重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗免疫效果评估

2017年7月,农业部决定对全国家禽开展H7亚型流感免疫。为评价重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对家禽的安全性及免疫效果,2017年10—12月以田间试验方式,常规养殖肉鸡(江村黄鸡)、樱桃谷白鸭、黑棕鹅各120只。按程序免疫:肉鸡9日龄首免(剂量0.3 mL),30日龄二免(剂量0.5 mL);樱桃谷白鸭15日龄首免(剂量1 mL);黑棕鹅15日龄首免(剂量1 mL)、50日龄二免(剂量1.5 mL)。定期采集血清测定抗体效价直至出栏,并每日观察禽群临床表现。试验结果显示:鸡首免后21 d,H5亚型HI抗体效价为4.2 log2,抗体合格率均小于70%,H7亚型HI抗体效价为7.5 log2,抗体合格率均大于70%;二免后H5和H7亚型HI抗体效价均大于8 log2,抗体合格率均大于70%。鸭首免后21 d,H5亚型HI抗体效价为5.1 log2,抗体合格率均大于70%,H7亚型HI抗体效价为5.6 log2,抗体合格率均大于70%,出栏前(47日龄)H5和H7亚型HI抗体效价均大于6 log2,抗体合格率均大于70%。鹅首免后21 d,H5亚型HI抗体效价为3.9 log2,抗体合格率均小于70%,H7亚型HI抗体效价为5.2 log2,抗体合格率均大于70%;二免后H5和H7亚型HI抗体效价均大于7 log2,抗体合格率均大于70%。通过临床观察,未发现该疫苗有严重免疫副反应。试验结果表明,该二价灭活疫苗安全有效,但对于生长周期超过70 d天的家禽,应免疫两次。     

重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株)对雉免疫效果的研究

为评估重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株)对雉的免疫保护效果,选取30日龄的雉,按照免疫程序首免后21 d,加强免疫1次,分别于接种前和接种后定期采血,分离血清,检测H5、H7亚型HI抗体滴度。结果显示,免疫前,雉血清中H5、H7亚型HI抗体滴度均为0;免疫后14 d,H5和H7亚型抗体平均滴度分别达到7.0log2和7.07log2,49 d后平均滴度达到峰值,分别为8.04log2和9.20log2;H5亚型免疫有效期可达105 d以上,H7亚型可达189 d以上。结果表明,重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对雉具有良好的免疫保护效果且安全性良好,但疫苗免疫49 d后,H5、H7抗体效价逐渐下降,133 d后明显下降,群体免疫合格率低于70%,因此生产中推荐,30日龄首免后,51日龄和5月龄各加强免疫1次。本研究为珍稀禽的禽流感免疫疫苗选择和程序制定提供了参考。     

不同剂量重组禽流感病毒二价灭活疫苗免疫效果对比

为了解重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)不同免疫剂量对黄羽肉鸡的免疫效果,将临床健康的黄羽肉鸡240羽随机分成A、B、C、D四个组,每组60羽,用同一种免疫程序同一时间、不同剂量进行免疫,采用血凝和血凝抑制的方法检测血清中的禽流感H5和流感H7抗体。试验结果表明,A、B、C、D四组疫苗的免疫效果好,在二免后14 d至56 d(76日龄),免疫抗体合格率都达到90%以上,达到农业部免疫抗体合格率的要求(70%以上);禽流感H5免疫抗体平均滴度达7log2以上,流感H7免疫抗体平均滴度达6log2以上;但以C、D两组的免疫效果更好,在二免后14 d至56 d(76日龄),免疫抗体合格率都达100%,禽流感H5和流感H7免疫抗体平均滴度达7.8log2以上。因此,重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对鸡的免疫程序:10日龄颈部皮下首次注射0.1、0.2、0.3 mL;20日龄颈部皮下二次注射0.1、0.2、0.3、0.5 mL,适用于76日龄左右出栏的肉鸡。但推荐10日龄和20日龄鸡分别颈部皮下注射0.3m L/只,免疫程序会更好。     

鸡胚源H5亚型禽流感疫苗的免疫效果及应用

将试验动物分为鸡(A1/A2组)、鸭(B1/B2组)4个组,利用新型高效的鸡胚源H5亚型高致病性禽流感疫苗进行两次免疫,免疫前、首免及二免21 d后采血检验H5亚型禽流感病毒抗体。结果显示,首免后各组免疫抗体合格率达到90%以上,二免后各组免疫合格率为100%。首免鸡H5亚型禽流感病毒抗体滴度较高且均匀,鸭的抗体滴度相对偏低且离散分布较广。二免后鸡、鸭抗体滴度非常高,在8~10 log2之间。推广应用于种禽场、商品代规模场、农村散养户等,禽类免疫合格率达到89.32%。     

