含量无显著差异;在150 mmol/L盐处理下,2个转基因株系的生长状态优于野生型,2个转基因玉米株系的可溶性糖和脯氨酸含量均高于野生型,丙二醛的含量低于野生型。综上所述:AtCHX23基因过量表达可以提高玉米苗期的耐盐性。     

拟南芥P5CS1基因转化羽衣甘蓝增强耐盐性分析

【目的】分析转拟南芥△1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS1)基因羽衣甘蓝的耐盐性,为获得较强的耐盐性羽衣甘蓝品种及其抗逆育种提供理论依据。【方法】将拟南芥P5CS1基因(AtP5CS1)经农杆菌介导转入羽衣甘蓝植物中,在盐胁迫下,分别检测转基因植株与野生型植株的AtP5CS1 mRNA表达量、幼苗脯氨酸含量、株系根系性状、整株干质量和鲜质量、叶片相对水含量、叶片电导率和整株存活率。【结果】在150 mmol/L NaCl胁迫下,转基因植株的P5CS1基因mRNA可正常表达,与对照相比,转基因株系Y1、Y2的主根和最长侧根长度较长,侧根数目较多,整株干质量和鲜质量较重;而且相对水含量显著高于对照植株(P0.05,下同),脯氨酸含量及存活率均极显著高于对照植株(P0.01),叶片相对电导率显著低于对照植株。【结论】转AtP5CS1基因植株的耐盐表型优于对照,即AtP5CS1基因在羽衣甘蓝中的表达明显改善了转基因植株的耐盐性。     

高温胁迫下东方百合‘Sorbonne’形态及生理响应

以东方百合‘Sorbonne’为材料,研究不同程度高温胁迫对叶片形态、相对电导率、抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性、丙二醛含量和脯氨酸含量的影响。结果表明:在高温胁迫条件下,相对电导率和脯氨酸含量呈上升趋势。在轻度高温胁迫下,抗氧化酶活性总体呈现增强趋势。当高温胁迫超过一定程度后,抗氧化酶系统的活性明显降低。温度超过40℃时,东方百合Sorbonne叶片形态出现较明显损伤。     

KcERF-PeDREB2a双价基因对棉花干旱、盐碱耐受性的影响

利用农杆菌介导法将耐旱耐盐转录因子基因Pe DREB2a和Kc ERF导入受体材料陆地棉R15中,获得12个株系的转基因植株,通过硫酸卡那霉素初筛以及PCR分子检测最终获得7个转Kc ERF-Pe DREB2a基因的棉花株系。通过测定转基因棉花的抗逆相关生理指标以及对基因相对表达量测定分析,结果表明,200mmol/L的Na Cl和15%的PEG-6000胁迫处理后,转基因棉花幼苗的CAT、SOD活性,游离脯氨酸含量均高于对照组,MDA含量较对照组棉花明显下降。实时定量RT-PCR结果表明,干旱胁迫下,转基因棉花幼苗叶片中Pe DREB2a基因的表达量高于Kc ERF基因的表达量;高盐胁迫下,转基因棉花叶片中的Pe DREB2a,Kc ERF基因的相对表达量持平。本研究结果表明,在干旱、高盐胁迫下,Kc ERF-Pe DREB2a基因有助于提高棉花的耐旱耐盐能力。     

过表达细叶百合LpNAC6基因增强烟草的耐盐性

目的NAC转录因子是一类具有多种生物功能的新型转录因子，在植物抗逆响应中发挥着重要作用。本文旨在克隆并研究细叶百合LpNAC6基因在逆境胁迫下的表达模式，探究其在烟草中响应盐胁迫的功能。方法本研究采用同源克隆技术克隆得到细叶百合LpNAC6基因，利用生物信息学软件对LpNAC6基因进行分析；通过基因枪法对LpNAC6蛋白进行亚细胞定位；利用实时荧光定量PCR的方法分析LpNAC6基因在不同非生物胁迫和不同组织中的表达模式；构建植物表达载体pBI121-LpNAC6-GFP转化烟草，通过对转基因烟草进行盐胁迫处理验证LpNAC6基因的功能。结果LpNAC6基因长909 bp，编码302个氨基酸，存在一个高度保守的NAM结构域，属于NAC基因家族。LpNAC6为不稳定亲水性蛋白，无信号肽和跨膜结构域，有5个糖基化位点和20个磷酸化位点，亚细胞定位在细胞核。LpNAC6基因与黄褐棉的NAC转录因子进化关系最近。细叶百合中LpNAC6基因对ABA、干旱、低温及盐胁迫均有响应。盐胁迫下，过表达LpNAC6基因的转基因烟草其SOD、POD、CAT的活性和叶绿素、脯氨酸、可溶性蛋白的含量均显著高于野生型。结论细叶百合LpNAC6基因能够响应ABA、干旱、低温、盐胁迫等非生物胁迫，其过表达能够提高转基因烟草在盐胁迫下的代谢活力和抗氧化酶活性，从而增强烟草耐盐性。      

