喜树内生真菌的研究进展

介绍了喜树内生真菌的生物活性代谢产物,对其内生真菌的生物多样性及其与寄主植物的关系进行了综述,并对喜树内生真菌的研究方向进行了展望。     

喜树内生真菌的分离与鉴定

以我国特有药用植物——喜树(Camptothecaa cuminata Decne.)为试验材料,对喜树的根、茎、叶、种子进行内生真菌的分离,共分离得到菌株151株。对其中70株内生真菌进行了鉴定,鉴定为15个属,11个科,10个目,5个纲,分属3个亚门。鉴定结果在一定程度上反映了喜树内生真菌的生物多样性,并为筛选产喜树碱及其类似物的菌株奠定了一定的基础。     

喜树内生真菌的分离及其抗肿瘤活性菌株的筛选

以中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)株作为模型,用Resazurin法检测生长抑制率,对197株喜树内生真菌次生代谢产物进行体外抗肿瘤活性试验.结果发现,不同采集部位及不同地理环境分离出的菌株抗肿瘤活性有明显差异,其中以树皮中分离出的内生真菌具有抗肿瘤活性的比例最高.从采集的地理位置分析,由安徽黄山标本所分离的内生真菌抗肿瘤活性菌株比例高于其他2个采集地点.1株从黄山喜树果实上分离的菌株对CHO细胞的抑制率超过50%,初步鉴定为Rhizopycnis属真菌.     

芦荟植物内生真菌抗真菌活性的研究

对从芦荟中分离出的88株内生真菌进行抗真菌活性物质筛选结果表明:35株芦荟内生真菌对1种或多种皮肤致病真菌,例如毛样枝孢(Cladosporiumtrichoides)、紧蜜单孢枝霉(Hormodendrumcompactum)、皮炎单孢枝霉(Hormodendrumdermatitidis)等具有抑制生长作用,占供试菌株的37.8%。来自中华芦荟、元江芦荟、库拉索芦荟分离获得内生真菌的抗真菌活性菌株比例分别为50%、45%和31.5%。提示芦荟内生真菌种群可为人类寻找新的抗病原微生物活性物质提供基础条件。     

喜树内生真菌的分离及其代谢产物的初步研究

采用组织块法对喜树(Camptotheca acuminata Decne)不同组织内生菌进行了分离,共纯化得到55株内生真菌。初步分类鉴定、拮抗性的测定和部分菌株发酵液中代谢产物的研究结果表明:①供试菌可归为5个属和1个无孢类群。其中无孢类群数量较多,为26株,占47.3%。5个属依次为根串珠霉属、小卵孢属、梨孢属、匙孢霉属和盘长孢属。②喜树内生真菌代谢产物的种类比较多,尤其是生物碱类、黄酮及其苷类、酚类和萜类物质的产生比较普遍。有6株菌可能产生喜树碱(Camptothecin,CPT)的类似物。③内生真菌普遍对棉花立枯病菌有较强的拮抗性,46.81%的菌株拮抗圈直径大于1.5 cm,59.57%的菌株有抗性;对假丝酵母的拮抗性最弱,仅有17.02%的菌株存在弱抗性。     

芦荟植物内生真菌抗真菌活性的研究

对从芦荟中分离出的88株内生真菌进行抗真菌活性物质筛选结果表明:35株芦荟内生真茵对1种或多种皮肤致病真菌,例如毛样枝孢(Cladosporium trichoides)、紧蜜单孢枝霉(Hormodendrum compactum)、皮炎单孢枝霉(Hormodendrumdermatitidis)等具有抑制生长作用,占供试菌株的37.8%.来自中华芦荟、元江芦荟、库拉索芦荟分离获得内生真菌的抗真茵活性茵株比例分别为50%、45%和31.5%.提示芦荟内生真菌种群可为人类寻找新的抗病原微生物活性物质提供基础条件.     

两株油樟内生真菌抗真菌活性与降解纤维素研究

为了研究两株油樟内生真菌对植物病原真菌的抑制作用,并对其生防能力做出评价,采用对峙生长法研究了油樟内生真菌YY6、YG48对辣椒疫霉病原真菌（Phytophthora Capsici）、杨树溃疡病原真菌（Dothiorella gregaria）、苹果炭疽病原真菌（Glomerella cingulata）、棉花枯萎病原真菌（Fusarium oxysporum）、玉米大斑病原真菌（Fusarium graminea-ru）、水稻纹枯病原真菌（Corticium sasakii）的抗菌活性,同时采用滤纸酶活测定法检测其发酵液的纤维降解能力。发现油樟内生真菌YY6对辣椒疫霉、杨树溃疡、苹果炭疽、棉花枯萎及玉米大斑这5种常见植物病害的病原真菌具有明显抑制作用,其发酵液的滤纸酶活性可达0.327 U/mL,YG48对辣椒疫霉病原菌、玉米大斑病原菌及水稻纹枯病原菌具有明显抑制作用,很难降解利用纤维素。因此,YY6具备开发为多种植物病害生防菌的潜力。     

