黑曲霉木聚糖酶性质的初步研究

对黑曲霉菌株所产的木聚糖酶性质进行了研究。结果表明:该酶的酶活力为69913IU·g-1,最适反应温度为45℃,最适pH值为3.6,pH稳定范围较广,热稳定性在50℃以下,一般金属阳离子对该酶影响不大,适用于低聚木糖工业生产。     

木聚糖酶高产菌株的筛选、鉴定及其酶学性质研究

试验以玉米芯粉为唯一碳源,通过富集培养定向筛选技术,从土壤中分离获得一株产木聚糖酶较高的霉菌菌株X-1,经初步液体发酵木聚糖酶活高达724.63 U。依据《真菌鉴定手册》初步鉴定该菌株为黑曲霉(As-pergillus nigeer)。同时对该菌株所产木聚糖酶的酶学性质进行了研究,结果表明:该木聚糖酶的最适作用温度为45℃,最适pH值为6.0;在70℃保温30 min后酶活力仍为90%以上;在pH3.0~7.0范围内稳定性较好,酶活仍为90%以上。     

黑曲霉木聚糖酶曲盘发酵及其粗酶性质研究

为研究黑曲霉菌株(Aspergillus niger)XZ-3S曲盘发酵木聚糖酶条件及所产粗酶的性质,采用曲盘(大小φ20cm×4cm)进行固态发酵条件研究,并对所产粗酶进行酶学性质测定。结果表明:在培养基干料100g、初始料水比1∶1.7、初始pH自然状态、相对干物料接种量10%、中间定时翻曲补水和28℃连续培养60h条件下,酶活力最高可达24 380IU/g干曲;粗酶最适反应pH5.0,最适温度50℃;温度低于50℃、pH3.0~8.0的条件下酶较稳定;EDTA(活性物质)、Cu2+、Co2+对酶有明显的激活作用,Pb2+、Mg2+、Fe2+、Mn2+、Ca2+、Fe3+、Al 3+对酶有不同程度的抑制作用。     

小麦木聚糖酶抑制蛋白的分离纯化及其性质研究

【目的】从成熟的小麦籽粒中纯化小麦木聚糖酶抑制蛋白,并研究其对木聚糖酶的抑制作用,从而探明小麦中木聚糖酶抑制蛋白对外加木聚糖酶的影响。【方法】采用硫酸铵盐析、Macro-prep CM阳离子交换层析、Macro-prep DEAE阴离子交换层析以及Macro-prep 25S阳离子交换层析等方法,从小偃22小麦中分离纯化木聚糖酶抑制蛋白,通过SDS-PAGE电泳检测木聚糖酶抑制蛋白的纯度和分子质量,并进一步研究了不同温度和反应时间对木聚糖酶抑制蛋白抑制活力的影响。【结果】小麦木聚糖酶抑制蛋白分子质量约为29ku,N端氨基酸序列为SVSSVVS,经NCBI BLAST比对,该抑制蛋白N端序列与其他木聚糖酶抑制蛋白无同源性,但与大麦几丁质酶的N端序列高度同源,却无几丁质酶活性;该蛋白对来自黑曲霉的GH11家族木聚糖酶有强烈的抑制活性,但对GH10家族的木聚糖酶不敏感;该蛋白与木聚糖酶结合的最适温度为30℃,最佳时间为30min;该抑制蛋白的半失活温度为74℃,具有较好的热稳定性。【结论】所获得的小麦木聚糖酶抑制蛋白可能是一种新型的XIP型木聚糖酶抑制蛋白。     

木聚糖酶的分离纯化及性质研究

采用硫酸铵盐析、Phenyl—Sepharose CL-4B疏水层析、Sephadex G-50凝胶层析和DEAE- Sepharose fast flow阴离子交换层析等分离技术,从宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)固态培养物浸出液中分离出一种SDS—PAGE电泳纯木聚糖酶组分,其最终的收率为19．0％,纯化倍数为26．9。该木聚糖酶的相对分子质量20．7 ku,等电点pl5．0,含糖量0．42％;该酶的最适作用温度为50 C,在50 C以下较稳定;最适作用pH 5．0,在pH 5．5～9．0时较稳定;Ca2+对该酶活性有一定的激活作用,而Pb2+,Sn2+,Cu2+,Al3+则有较强的抑制作用。以桦木木聚糖为底物,测得该酶的Km值和Vmax分别为3．5 mg／mL和5000 μmol／(min·mg)。     

黑曲霉木聚糖酶XynⅢ的纯化与酶学性质

通过超滤和DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析等方法,将黑曲霉J506发酵所产的木聚糖酶XynⅢ纯化至电泳级均一纯,分子量经SDS-PAGE测定为27.9 kDa.酶学特性研究表明,XynⅢ能够水解桦木木聚糖,燕麦木聚糖,地衣多糖和大麦β-葡聚糖,最适温度和最适pH值分别为50℃和4.6,具有较宽的pH稳定性,并且在50℃以下较稳定.Ca2 ,Co2 ,Cu2 ,Mn2 ,Pb2 ,K ,Zn2 and EDTA对酶有不同程度的抑制作用,Fe2 和Mg2 对酶有轻微的激活作用.     

