赤霉病菌拮抗菌Bacillus subtilis AF0907抗菌物质研究

菌株AF0907是从土壤中分离到的1株对小麦赤霉病菌具有显著拮抗作用的枯草芽孢杆菌,该菌株不仅对小麦赤霉病菌具有很好的拮抗活性,对其他多种植物病原菌都具有很好的拮抗效果.为了明确菌株AF0907对赤霉病菌的抑菌机理,本研究首先使用平板对持法对拮抗物质进行定位,结果表明该菌分泌的拮抗物质主要位于细胞上清液中.采用不同饱和度的硫酸铵沉淀细胞上清液,确定了60％的硫酸铵饱和度是沉淀该拮抗物质的最佳条件;分别研究了温度、pH值、蛋白酶K、氯仿对该拮抗物质活性的影响,结果表明该拮抗物质在低温下比较稳定,在60℃以上的高温下,活性迅速降低;在酸性或碱性条件下不稳定;该拮抗物质分别加入蛋白酶K和氯仿作用后拮抗活性分别下降了60.68％、80.07％,因此,初步判断该拮抗物质为蛋白质.利用DEAE-52离子交换柱层析法分离纯化了该拮抗蛋白并进行了SDS-PAGE电泳,结果显示该拮抗蛋白的分子量为48 kDa;利用PPSQ-31A蛋白自动测序仪测定拮抗蛋白N-末端15个氨基酸序列为:His-Glu-Phe-Pro-Thr-Tyr-Lys-His-Met-Tyr-Gln-Val Met-His-Leu.     

拮抗细菌B11的鉴定及其分泌的拮抗蛋白抗菌谱

芽孢杆菌 (Bacillusspp .)是一群好氧兼性厌氧的产芽孢革兰氏阳性杆菌的总称 ,它不仅具有显著的生防潜力 ,还能产生耐热抗逆的芽孢 ,有利于生防菌剂的生产、剂型加工及在环境中存活、定殖与繁殖 ,是植物病害生防微生物的重要组成部分。广西地处亚热带 ,菌物资源丰富 ,生防资源 (基因库 )也多种多样 ,因此 ,在广西植物病害生物防治的研究具有较好的前景。黎起秦等[1] 从作物根围分离得到对西瓜枯萎病菌具有强烈抑制作用的拮抗细菌B11,本文对其进行了鉴定 ,并对其分泌的拮抗蛋白的抗菌谱进行了测定。现将结果报道如下。1　材料与方法1 .1　供…     

烟草赤星病拮抗菌株B75产生抗菌物质的条件

从烟草根际分离筛选到一株可产生抗烟草赤星病菌物质的枯草芽孢杆菌菌株B75。在以NB培养液进行试验时发现，B75在对数生长的中期开始产生抗菌物质，在生长的衰退期前存在一个产生抗菌物质的高峰期；在25～50℃、pH4．0～8．5范围内均可产生抗菌物质，其中30℃和pH6．0的培养条件下最适。不同的装液量试验结果表明，在三角瓶装液量为100ml／500ml时，是B75菌株菌体生长及产生抗菌物质的最适宜量。不同的碳、氮源试验结果表明，甘露醇、酵母膏最有利于B75菌株菌体生长，且产生的抗菌物质抑菌活性较强。     

棉花黄、枯萎病拮抗菌株B110的鉴定及其抑菌作用方式

分离得到的芽孢杆菌菌株B110对棉花黄、枯萎病原真菌具有强烈抑制作用,根据其形态特征、生理生化特征、16S rDNA基因序列测定和聚类分析鉴定菌株B110为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。用经过硫酸铵沉淀、Sephadex G-75分离得到的粗提蛋白,通过对分生孢子萌发的抑制试验和对菌丝生长的抑制试验对其抑菌方式进行了研究,抗菌蛋白能够使棉花黄萎病菌的孢子萌发受到抑制,菌丝扭曲畸变,进而原生质凝聚,最后导致菌丝断裂。     