喜树内生真菌的分离及其对植物病原菌的抑菌活性测定

采用组织分离法,以PDA培养基为分离培养基,从喜树的枝条、叶片、果实和根中分离获得28株内生真菌.对峙试验结果显示,28株内生真菌对6种植物病原菌均有不同程度的抑制作用;其中G-4菌株作用最明显,对苹果腐烂病菌(Valsa mali miyabe et Yamada)、茄褐纹病菌[Phomopsis vexans(Sacc.et Syd.)Harter]的抑制率分别为89.68%和83.88%.对G-4菌株生物学特性测定结果表明,G-4菌株生长最适温度为28℃,最适pH范围为6.4～8;在麦芽浸粉培养基上G-4菌丝生长迅速;果糖为最佳碳源.     

老瓜头耐盐内生真菌抗真菌活性筛选研究

[目的]对荒漠植物老瓜头(Cynanchum komarovii Al.Iljinski)中以稻瘟霉模型初筛得到的耐盐内生真菌进行抗真菌活性复筛。[方法]采用微量液基稀释法,以白假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、新生隐球菌、石膏状小孢子菌、红色毛癣菌、烟曲霉菌等8株常见病原真菌为活性筛选菌株,进行抗真菌活性复筛,检测供试品的最低抑菌浓度(MIC)。[结果]菌株5%-11对新生隐球菌有一定的抑制活性(MIC=32μg/ml),其他菌株对8株常见病原菌的活性较弱(MIC64μg/ml)。[结论]复筛得到一株对新生隐球菌有抑制活性的耐盐内生真菌。     

喜树根际和内生真菌多样性研究

[目的]研究喜树根际和内生真菌的多样性及与喜树的关系。[方法]对贵州大学校园内喜树的根际和内生真菌进行分离鉴定并进行比较分析。[结果]结果表明,分离得到的根际真菌分属于5个科,9个属;内生真菌分属于8个科,9个属。[结论]喜树根际和内生真菌存在丰富的多样性和一定的相关性。     

喜树形成层的发育及周年活动

喜树Camptotheca acuminata具非叠生形成层。形成层在进一步发育的过程中,纺锤状原始细胞的长度随着枝龄的增加而变长,射线原始细胞的长度随着枝龄的增加而变短。其形成层活动与大多数散孔材树种相似,具有明显的周期性。3月份芽萌动以后,形成层开始活动,4~5月份形成层活动最为旺盛,10月份以后进入休眠状态。淀粉储量的消长与形成层活动周期有很强的相关关系。3~4月份形成层恢复活动以后,淀粉储量逐渐减少甚至消失。8月份淀粉开始积累,9月份淀粉很快消失。11月份又重新积累,直到翌年3月份以后才开始消失。图1表1参12     

冬青卫矛内生真菌2QR1菌株代谢产物的杀菌活性

为寻找天然植物源新的具有农药活性的先导化合物,从冬青卫矛根皮中分离到1株内生真菌,编号为2QR1,初步鉴定其为半知菌亚门,曲霉属(Aspergillus)。室内活性测定结果表明,2QR1菌株发酵液的杀菌活性远高于菌丝体的杀菌活性。该菌株发酵液乙酸乙酯萃取物对小麦根腐病菌、小麦赤霉病菌、苹果炭疽病菌、玉米大斑病菌、番茄叶霉病菌、烟草赤星病菌和马铃薯干腐病菌菌丝生长抑制的有效中质量浓度EC50值分别为53.6,63.1,63.3,98.2,106.5,115.9和166.3μg/mL;对玉米大斑病菌、小麦根腐病菌、烟草赤星病菌和马铃薯干腐病菌抑制孢子萌发的有效中质量浓度EC50值分别为94.8,139.1,146.6和180.1μg/mL;在质量浓度为500μg/mL时,对枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径在16 mm以上。盆栽试验结果表明,2QR1菌株发酵液乙酸乙酯萃取物在质量浓度为2 000μg/mL时,对小麦白粉病的保护作用和治疗作用分别为61.9%和81.6%。选用硅胶柱层析,以杀菌活性追踪为指导,对该菌株发酵液乙酸乙酯萃取物进行了杀菌活性成分的分离,得到化合物B9。化合物B9对玉米大斑病菌、烟草赤星病菌、小麦根腐病菌和马铃薯干腐病菌抑制孢子萌发的有效中质量浓度EC50值分别为0.8,1.4,3.3和5.0μg/mL。     