酸性木聚糖酶产生菌株的筛选和酶学性质分析

【目的】从自然环境筛选出可用于饲料工业加工用途的酸性木聚糖酶产生菌株。【方法】通过富集培养定向筛选技术,从土壤中分离获得18株产木聚糖酶菌株,挑选其中5株进行摇瓶发酵。对产酶最高的菌株S8-3进行初步鉴定,同时分析该菌株产生的木聚糖酶的酶学性质。【结果】经初步鉴定该菌株为黑曲霉(Aspergillus niger);该菌株发酵液的木聚糖酶活性高达628.43 U•mL-1;木聚糖酶的最适作用温度为45℃,最适pH为4.5,在70℃保温30 min后酶活力仍为60%以上,在 pH 3.0—7.0内稳定性较好。【结论】预期该菌株产的木聚糖酶具有用于饲料添加剂的潜力。     

发酵液中木聚糖酶的纯化和性质的研究

[目的]为克隆木聚糖酶基因和构建基因工程菌提供重要的生物信息。[方法]曲霉固态发酵经硫酸铵盐析、疏水层析、凝胶过滤层析和阴离子交换层析等提纯步骤,获取纯的木聚糖酶并对其性质进行研究。[结果]该酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为4.5;纯酶在45℃以下较稳定,在pH 5.0~9.0范围内稳定;Ca2+对该酶有促进作用,Mn2+、Pb2+、Sn2+有较强的抑制作用;其分子量为26.8kDa;该酶在波长250和280 nm处分别有最小和最大吸收峰,是典型的蛋白质特征吸收峰,它在200~230 nm范围内有一个很大的吸收峰;该酶的等电点为4.2,为酸性蛋白质;Km为9.2 mg/ml。[结论]该研究为研究木聚糖酶的功能与应用奠定了基础。     

黑曲霉A3中木聚糖酶特性及木寡糖酶的产量研究

１ＭａｔｅｒｉａｌｓａｎｄＭｅｔｈｏｄｓ１．１ＭｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍＡｓｐｅｒｇｉｌｕｓｎｉｇｅｒｓｔｒａｉｎＡ３ｏｆｈｉｇｈ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｘｙｌａｎａｓｅｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄｂｙｔｈｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｏｆａｎｉｍｐｒｏｖｅ...     

黑曲霉培养物急性毒性和微核实验评价

以小白鼠为试验对象 ,对黑曲霉培养物的急性毒性和遗传性毒性进行了研究。结果表明 :黑曲霉培养物的 LD5 0>1 0 g/kg;黑曲霉培养物组与正常饲料组所引起的小鼠骨髓细胞微核率无显著差异。因此初步认为黑曲霉培养物是一种比较安全的饲料原料。     

钴辐射诱变黑曲霉菌株的初步筛选

用扬州大学饲料营养学教研室筛选并保藏的黑曲霉菌株 ,经6 0 Co照射后 ,最终分离出 3株突变菌株。培养 5d后 ,突变株 A、C、D及野生菌株产生的植酸酶酶活力分别为 883 .52± 1 1 0 .0 8、 70 2 .1 4± 73 .85、 687.0 4± 82 .70、 74 8.1 2± 57.0 5U/ g。突变株 A比野生菌株的产植酸酶能力高 1 8.1 %。此外 ,突变株 A对菜籽饼中硫葡萄糖甙、粗纤维等的降解能力也较强。因此 ,本次筛选出的突变株 A具有较好的实用价值     

2株黑曲霉植酸酶的分离纯化及其酶学性质研究

对黑曲霉A 3214及其诱变株N14所产植酸酶进行分离纯化并研究各种酶学性质,表明A 3214植酸酶和N14植酸酶的最适pH均为2.5,最适温度均为50℃,60℃保温10 min后酶活保留均在80%左右,用胃蛋白酶处理后酶活均保留80%左右,分子量均为47.4 KD,等电点均在4.5到5.0之间,K+,Na+,Ca2+,Mg2+,Fe2+在高浓度时对A3214植酸酶和N 14植酸酶都有抑制作用,而Zn2+,Cu2+,Mn2+却几乎没有抑制作用,A 3214植酸酶对植酸钠的Km值为0.0005 mol/L,N 14植酸酶对植酸钠的Km值为0.0004 mol/L,A 3214植酸酶的比活为135 777.5u/mg,N 14植酸酶的比活为148 447.5u/mg.     