香蕉枯萎病拮抗菌的筛选及其作用机制研究

通过分离和筛选,从香蕉园或者其他果园的土壤中分离获得13株对香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)具有抑制作用的拮抗菌,并对部分拮抗菌抑制病菌菌丝生长和孢子萌发进行了试验。结果表明,拮抗菌株d4、d5、B3和p发酵液对香蕉枯萎病菌生长具有显著的抑制作用,在平板上产生的抑菌圈直径为21.75～34.75 mm,抑菌效果具有持续稳定性,对孢子萌发的抑制率为90.49%～97.18%;拮抗菌对病菌的作用表现为对菌丝的消融、菌丝细胞的泡囊化、抑制病菌分生孢子的萌发、孢子芽管的扭曲。     

瓜类枯萎镰刀菌拮抗菌筛选的初步研究

镰刀菌引起的瓜类枯萎病是我国瓜类生产的重要病害，为了探索其生物防治途径，我们自1994至1995年，从茄子、麦子、刀豆、玉米根际上样中，筛选对瓜类枯萎镰刀菌有桔抗作用的细菌菌株，现将这些菌株的室内平板筛选报告如下；1材料1．1供试枯萎镰刀菌菌株来源：TF89菌株：甜瓜枯萎镰刀菌；XF89菌株：西瓜枯萎镰刀菌；HF。。菌株：黄瓜枯萎镰刀菌；以上三个菌株由新疆农业大学提供。TF1菌株：我们1995年从甜瓜种子上分离。1．2待测菌株采样地点：三富村小林场和安宁渠乡6队。2方法和结果2.1抗性分离试验；将茄子、麦子、刀豆、玉米根际上…     

香蕉枯萎病拮抗菌筛选及其抑菌活性

为获得对香蕉枯萎病菌具有稳定拮抗作用的微生物菌株,分别从海南省临高县南宝镇新营农场、皇桐村及美台镇美梅村采集感病土壤和健康土壤进行微生物分离,并以香蕉枯萎病菌4号小种(Fusarium oxysporum f.sp.cubense Race 4)等9种病原菌为靶标菌株,采用平板对峙法和含药介质法对拮抗菌的抑菌活性进行评价,同时根据形态特征、培养特征及生理生化特征和16S rDNA序列分析对其进行鉴定。结果表明:6个土壤样品中共分离得到具有拮抗作用的细菌93株和放线菌133株,其中T3-G-59菌株对9种病原菌具有广谱抗性,菌丝生长抑制率为43.58%~86.43%,孢子萌发抑制率为42.22%~81.11%,其中对香蕉枯萎病菌4号小种的菌丝生长和孢子萌发抑制率分别为86.43%和81.00%,经鉴定该菌株为多产色链霉菌Streptomyces polychromogenes,表明该多产色链霉菌T3-G-59菌株具有应用于香蕉枯萎病生物防治的潜力。     

禾谷镰刀菌拮抗菌Bacillus amyloliquefaciens AX-3的分离鉴定及拮抗物质的鉴定

禾谷镰刀菌Fusarium graminearum可引起小麦赤霉病,该病严重威胁我国小麦的质量安全。本研究从生物防治的角度出发,分离筛选拮抗菌,研究拮抗菌的拮抗特性和拮抗能力。试验采用系列稀释法和平板对峙法从小麦样品中分离筛选获得禾谷镰刀菌拮抗菌AX-3,根据16S rDNA基因、gyrB基因序列构建的系统发育进化树以及生理生化特性结果,菌株AX-3被鉴定为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens。通过平板对峙法测定拮抗谱,结果显示AX-3对多种镰刀菌属病原真菌都具有良好的拮抗特性,抑菌圈半径为17~32 mm,表明AX-3具有广谱的拮抗性能。采用柱层析及制备液相色谱法对AX-3中的拮抗物质进行分离纯化,然后使用高分辨质谱及核磁共振的方法对拮抗物质进行结构鉴定表明,解淀粉芽胞杆菌AX-3产生的一种抗菌物质为macrolactin A。     