H5亚型禽流感Re-4毒株疫苗免疫效果调查与分析

为了解H5亚型禽流感Re-4毒株疫苗免疫效果,采用血凝-血凝抑制试验(HA-HI)方法对16个县区102个规模场/散养户送检的1621份鸡血清,进行H5亚型禽流感Re-4毒株免疫抗体检测。结果:Re-4毒株免疫血清抗体合格率为72.9%(抗体滴度≥5log2),Re-4毒株免疫抗体合格率高于50%的蛋鸡场户占80.4%,免疫抗体滴度≥7log2的血清份数占合格数的76.2%;发生过H5亚型禽流感疫情和疑似H5亚型禽流感疫情地区的17个养鸡场户,鸡群抗体滴度≥7log2的血清比例占到免疫合格数90%以上。     

重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗的樱桃谷肉鸭免疫优化试验

为探究重组禽流感病毒三价灭活疫苗（H5N1 Re-11株+Re-12株,H7N9 H7-Re2株）对樱桃谷肉鸭的免疫特性,同时优化免疫方案以使其尽早产生免疫保护,将300只1日龄樱桃谷肉鸭随机分成3组,每组100只：一免组于7日龄免疫1次,剂量为0.5 mL/只;二免组于1日龄、7日龄各免疫1次,剂量分别为0.2、0.4 mL/只;对照组不免疫。采用血凝试验（HA）及血凝抑制试验（HI）进行抗体检测。结果显示：一免组肉鸭在21日龄Re-11、Re-12和H7-Re2平均抗体水平和抗体合格率均较低,分别为2.8log2和33%,2.6log2和31%,2.5log2和30%;28日龄分别上升至4.5log2和87%,4.1log2和83%,4.0log2和80%;38日龄分别为4.4log2和90%,4.2log2和87%,4.1log2和83%。二免组肉鸭在21日龄各毒株平均抗体水平和抗体合格率分别达到4.5log2和80%,4.3log2和77%,4.1log2和73%;28日龄分别为6.0log2和97%,5.6log2和93%,5.2log2和93%;38日龄分别为6.1log2和100%,5.4log2和97%,5.0 log2和97%。对照组肉鸭在21日龄母源抗体已很低,各毒株平均抗体水平和抗体合格率分别为1.2log2和3%,1.3log2和3%,1.6log2和7%;28日龄、38日龄抗体水平均为0。结果表明：该疫苗能够有效刺激肉鸭产生免疫保护抗体,适用于禽流感免疫;在1日龄、7日龄各免疫1次的效果更佳,因此在发病日龄较早的高风险区域,建议采用该方案加以防控。     

重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗免疫高邮鸭效果观察

为了解重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗免疫高邮鸭的效果,选取21日龄高邮鸭150只,随机分成3组,每组50只。一免组21日龄腿部肌肉注射0.5 m L/只;二免组21日龄0.5 m L/只首免、42日龄1.0 m L/只二免;对照组不免疫。分别于免疫前(0 d)和一免后21、28、60 d对采集血清样品,检测免疫抗体水平。结果显示:一免组免疫后21 d,H5(Re-8株)免疫抗体合格率达85%,H7N9(Re-1株)免疫抗体合格率达95%,28 d均达100%;二免组二免后7 d,H5(Re-8株)和H7N9(Re-1株)免疫抗体均达100%。结果表明,该疫苗能够刺激高邮鸭产生有效保护抗体,可用于防控禽流感。     

重组禽流感H5+H7二价灭活疫苗的免疫效果评估与分析

为了客观评价重组禽流感H5+H7二价灭活疫苗(H5N1Re-8株+H7N9Re-1株)的免疫效果及当前禽流感免疫程序的合理性,提高本地区禽流感防控工作水平,采用血凝抑制试验(HI)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对某养殖场免疫的100羽蛋鸡进行不同时间段H5、H7亚型禽流感抗体水平检测。结果:在免疫后21～252 d,HI和ELISA检测禽流感H5亚型抗体合格率均为74%～100%;禽流感H7亚型HI检测抗体合格率为78%～100%,ELISA检测抗体合格率为76%～100%。结果表明:HI与ELISA抗体检测结果基本相符,在免疫后21～252 d免疫抗体合格率均达到国家规定≥70%的要求,重组禽流感H5+H7二价灭活疫苗免疫效果良好。     

