醋酸铵法提取卵形鲳鲹基因组DNA

建立了一种简便、安全、经济的提取卵形鲳鲹基因组DNA的方法,即醋酸铵法。该方法采用7.5mol·L~(-1)醋酸铵代替酚、氯仿,通过高盐-SDS去除蛋白和多糖,异丙醇在一定浓度醋酸铵存在条件下选择性沉淀DNA,而不沉淀蛋白,并通过酶切和AFLP验证该法抽提的DNA纯度。该法提取的DNA质量较高,无蛋白质和RNA污染,较酚/氯仿法和试剂盒法抽提得到量多,酶切和AFLP试验结果表明,提取的DNA可用于酶切分析和分子标记等试验。此法安全、简便、经济,该方法更适合于对大量样品的提取。     

应用氯化锂法小量提取质粒DNA

用改良的氯化锂方法小量提取质粒DNA。结果表明,该方法所提取的质粒DNA的质量与常规碱裂解法获得的质粒DNA基本一致,可以满足分子生物学基础实验的要求;同时该方法简化了试验步骤,质粒DNA提取时间缩短了24 min。     

大肠杆菌质粒DNA提取方法的优选

采用酚/氯仿少量提取法、异丙醇沉淀法、简便快速的煮沸法以及微波炉法提取细菌质粒,然后分别对各种方法所提取的质粒进行琼脂凝胶电泳分析,并用紫外分光光度计测定其OD值,对各种方法的优劣性进行全面分析,结果表明异丙醇提取法所提取的质粒DNA纯度和产量高(其DNA片段荧光较强,具有清晰的亮带,OD260/OD280约为1.77,DNA样品浓度约为195μg/mL),且重复性好,具有结果稳定的特点,达到了分子生物学试验要求,适合大多数试验室使用。     

甜瓜幼苗根系总蛋白提取方法的筛选及其电泳条件的建立

以‘西域1号,甜瓜苗期根系为材料,分别采用改进的TCA/丙酮沉淀法、Tris/酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法及SDS/酚提取法提取总蛋白,进行SDS电泳和双向电泳分离,扫描后的胶图利用Image Master 2D Elite 6.01软件进行分析,重点分析胶图总点数、匹配点数和差异蛋白点数.结果表明:Tris/酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法得到的总蛋白含量最高;TCA/丙酮沉淀法分离得到的蛋白条带和蛋白点数最少,且对分子量较高的偏碱性区域的蛋白提取效果差,与其他2种方法相比明显丢失了较多的蛋白.因此,进行甜瓜幼苗根系总蛋白质组分析时,可采用后2种方法,其中Tris/酚抽提法更简单易行.     

卵形鲳鲹遗传多样性研究中AFLP技术优化及引物筛选

以卵形鲳鲹为材料,采用醋酸铵法提取高质量的基因组DNA,通过对双酶切?连接?电泳、染色等因素进行优化,建立了适用于卵形鲳鲹的AFLP反应体系。同时以卵形鲳鲹野生群体和养殖群体为材料,采用新建立AFLP反应体系从256对引物组合中筛选出10对多态性高的AFLP引物组合,获得了清晰的指纹图谱,证明建立的AFLP优化体系可用于卵形鲳鲹的AFLP分析。     

一种改良的苏云金芽孢杆菌质粒DNA提取方法

以Sambrook的碱裂解法为基础,通过控制菌体培养时间,适当调整提取过程中3种溶液的比例及作用时间,摸索出一种适合于提取苏云金芽孢杆菌质粒DNA的方法.该法与常规碱裂解法相比具有重复性好、质粒DNA质量高等优点.     