拮抗菌P1、P5对葡萄灰霉病菌的抑制作用及其抗真菌谱的测定

从葡萄果穗附生微生物区系分离获得的拮抗细菌P1、P5,对葡萄灰霉病菌(Botrytis cinerea)具有很强的拮抗作用。通过对其抑菌效果、机制和抗真菌谱进行测定,结果表明,P1、P5和葡萄灰霉病菌对峙培养5 d后,均产生明显的抑菌带,抑菌带宽度为6.90～9.67 mm,培养10 d后,仍然保持稳定的抑菌效果;P1、P5的发酵原液对葡萄灰霉病菌孢子萌发具有显著的抑制作用,抑制率为97.51%～98.12%;P1、P5对病菌的作用机制表现为使病菌菌丝畸形、原生质浓缩、菌丝断裂、抑制病菌分生孢子的萌发、导致孢子芽管扭曲。对峙培养表明,P1、P5均具有较广的抗真菌谱,对10种供试病原真菌的菌丝生长抑制率都在50%以上。     

水稻纹枯病菌强拮抗菌B34的分离与鉴定

 从水稻植株上分离到1株对水稻纹枯病菌有强烈拮抗作用编号为B34的菌株,在PDA平板上表现有对水稻纹枯病菌较强作用的抑菌带,其发酵菌液对纹枯病菌丝有强烈的致畸作用,抑菌率达到71.5%,使菌核的菌丝萌发率降低69.0%。离体防效和田间小区防效分别高达81%和48.74%,高于清水和井冈霉素处理。经生理生化检测及细胞壁化学成分分析,确定其为致黄假单胞菌(Pseudomonas aureofaciens)。     

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis (Cohen))B-903菌株抗菌物质对植物病原真菌的抑制作用

作者从郑州苹果园中分离到枯草芽孢杆菌的一株强拮抗菌株。研究认为该菌株产生的抗菌物质对镰刀菌等12种病原真菌具有抑制作用,抑菌谱广。其抑菌机理主要是融解细胞壁,造成原生质泄漏,同时也使孢子和菌丝畸形。田间小区试验证明,以B-903培养滤液浸种可有效防治棉炭疽病等棉苗病害,并促进棉苗生长发育;果园喷雾防治苹果轮纹病和叶斑病的效果相当或优于化学药剂。     

枯草杆菌B-921菌株对数种植物病原真菌的抗生作用

平板培养结果表明:枯草杆菌B-921菌株对苹果树腐烂病菌、泡桐腐烂病菌和杨树烂皮病菌,有较强抗生作用。共同培养到第5天,能形成1.5～4.5cm的抑菌圈。在显微镜下观察到,菌丝体壁被溶解,原生质外溢;有的菌丝体扭曲、生长点膨大,胞壁断裂、菌体崩溃。发酵液有同样作用。     

枯草芽孢杆菌B_3菌株对小麦根系和茎基部的定殖作用研究

本文研究了枯草芽孢杆菌Ｂ＿３菌株经种子处理后在小麦根系及茎基部的定殖能力和影响其定殖的可能因子。结果表明，Ｂ＿３在田间自然土壤中定殖小麦根系及茎基部的时间分别为６０天和４２天以上。培养不同时间的Ｂ＿３菌悬液处理种子表明，播后２２天内，培养２４小时的菌在小麦上的定殖量高于培养４８和７２小时。用ＮＢ培养的Ｂ＿３菌悬液经离心弃上清，并用新鲜ＮＢ液悬浮菌体后处理种子，在播后１９天，Ｂ＿３定殖量比不处理菌悬液的定殖量增加。Ｂ＿３与化学杀菌剂混合处理种子，以及土壤经灭菌处理均可增加Ｂ＿３在小麦上的定殖量。     

枯草芽孢杆菌抗菌物质对镰刀菌抑制机理的镜下研究

 将枯草芽孢杆菌B-903菌株液体培养72h后,将培养滤液高温灭菌,以不同比例将培养滤液加入镰刀菌孢子悬浮液中,置于扫描电镜和光学显微镜下定时观察。在处理12h后,镰刀菌孢子芽管顶端、菌丝末端及菌丝中央的多处细胞均可发生畸形的球状结构,这种畸变结构随处理时间延长而增加,致使菌丝变成捻珠状。处理36h后,畸变球形细胞及菌丝纷纷断裂离解,细胞内含物渗出,致使大部分细胞成为空泡。到处理48h后,镜下几乎无完整菌丝,均成单个的球状细胞空泡,这些空泡最终胞壁崩裂,不复存在。笔者认为正是枯草芽孢杆菌在生活过程中分泌到体外的抗高温代谢物对镰刀菌孢子和菌丝细胞的这种畸变作用造成拖子和菌丝失活,侵染能力丧失。     