重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗免疫效果评估

对崇左市2017年10月至2018年9月家禽实施免疫重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1亚型Re-8株+H7N9 H7-Re1株)的免疫效果进行了评估,旨在为崇左市家禽禽流感防控决策提供参考。结果表明,H5亚型禽流感免疫抗体合格率为90.35%,H7亚型禽流感免疫抗体合格率为84.94%,禽流感病毒核酸均为阴性。H5+H7免疫抗体水平较高,抗体合格的血清中,H5平均效价为8.33log2,H7平均效价为7.41log2,疫苗安全稳定,可有效抵抗当前禽流感流行毒株的侵袭。     

种鸡禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗免疫程序的研究

本研究设计不同的免疫程序,用禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗(H5N1 Re-1+H9N2 Re-2株)免疫黄羽种鸡,通过对H5亚型和H9亚型禽流感HI抗体滴度监测,探讨H5亚型和H9亚型禽流感HI抗体消长规律及禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗的免疫程序.结果表明,用禽流感二价灭活疫苗免疫黄羽种鸡后,H5亚型和H9亚型禽流感HI抗体的消长规律基本同步,其抗体滴度阶段性峰值出现在免疫后的第21~28天.根据试验结果,建议用禽流感二价灭活疫苗免疫黄羽种鸡的免疫程序设为:首免(14 d),0.3 mL/只;二免(56 d),0.5 mL/只;三免(119 d或开产前4周),0.5 mL/只.     

H5N1亚型禽流感灭活疫苗免疫鸵鸟后抗体消长规律及免疫程序的研究

为了探讨鸵鸟对H5亚型禽流感灭活疫苗的免疫原性,做好鸵鸟禽流感的防控工作,采用哈尔滨兽医研究所研制的重组H5N1亚型禽流感疫苗,不同剂量免疫鸵鸟,用HI方法检测母源抗体和免疫抗体,根据母源抗体的衰减和免疫抗体的消长规律确定首免和再免日龄.结果表明,雏鸵鸟母源抗体能维持约3周～8周;8周龄时分组首免,C1组产生的免疫反应优于C2组,抗体峰值能达到7.50 log2,维持时间为9周左右;17周龄时C1组以3.0 mL/羽进行二免,2周后抗体达到7.40log2,3周～7周抗体维持在高峰值,最高达8.80log2,以后逐渐下降,有效抗体水平能维持至接种后25周左右.二免后25周进行三免,以5 mL/羽三免后2周抗体可达到9.80log2,2周～4周抗体维持在最高峰,以后缓慢下降,期间抗体时有起伏,但有效抗体水平约可维持1年时间.三免后45周内抗体水平合格率均在70%以上.根据抗体消长规律,初步推荐了鸵鸟的免疫程序.     

重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对商品肉鸡的免疫效力研究

为评估重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对商品肉鸡的免疫保护效果,本研究将该疫苗按照现地免疫程序分别接种10日龄白羽肉鸡和14日龄黄羽肉鸡,疫苗接种前和接种后每周采血,分离血清,检测H5亚型Re-8株和H7亚型H7-Re1株禽流感病毒(AIV)HI抗体滴度,并在初次免疫后3周和出栏时以鼻腔感染方式分别进行攻毒试验。结果显示,免疫前,所有肉鸡血清中H7亚型H7-Re1株AIV HI抗体滴度均低于1log2,H5亚型Re-8株AIV平均HI抗体滴度分别为5.3log2(白羽肉鸡)和4.1log2(黄羽肉鸡);一次免疫的白羽肉鸡在免疫后3周至出栏时,2种亚型AIV平均HI抗体滴度在6.0log2~6.7log2;2次免疫的黄羽肉鸡在初次免疫后3周至出栏时,2种亚型AIV平均HI抗体滴度均在6.0log2以上。在一次免疫后3周时和出栏时,采用高致病性H5、H7亚型AIV攻毒后,对照组白羽肉鸡和黄羽肉鸡均全部死亡,免疫组白羽肉鸡和黄羽肉鸡均不发病、不排毒、不死亡,获得100%的免疫保护。本研究结果表明,重组AIV二价灭活疫苗对商品肉鸡具有良好的免疫效果,为该疫苗的现地应用提供了参考依据。     