空肠弯曲菌质粒DNA提取条件的优化

在碱解法的基础上,优化了提取空肠弯曲菌质粒DNA的条件。细菌经37℃,5%CO2培养48h后,每个样品以长满一个φ90mm平板(约2.86×106个/mL)的细菌用量为宜;溶菌液的最适SDS浓度和pH值为2%和12.0～12.5;最适温育温度和时间为55℃、60min。在该条件下用该方法提取了219株不同畜禽来源的空肠弯曲菌质粒DNA,质粒阳性率为10.96%,最大质粒DNA108kb,最小质粒DNA1.9kb。     

测定植物中全钾提取方法的改进

用不同浓度的醋酸铵和盐酸溶液,分别采用振荡30 min、振荡1 h、浸泡8 h及浸泡16 h(过夜)4种浸提方式测定大葱中的钾含量。结果表明:与行业标准方法相比,0.5 mol/L醋酸铵浸泡16 h和0.5 mol/L的盐酸浸泡16 h这两种提取方式测得结果均在其证书标准值范围内,方法相对标准差均小于2%,准确稳定;此方法使用化学药品少,很大程度上减少了环境污染,且操作简单易行,可以减少实验人员的工作量。     

质粒DNA碱裂解提取法的改进

对质粒的碱裂解小量提取法进行了改进 ,改进的方法克服了以往质粒提取方法的RNA等杂质污染和操作烦琐费时等问题 ,该方法操作简单、经济实用 ,提取的质粒DNA得率稳定、质量好 ,符合大多数分子生物学常规实验的要求。     

苹果叶片蛋白质双向电泳样品制备方法的比较

 为探索适用于苹果叶片蛋白质组学研究的样品制备方法,比较了三氯乙酸/丙酮沉淀法（TCA）、酚-甲醇/醋酸铵沉淀法和Tris-HCl提取法等3种总蛋白质的提取方法。制备的样品经双向电泳分离采用银染显色。结果3种方法分别得到450、374和1032个蛋白质点。认为Tris-HCl提取法为最适方法,所得图谱背景清晰,蛋白质信息量最大。     

氧化硅包裹的磁性纳米粒子抽提质粒DNA

质粒的分离纯化在分子生物学实际工作中占有重要地位, 本文依据DNA在高盐条件下吸附于氧化硅介质, 低盐条件下脱附的原理, 采用包裹有氧化硅的磁性纳米粒子, 粒径为20 nm左右, 在外磁场作用下提取细菌质粒DNA, 操作简便, 在20 min内完成. 从1～3 mL过夜培养的大肠杆菌LB培养液中可纯化得到1～30 μg的高纯度质粒DNA, 该质粒DNA可直接用于分子生物学下游操作.     

氧化硅包裹的磁性纳米粒子抽提质粒DNA

质粒的分离纯化在分子生物学实际工作中占有重要地位,本文依据DNA在高盐条件下吸附于氧化硅介质,低盐条件下脱附的原理,采用包裹有氧化硅的磁性纳米粒子,粒径为20nm左右,在外磁场作用下提取细菌质粒DNA,操作简便,在20rain内完成．从1～3mL过夜培养的大肠杆菌LB培养液中可纯化得到1～30μg的高纯度质粒DNA,该质粒DNA可直接用于分子生物学下游操作．     

土壤重金属镉有效态检测及形态分析方法研究

对土壤重金属镉的形态分析方法进行了选择,对其检测条件进行优化,选用DTPA(二乙基三胺五乙酸)作为土壤重金属镉有效态的提取剂,最优条件为样品5 g,水土比为1∶10。土壤重金属形态分析方法以BCR法为基础,弱酸提取态用醋酸溶液作提取剂;可还原态用醋酸羟胺溶液作提取剂;可氧化态用过氧化氢消化,醋酸铵溶液作提取剂。     

双峰驼瘤胃微生物总DNA的提取与纯化

[目的]提取高质量的双峰驼瘤胃微生物总DNA,为采用免培养技术研究双峰驼瘤胃微生物奠定基础.[方法]采集双峰驼瘤胃内容物,用酶解(溶菌酶、蛋白酶K)、冻融和表面活性剂十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)、溴化十六烷三甲基铵(Cetyltrimethyl Ammonium Bromide,CTAB)多种处理相结合,提取微生物总DNA,并用Omega Gel Extraction kit纯化.[结果]提取到的瘤胃微生物总DNA片段大于23 kb,纯化后的DNA可用于PCR,酶切及克隆等进一步的分子生物学研究.[结论]用该提取方法得到的总DNA能够满足分子生物学试验的要求.     