干旱胁迫对不同彩粒小麦苗期生长发育的影响

为了筛选具有优良抗旱性的小麦特异材料,通过表型分析与生理生化指标测定相结合的方法,分析干旱胁迫对不同彩粒小麦苗期生长发育的影响。结果表明,不同小麦材料在重度干旱胁迫下植株表型、复水后成活率、叶片相对含水量、叶绿素质量分数、脯氨酸质量分数及叶绿素荧光参数均存在显著差异,其中多个指标均显示2份彩粒小麦材料抗旱性较好,即‘ZHW’/‘小偃22’杂交后代和‘0705-39’/‘INDB’杂交后代材料。对各指标进行相关性分析发现,植株复水后成活率与叶片相对含水量、脯氨酸质量分数、叶绿素质量分数之间存在极显著的相关,叶片相对含水量与F_v/F_m、ETR、q~P存在显著相关。抗旱表型分析与生理生化指标测定结果显示干旱胁迫显著影响不同彩粒小麦的苗期生长发育,且不同彩粒小麦抗旱性存在显著差异,筛选的2份抗旱性较好的彩粒小麦材料可用于进一步的抗旱分子机制解析和旱地小麦育种。     

安康‘紫仁’核桃响应干旱胁迫的生理评价研究

为深入了解‘紫仁’核桃响应干旱胁迫的综合能力,选取安康地区培育的‘紫仁’核桃进行干旱胁迫处理下的生理响应试验。对‘紫仁1’和‘紫仁2’分别进行PEG6000处理0、3、6、9、15 d后测定电导率、丙二醛(MDA)、抗氧化酶活性、脯氨酸等生理指标,分析‘紫仁’核桃干旱响应生理。结果表明:‘紫仁1’和‘紫仁2’在干旱胁迫后二者生理响应趋势相似,即相对电导率变大、MDA含量增多、SOD和POD活性增强、脯氨酸含量增加;‘紫仁1’在胁迫后的相对电导率及MDA含量显著高于‘紫仁2’,而‘紫仁1’的SOD和POD活性、脯氨酸含量却又低于‘紫仁2’,说明在相同PEG处理下,‘紫仁1’的综合抗旱能力低于‘紫仁2’。     

宜兴百合叶片与鳞茎对干旱胁迫的生理响应

[目的]探索宜兴百合耐旱性评价的有效方法,为宜兴百合抗旱品种的筛选提供参考。[方法]通过人工模拟干旱胁迫环境,研究宜兴百合在土壤不同含水量的条件下,叶片和鳞茎脯氨酸、丙二醛、还原性糖含量等生理指标的变化。[结果]宜兴百合的叶片对干旱胁迫的响应性比鳞茎好,脯氨酸、丙二醛含量对干旱胁迫的响应性比还原性糖含量好。[结论]宜兴百合的叶片为较好的用于耐旱性评价分析的材料,能较好地反映百合对干旱胁迫的生理响应;丙二醛和脯氨酸含量是较好的鉴定指标。     

"索邦"百合鳞片扦插繁殖技术研究

[自的]系统研究“索邦”百合鳞片扦插繁殖技术。[方法]以“索邦”百合一级种球为试验材料,分别从鳞片消毒处理、鳞片层次、扦插时间和激素处理4个方面研究鳞片扦插繁殖的最佳条件。[结果]“索邦”百合种球经冷库（0～3℃）处理3个月后取外层鳞片,用百茵清＋甲基托布津1000倍液分别消毒20min,经100mg／L的ABTI^#处理2h后扦插,能明显提高小籽球的繁殖数量和质量。[结论]该研究为“索邦”百合种球的国产化生产提供了技术支持。     

Analysis on Drought Tolerance of Transgenic Wheat

[目的]评价小麦TaPIMP1基因在小麦耐旱种质培育方面的应用潜力。[方法]将由ubiquitin启动子驱动的TaPIMP1转基因纯合株系B64和B208及受体对照扬麦158在模拟的干旱胁迫条件下进行培养,测定种子萌发、幼苗生长以及部分耐旱相关生化指标的变化。[结果]在20％PEG6000模拟干旱胁迫条件下,转基因株系及其对照的TaPIMP1表达量在24h内变化剧烈：转基因株系的种子发芽率、胚芽鞘和胚根长度显著高于受体对照。在10％-20％PEG6000模拟干旱胁迫条件下,转基因株系的叶片相对含水量和可溶性糖含量明显高于受体对照。在15％-20％PEG6000模拟干旱胁迫条件下。转基因株系的叶片丙二醛（MDA）含量明显低于受体对照。[结论]该研究表明转基因株系的耐旱能力较受体对照扬麦158有显著提高。TaPIMP1基因可应用于转基因小麦耐旱种质的培育。     