2株黑曲霉植酸酶的分离纯化及其酶学性质研究

对黑曲霉A3214及其诱变株N14所产植酸酶进行分离纯化并研究各种酶学性质,表明A3214植酸酶和N14植酸酶的最适pH均为2．5,最适温度均为50℃,60℃保温10min后酶活保留均在80％左右,用胃蛋白酶处理后酶活均保留80％左右,分子量均为47．4KD,等电点均在4．5到5．0之间,K^＋,Na^＋,Ca^2＋,Mg^2＋．Fe^2＋在高浓度时对A3214植酸酶和N14植酸酶都有抑制作用,而Zn^2＋,Cu^2＋,Mn^2＋却几乎没有抑制作用,A3214植酸酶对植酸钠的Km值为0．0005mol／L,N14植酸酶对植酸钠的Km值为0．0004mol／L,A3214植酸酶的比活为135777．5u／mg,N14植酸酶的比活为148447．5u／mg。     

农用抗生素S—921有效组分的分离纯化及部分理化性质研究

通过酸性Ａｌ２Ｏ３柱层析将Ｓ－９２１抗生素的有效组分从该菌株发酵液中分离出，并经甲醇－乙醚溶剂系统纯化，获得晶品。对期部分理化性质研究的结果表明：该抗生素有效组分溶于水，微溶于甲醇，不溶于乙醚、氯仿等有机溶剂，１４０℃开始分解，其水溶液的ＰＨ为４．７，其水溶液在１００℃以内处理５ｍｉｎ，活性基本无变化，用１２１℃处理５ｍｉｎ，活性下降１／２，在水溶液中其紫外最大吸收在２９０ｎｍ、３０４ｎｍ及３１８     

柚苷酶生产菌的选育

柚苷酶作为苦味物质柚苷的分解酶有望在柑桔加工生产得到应用。研究设计和试验了1种新的柚苷酶筛选模型,在堆积过腐坏柑桔的土壤中分离了多株产柚苷酶菌株。其中SN 01产酶最高,摇瓶产酶达291U/ml,初步鉴定为黑曲霉。SN 01经NTG诱变、筛选,育成菌株SN 90,其摇瓶产酶可达1282U/ml。研究发现菌株SN 90的产酶过程需要柚苷诱导并对葡萄糖浓度不敏感,为低分解代谢物阻遏型突变株,因而该菌株具有较好的工业应用潜力。     

樟树叶片抑菌化合物的分离纯化及其部分特性研究

以碱提取、酸沉淀的方法从樟树叶片中分离得到一种棕黑色粉末，该提取物主要为有色化合物Ａ和Ｂ的混合物，化合物Ａ的含量成倍高于化合物Ｂ；经ｓｉｌｉｃａｇｅｌ、Ａｌ＿２Ｏ＿３及ｓｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱层析分离纯化等步骤，得到纯化的红棕色化合物Ａ，经ＰＡＧＥ、ＰＬＣ及ＴＬＣ检测均为单一谱带或单一斑点；该化合物熔点为２８０．２９℃，λ＿（ｍａｘ）￣（ＫＯＨ）为２１３ｎｍ，Ｅ１ｃｍ１％为３４２．５，肩峰为２５７ｎｍ，ｐＩ为３．７，对大肠杆菌、金黄葡萄球菌、巨大芽孢杆菌、枯草杆菌及毛霉有较强的抑菌活性。     

嗜热真菌Thermomyces lanuginosus热稳定蛋白酶的纯化及特性

嗜热真菌Thermomyces lanuginosus在液体培养基中于50℃振荡培养1周后，培养液经硫酸铵分级沉淀、DEAE－Sepharose离子交换层析、Phenythl-Sepharose疏水层析，得到了凝胶电泳均一的蛋白酶。用SDS－PAGE测定分子量为55kD，该酶的最适反应温度为70℃，最适作用pH值为6.0。该酶具有很好的耐热性，在pH值6.0 50℃条件下酶是稳定的；60℃保温1h，仍保留92％的原酶活性；90℃时酶活半衰期为6min，抑制剂试验证明，该酶为丝氨酸蛋白酶。