喜树地理种源苗期优势分析

从１９９５年１０月开始，选择中国南方的广东、福建、浙江、安徽、江西、湖南、贵州、云南、湖北和江苏１０个省的１８个喜树种源，于１９９６年在浙江省湖州市林科所苗圃，进行１年生播种苗的苗期优势研究，对半月高生长量进行统计分析，对苗期冻害进行观察，结果以１６号湖北武昌和１８号浙江丽水种源比较优良。     

喜树的研究进展

本文从喜树的形态结构,资源分布,应用价值等方面综述了近年来喜树的研究进展。指出喜树的规范化栽培、组织培养及基因工程方面的研究可作为扩大喜树药源的途径,同时对未来的研究方向进行了展望。     

红树内生细菌AmS2对多种植物病原真菌的抑制作用

采用平板对峙生长法测定了红树内生细菌AmS2菌株对辣椒疫霉和香蕉枯萎菌等多种植物病原真菌的抑制作用,通过生长速率法研究了发酵液甲醇提取物对多种植物病原真菌的毒力作用.结果表明,菌株AmS2对多种病原菌均具有较强的抑制作用,其中对辣椒炭疽菌的抑制作用最强,抑菌带宽为11.5 mm,显微观察抑菌带边缘菌丝末端膨大成球状、分枝增多、细胞壁破裂.发酵液甲醇提取物能够抑制6种病原真菌的生长,随着浓度的增加,抑菌效果增强,其中对辣椒炭疽菌的抑菌效果最好,EC50和EC95分别为0.8923 mg/mL和2.4939 mg/mL.     

喜树叶总黄酮优化提取方案的研究

采用二次通用旋转组合设计方法，用pH=10的水作为溶剂，在不同的提取温度、溶剂体和提取时间的条件下对喜树叶总黄酮的含量进行提取试验，建立三元二次回归议程并进行分析。对三因素的不同水平搭配组合。应用计算机进行模拟试验得到9^3=729个数据。由此推求最优提取方案。结果表明，以pH=10的水为溶剂，提取温度91-100℃，溶剂体积50-60mL，提取时间25-37min，可最大限度地提取喜树叶中的黄酮，表3参7。     

喜树种源间抗寒能力比较

以10个喜树种源1年生苗木为试验材料,通过低温循环仪自动降温程序模拟低温处理,采用电导法测定叶片相对电导率,用Logistic曲线拟合求出半致死温度(即拐点温度LT50),并比较了10个喜树种源的抗寒能力.结果表明,10个喜树种源的抗寒能力从强到弱的顺序依次为:江苏南京、浙江长兴、安徽黄山、江西南昌、湖南浏阳、浙江龙泉...     

喜树碱关键酶基因的克隆与生物信息学分析

为了克隆喜树碱生物合成途径关键酶异胡豆苷合成酶的基因STR,本文对喜树幼叶进行RNA提取,利用RT-PCR克隆基因STR的CDS序列,利用在线软件ExPASy ProtParam、SignalP4.1、TMHMMV.2.0、TargetP 1.1分析蛋白理化性质、蛋白信号肽、蛋白跨膜区以及亚细胞定位,利用在线工具Conserved Domain、SOPMA预测蛋白保守结构域和二级结构,利用MEGA 6.0软件构建蛋白系统进化树。结果表明,以喜树幼芽为材料,通过RT-PCR克隆喜树碱生物合成途径关键酶基因STR的CDS序列为993 bp;生物信息学分析表明,STR定位于分泌通道,为酸性蛋白,无信号肽,有1个跨膜区,由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲等二级结构组成;STR包含高度保守的结构域,聚类分析表明其与中果咖啡具有较高的相似性、较近的亲缘关系和遗传距离。     

喜树幼苗根尖细胞微管结构的初步观察

利用免疫荧光标记的方法观察了喜树幼苗根尖分生区、伸长区和成熟区微管的形态结构.结果显示:喜树幼苗根尖分生区细胞的微管围绕细胞核密集分布,方向随机排列,伸长区细胞的微管聚集在细胞的两极,而成熟区细胞微管呈现规则的斜向平行结构或螺旋网状结构.