抗猪瘟病毒IgG的研制

用驴制备抗猪瘟病毒（HCV）免疫球蛋白，预防和治疗猪HCV感染，制备HCV抗原复合物，通过免疫驴，用纯化方法从驴血清中提取特异性抗体（IgG)，经过理化学检定，血清学，动物效力实验。免疫驴均可产生特异IgG,Dot-ELISA效价大于1：640（IgG浓缩浓度为60mg/mL）；可保护猪兔受HCV攻击；室温保存半年，4℃两年效价不变。已成功地应用HCV免疫驴制备出高效价特异性抗HCV-IgG。     

驴源抗犬细小病毒IgG抗体的制备及其抗病毒活性的分析

为制备驴源抗犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)抗体,首先利用F81猫肾细胞扩增CPV-2a病毒株,经甲醛灭活和氢氧化铝胶乳化,制成CPV灭活疫苗,病毒滴度为10-8.5 TICD50,然后通过肌肉分点注射免疫驴,连续免疫3次(第1次注射3mL,后2次各注射6mL),每次免疫前采血,分析驴血清的抗体滴度和中和抗体效价;利用盐析法和离子交换层析法分离和纯化驴血清IgG。用IgG处理幼犬(50mg/kg),用CPV-2a毒株对IgG处理的犬进行攻毒,分析IgG抗CPV的活性。结果显示,免疫3次后驴血清的CPV抗体滴度为1∶8 192,中和抗体效价为28.5。用制备的IgG处理幼犬未发现不良反应,经CPV-2a攻毒实验证实IgG处理犬的发病率和死亡率分别为33%,0%,均明显低于非处理组(分别为100%,83%),说明制备的驴源IgG具有明显的抗CPV活性。     

犬细小病毒核酸疫苗、重组活载体疫苗与弱毒疫苗免疫犬实验研究

分别用犬细小病毒（CPV）核酸疫苗（pVCPV-VP2）、CPV重组活载体疫苗（CAV2／CPV）与CPV弱毒疫苗对犬进行了免疫试验,以检测不同CPV疫苗的免疫原性。采用CPVELISA、CPVHI与CPV微量中和试验检测免疫犬的体液免疫水平,采用淋巴细胞转化试验检测犬的细胞免疫水平。结果,pVCPV—VP2和CAV2／CPV均能诱导机体产生抗CPVELISA抗体与抗CPV中和抗体,但是pVCPV-VP2不能诱导机体产生可检测的抗CPVHI抗体,而CAV2／CPV能够诱导机体产生抗CPVHI抗体。淋巴细胞转化试验结果,pVCPV-VP2和CAV2／CPV免疫犬的外周血淋巴细胞对ConA与CPV的刺激均出现明显的增殖反应。结果表明,pVCPV—VP2和CAV2／CPV免疫犬均能诱导机体产生抗CPV的特异性体液免疫反应和细胞免疫反应,两者所表达的VP2蛋白均具有较好的免疫原性。CAV2／CPV以及pVCPV—VP2和CAV2／CPV联合免疫犬的抗CPV体液免疫水平和细胞免疫水平均比用pVCPV—VP2单独免疫犬的体液免疫水平和细胞免疫水平高。但CAV2／CPV诱导机体产生的抗CPV特异性免疫反应仍然比CPV弱毒疫苗诱导机体产生的抗CPV特异性免疫反应弱。另外,CAV2／CPV还能诱导机体产生抗CAV-2的特异性免疫反应。     

犬细小病毒血凝抑制抗体效价胶体金免疫层析检测方法的建立及应用

试验旨在利用胶体金免疫层析技术建立快速检测犬血清中犬细小病毒（canine parvo virus, CPV）血凝抑制（haemagglutination inhibition, HI）抗体效价的方法,用于CPV疫苗免疫效果评价。采用双抗体夹心法,以抗CPV血凝相关抗原的单克隆抗体制备CPV抗原检测试纸条;将犬血清进行不同比例系列稀释后,分别与定量CPV抗原充分反应,滴入CPV胶体金试纸条,根据试纸条检测线（test line,T线）消失时的血清最高稀释倍数判断血清中CPV抗体的HI效价;用此方法检测86份犬血清样品,并与传统血凝抑制试验方法进行分析比较。结果显示,成功制备CPV抗原检测试纸条,确定了试纸条检测犬血清CPV-HI效价的反应条件和结果判定标准。结果表明,在检测不同稀释倍数犬血清反应后的CPV抗原时,能使试纸条T线消失时的血清最高稀释倍数与HI效价具有正相关性,犬血清最高稀释倍数乘以4即为HI效价;两种方法的符合率达90.7%。本试验初步建立了胶体金试纸条检测CPV血凝抑制效价的方法,为检测CPV-HI效价提供了一种操作简单、快速的试验方法,可用于CPV疫苗免疫效果评价。     