Study on the Integration of T-DNA into Lilium longiflorum

[Objective] The aim of this study is to obtain transgenic Lilium longiflorum Thumb. [Method] A two-step method of explant and the T-DNA integration technique were employed to transform Lilium longiflorum via Agrobacterium mediated method. [Result] The best infection effect appeared under the OD600 value of Agrobacterium within 0.6-0.8,the addition of 250 mg/L AS could increase the transformation efficiency. The optimal concentration of G418 for screening is 50 mg/L. Some putative transgenic plants of Lilium longiflorum with resistance to G418 showed positive in PCR,preliminarily proving that T-DNA gene had integrated into the genome of lily. [Conclusion] The study may lay a foundation for breeding excellent lily varieties through T-DNA integration technique.     

T-DNA插入麝香百合的研究(英文)

[Objective] The aim of this study is to obtain transgenic Lilium longiflorum Thumb. [Method] A two-step method of explant and the T-DNA integration technique were employed to transform Lilium longiflorum via Agrobacterium mediated method. [Result] The best infection effect appeared under the OD600 value of Agrobacterium within 0.6-0.8,the addition of 250 mg/L AS could increase the transformation efficiency. The optimal concentration of G418 for screening is 50 mg/L. Some putative transgenic plants of Lilium longiflorum with resistance to G418 showed positive in PCR,preliminarily proving that T-DNA gene had integrated into the genome of lily. [Conclusion] The study may lay a foundation for breeding excellent lily varieties through T-DNA integration technique.     

NaCl胁迫对转甜菜碱醛脱氢酶基因美丽胡枝子生理的影响(英文)

[Objective] The aim of this study was to explore the effects of exogenous gene introduction on osmotic adjustment of plants.[Method] After pot culture with same time,the transgenic plants expressing betaine aldehyde dehydrogenase gene(BADH)and non-transgenic plants of Lespedeza formosa were treated with different concentrations(0,0.5%,1.0%,2.0%)of NaCl solution for 30 h and some physiological indices including proline,betaine,soluble sugar,malondialdehyde(MDA)contents and superoxide dismutase(SOD)activity were assayed.[Result] There was no significant difference on the indices mentioned above between transgenic plants and non-transgenic plants under the salt-free treatment.With the increase of NaCl concentration,the transgenic plants accumulated much higher level of proline,betaine,soluble sugar and lower level of MDA than non-transgenic plants.But the differences of SOD activity increase degrees between transgenic and non-transgenic plants were not significant.Performances of the three transgenic lines were different to some extent.[Conclusion] The introduction of exogenous BADH gene enhanced the osmotic adjustment ability of L.formosa,furthermore;different transgenic lines performed differently.     

转铁蛋白基因水稻抗Fe2+能力分析

[目的]研究转铁蛋白基因水稻对Fe2+胁迫的生理响应。[方法]采用溶液培养法,对参试水稻进行Fe2+胁迫(200 mg/L)处理,测定其株高、生物量、Fv/Fm及质膜伤害。[结果]Fe2+胁迫下,参试水稻生长受到明显抑制,株高和生物量下降,Fv/Fm下降,MDA含量和电解质渗漏增加。与非转基因对照相比,转铁蛋白植株各测定参数受Fe2+胁迫影响较小,差异显著(P0.05)。[结论]水稻中铁蛋白的表达可降低过量Fe2+对植株光合作用的影响和对叶片质膜的损伤,从而减轻Fe2+胁迫对植株生长的抑制作用,提高了植物抗铁毒的能力。     

T-DNA插入麝香百合的研究

采用2步外植体法结合比较成熟的农杆菌介导T—DNA插入技术转化麝香百合,为快速选育百合新品种奠定基础。     

T-DNA插入麝香百合的研究

[目的]获得麝香百合转基因植株。[方法]采用2步外植体法和农杆菌介导的T-DNA插入技术转化麝香百合。[结果]菌液浓度OD600值为0.6~0.8时浸染效果好,同时附加250 mg/L的AS可以提高转化效率,50 mg/L G418为抗性筛选最适浓度。对经过抗性筛选的百合转化植株进行PCR分子检测,部分转基因植株呈阳性,初步证明T-DNA已插入到百合基因组中。[结论]该研究为利用T-DNA插入技术筛选优良的百合新品种奠定了基础。