枯草芽孢杆菌A014菌株防治小麦赤霉病的初步研究

室内平皿抑菌作用测定、盆栽和田间小区试验初步结果表明:枯草芽孢杆菌菌株A014对小麦赤霉菌有较强的抑菌作用,并有一定的防病效果,使病菌侵染率降低50.6％,能较好地保护麦穗不受病菌侵染或限制穗部病菌的扩展。     

枯草芽孢杆菌TG26防病增产效应的研究

枯草芽孢杆菌TG26分离自丝瓜根部土壤,对多种植物病原菌有强烈抑菌活性。在小麦感病品种盆栽试验中,对小麦赤霉病的防效为82.25～89.80％;浸根处理对西瓜枯萎病和烟草青枯病的苗期防效可达100％。田间小区试验结果,该菌剂对小麦赤霉病、西瓜枯萎病和烟草青枯病的防效分别为76.4％、73.1％和79.6％,并有明显的增产效应。其分泌的抗菌蛋白对植物病原菌有很强的抑菌作用。     

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis(Cohen))B-903菌株抗菌物质对植物病原真菌的抑制作用

 作者从郑州苹果园中分离到枯草芽孢杆菌的一株强拮抗菌株。研究认为该菌株产生的抗菌物质对镰刀菌等12种病原真菌具有抑制作用,抑菌谱广,其抑菌机理主要是融解细菌壁,造成原生质泄漏,同时也使孢子和菌丝畸形。田间小区试验证明,以B-903培养滤液浸种可有效防治棉炭疽病等棉苗病害,并促进棉苗生长发育;果园喷雾防治苹果轮纹病和叶斑病的效果相当或优于化学药剂。     

三种苏云金芽孢杆菌晶体蛋白火箭免疫电泳的研究

本文以火箭免疫电泳技术检测HD—1、81—6、187三种苏云金芽孢杆菌的晶体蛋白,结果表明:这种方法可以快速、特异性地检测晶体蛋白的含量。在抗血清浓度为3％的凝胶上抗原抗体所形成的免疫沉淀线峰高与晶体蛋白的浓度呈明显的线性关系。本文还就火箭免疫电泳沉淀线峰高与一些条件的关系进行了讨论。     

水稻纹枯病拮抗细菌的种群分布及其生物多样性研究

 通过对从菲律宾Laguna省水稻植株上分离获得的700个细菌菌株进行离体与生物测定发现:在水稻生态系统中,存在着大量格兰氏阴性、非致病性、对纹枯病有拮抗作用的细菌。用Biolog微板的方法鉴定了195个细菌菌株的种类。在147个格兰氏阴性菌株中有14个属39个种,在48个格兰氏阳性菌株中有8个属13个种。在195个被测菌株中最为常见的种是Stenotrophomonas maltophilia,Pseudomonas aeruginosa和Pseudomonas pudita,并且上述3个种内具有拮抗性能较强菌株的比例相当高。因此,这3个种的细菌对水稻病害的生物防治很有潜力。用PCR的方法分析上述3个细菌种部分菌株的生物多样性,结果表明:同一属不同种菌株之间的DNA带谱有一定的交叉;不同属之间的DNA带谱的差异明显大于种之间的差异。     

球形芽孢杆菌(Ts—1)在水体中消长动态以及对蚊幼虫的残效

本实验观察了球形芽孢杆菌(Ts—1)在清水和污水中细菌和芽孢数量消长动态和残效。在水体中,细菌和芽孢均以指数函数衰减。污水对Ts—1生长存活无害,但对致倦库蚊幼虫残效期较清水中为短。水体中死亡虫体对保持球形芽孢杆菌的残效有重要作用。