猪链球菌重组GDH蛋白间接ELISA检测方法的建立

为建立一种简便快速的胶体金免疫层析方法（GICA）以用于检测犬抗狂犬病毒抗体,本研究运用间接反应一步法原理．采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒用以标记抗犬IgG抗体形成金一抗犬IgG抗体复合物,制成金标结合垫,加上包被有狂犬病毒糖蛋白的硝酸纤维膜,即制成胶体金免疫层析试纸条。样品中狂犬病毒抗体与金标记抗体结合后沿硝酸纤维素膜移动,     

免疫金电镜技术检测犬细小病毒免疫球蛋白

本文应用免疫金电镜技术检测犬细小病毒免疫球蛋白（Ｉｇ）。检测结果证明驴抗犬细小病毒所产生的Ｉｇ对犬细小病毒具有较强的特异性反应。因此认为,第四军医大学动物保健品研制中心所制备的免疫球蛋白对犬细小病毒性肠炎和心肌炎具有良好的治疗和预防作用。     

犬巴贝斯虫抗体胶体金检测卡制备与评价

试验旨在快速检测犬巴贝斯虫抗体,利用胶体金免疫层析技术制备犬巴贝斯虫抗体胶体金检测卡并评价其功能性。将羊抗鼠免疫球蛋白G (IgG)和犬巴贝斯虫表面抗原Bg P47重组蛋白（Bg P47 Ag）包被于NC膜上分别做为质控线和检测线,胶体金标记的鼠IgG和鼠抗犬IgG均匀喷点在聚酯纤维膜上作为标记垫,将化学品配制的玻纤溶液均匀涂在样品垫上,并用吸水纸和PVC底板制备犬巴贝斯虫抗体胶体金检测卡,对其特异性、灵敏度、均一性、加速稳定性、实时稳定性进行评价,并与ELISA、PCR检测结果进行对比。结果显示,该检测卡不与犬莱姆抗体（lyme Ab）阳性犬血清、犬瘟热病毒抗体（CDV Ab）阳性犬血清、犬细小病毒抗体（CPV Ab）阳性犬血清、犬无形体抗体（Anaplasma Ab）阳性犬血清、犬三联疫苗阳性免疫犬血清样本发生交叉反应;可检测浓度稀释至1∶256倍的样本;有效期可达到24个月。研究表明,该检测卡可快速、准确地检测犬巴贝斯虫抗体,为动物临床诊断和治疗提供参考。     

犬细小病毒单克隆抗体的制备及其在胶体金免疫层析试纸研发中的应用

为制备犬细小病毒胶体金免疫层析试纸,将F81细胞中分离的CPV免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,建立间接ELISA方法筛选分泌CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞,获得1株能稳定分泌CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3E2。3E2的亚类为IgG1型,腹水抗体效价为1.8×105,交叉试验表明,3E2可与CPV特异性结合,与其他犬常见病毒无交叉反应。用3E2单克隆抗体制备的检测CPV的胶体金免疫层析试纸条特异性良好,为诊断和研究CPV奠定了基础。     

应用电镜技术对犬腺病毒及其免疫球蛋白的检测

应用电镜技术及免疫金电镜技术检测犬腺病毒及驴抗犬腺病毒免疫球蛋白（Ｉｇ）。实验结果证明了由驴所产生的Ｉｇ对犬腺病毒具有较强的特异性反应,对犬肝炎、犬喉气管炎等疫病具有良好的治疗和预防作用。     

规模化制备驴抗犬细小病毒免疫球蛋白(CPV-Ig) 最佳《免疫程序》的试验报告

免疫血清 (Immuneserum)是一类含有特异性抗体用于诊断疾病或鉴定微生物的生物制剂 ,驴抗免疫球蛋白 (CPV -Ig)亦属生物制剂。它主要来源于血清中 ,可从免疫动物血液中提取。免疫球蛋白是抗感染免疫的主力 ,具有抗菌、抗病毒和抗外毒素等多种活性[1]。犬细小病毒免疫球蛋白(Ig)经实验室试验 ,和本中心两个宠物门诊临床治疗以及在全国各地防治犬细小病毒性肠炎的临床应用 ,收效显著。是目前防治该病较理想的生物制剂。1材料与方法1.1材料1.1.1抗原犬细小病毒弱毒株(简称CPV -XN1)和犬细小病毒强毒株 (简称CPV -XN931)均由第四军医大学…