质粒DNA提取方法优选试验

采用酚/氯仿法、异丙醇沉淀法、煮沸法及微波炉法分别提取细菌质粒,琼脂糖凝胶电泳分析,紫外分光光度计测定OD值,对各种方法的优劣进行比较分析。结果表明,以异丙醇沉淀法提取的质粒DNA纯度和产量最高,且重复性好,具有结果稳定的特点;能够满足高水平的分子生物学试验要求,适合大多数实验室使用。     

鸡源葡萄球菌携带cfr与tet(M)基因于同一质粒的检测

为了解鸡源葡萄球菌中多药耐药基因cfr的流行及耐药情况,采用提取细菌基因组DNA、PCR检测、药物敏感性检测、质粒提取、电转化试验、全质粒测序及分析等方法进行了研究。分离并鉴定出了1株多药耐药表型葡萄球菌,其含有cfr与tet(M)基因,且cfr与tet(M)耐药基因位于同一质粒上。     

鸡源葡萄球菌携带cfr与tet(M)基因于同一质粒的检测

为了解鸡源葡萄球菌中多药耐药基因cfr的流行及耐药情况,采用提取细菌基因组DNA、PCR检测、药物敏感性检测、质粒提取、电转化试验、全质粒测序及分析等方法进行了研究。分离并鉴定出了1株多药耐药表型葡萄球菌,其含有cfr与tet(M)基因,且cfr与tet(M)耐药基因位于同一质粒上。     

红豆杉细胞蛋白质双向电泳样品制备方法的比较

[目的]探索适用于红豆杉愈伤蛋白质组学研究的样品制备方法。[方法]以红豆杉愈伤组织为材料,分别采角三氯乙酸（TCA）／丙酮沉淀法、Tris—HCl法和酚-甲醇／醋酸铵沉淀法提取其中的总蛋白,通过双向电泳（2DE）检测3种方法对总蛋白的提取效果。[结果]3种方法提取的蛋白样品2DE图谱显示的蛋白点数量均较多。TCA／丙酮沉淀法对蛋白质的提取率较高,2DE图像清晰,条纹少,拖带现象轻;Tris—HCl法提取的蛋白样品2DE图谱个别区域出现较轻的云片状聚集,并有轻微拖带现象;酚-甲醇／醋酸铵沉淀法提取蛋白样品的2DE图谱有条纹和拖带现象。[结论]TCA／丙酮沉淀法提取的蛋白质质量较高,所得图谱背景清晰,蛋白质信息量大。     

质粒DNA提取的简便方法

以质粒pBR322为对象,在经典的质粒提取方法的基础上进行了一些改进,将酚氯仿异戊醇抽提和氯仿异戊醇抽提省去。比较了简便方法和经典方法提取质粒的效果,结果显示:两种方法均能够提取出质粒DNA,RNA的量并没有比经典方法提出来的多;简便方法抽取的质粒,蛋白含量稍稍多于后者;简便方法节省了大约一半的提取时间及大量的药品,并且减少了有害的化学物质对人体的危害,是一种经济实用的方法,完全可以满足一般实验需要。     

蜻蜓目昆虫DNA的提取方法研究

以不同处理方法的蜻蜓目昆虫为材料,分别采用溴化十六烷基三甲基铵(CTAB)法、蛋白酶K等方法提取总DNA,通过OD260/280值、琼脂糖凝胶电泳对所得DNA溶液进行检测.结果显示这两种方法均可以获得较高质量的总DNA,用于PCR扩增实验.因此,在实际工作中可根据实验目的、条件选取最适合的方法.