H5N1和H7N9亚型双价灭活流感疫苗对鹌鹑及鸽子的免疫原性

为评价重组流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对鹌鹑和鸽子的安全性及免疫效果,2017年12月—2018年6月,采用哈尔滨维科生物技术开发公司生产的重组流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗,对鹌鹑和肉鸽,在25日龄首免,46日龄二免(鹌鹑和肉鸽的剂量分别为0.3 mL和1 mL),观察禽群临床表现,定期采集血清测定抗体效价。结果显示:鹌鹑首免后21 d,H5和H7亚型HI抗体效价均达到高峰,分别为(7.7±1.3)log2和(8.5±1.3)log2,抗体合格率大于70%的持续期约为35 d;二免后7d,H5和H7亚型抗体效价均达到高峰,效价分别为(9.7±0.9)log2和(10.3±0.9)log2,H5和H7亚型抗体合格率大于70%的持续期分别约为147 d和175 d。鸽子首免后21 d,H5和H7抗体效价也均到达高峰,分别为(9.8±0.8)log2和(10.4±1.1)log2,两种亚型抗体合格率大于70%的持续期均超过181 d;加强免疫后7 d,H5和H7抗体效价也均达到高峰,效价分别为(10.2±1.0)log2和(10.7±0.9)log2,189 d后效价分别为(5.4±1.3)log2和(6.1±1.5)log2,合格率分别为96.7%和100%。临床观察,未发现该疫苗有严重免疫不良反应。结果表明,(H5+H7)二价灭活疫苗对鹌鹑和鸽子安全有效。生产中推荐:鹌鹑25日龄首免,46日龄和6月龄各加强免疫1次,剂量为0.3 m L;鸽子25日龄首免,以后每隔6个月加强免1次,剂量为1 m L。     

重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗对鸡和鸭的免疫效果观察

H7N9流感变异毒株的出现给我国家禽养殖业造成了严重的疫情风险。为了解和评估新型重组禽流感H5+H7二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)的免疫效果和抗体消长规律,我们开展了鸡、鸭现场免疫试验。监测结果表明,该疫苗对蛋鸡和蛋鸭都具有良好的免疫效果,H5和H7亚型免疫抗体水平在免疫后2周均能达到100%的免疫合格率。对雏鸡也具有较好的免疫效果,免疫一次时H5和H7亚型抗体合格率分别在一免后3周和2周达到70%以上,并维持到一免后13周;进行二次免疫后,H5和H7亚型抗体合格率在二免后1周都达到100%。对雏鸭的免疫效果相对较差,一次免疫的H5亚型抗体水平不能达到70%的免疫合格标准,二免后1周H5和H7亚型抗体合格率均能达到80%以上,必须加强免疫一次才能达到满意的免疫效果。     

肉鹅H5亚型禽流感疫苗免疫效果的研究

选用H 5亚型禽流感油乳剂灭活疫苗(H 5N 1,R e1株)对马岗鹅作首免日龄、免疫次数与免疫剂量的免疫试验。结果表明,雏鹅在7、14或21日龄作1次免疫均产生免疫应答,其中14与21日龄免疫组免疫后第5周抗体水平均达4 log2以上,抗体动态变化均值与峰值均高于7日龄免疫组2~3个滴度。用0.5、1和2 m l/只3个剂量对14日龄雏鹅的免疫试验中,0.5m l组抗体水平上升过程缓慢,免疫后4周抗体水平才达4 log2以上,1与2 m l组在免疫1周后上升速度较快,免疫后2周即达4 log2以上,抗体水平相近,但2 m l免疫组免疫后5~7周抗体水平均低于1 m l免疫组。说明接种剂量为1或2 m lH 5N 1油苗比接种0.5 m l的免疫效果好,尤以1 m l免疫剂量效果最好。雏鹅在7、14日龄或14、21日龄作2次免疫和7、14、21日龄作3次免疫,首免后抗体上升速度快,各检测点抗体水平均值相近,均在首免后3周达到4 log2以上,4~5周达6 log2以上,4~7周的抗体水平均高于14日龄1次免疫组,且提前2周达到4 log2以上,说明2次、3次免疫组的抗体水平高于1次免疫组,而2次与3次免疫组的抗体水平无明显差异。以上结果说明,在肉鹅生产的禽流感免疫中,选择以14日龄首免0.5 m l/只,21日龄2免接种1 m l/只可取得较为理想的免疫效果。     

禽流感灭活疫苗H5N2 D7株与H5N1 Re-6株对鸭的免疫效果研究

为评价禽流感灭活疫苗(H5N2亚型,D7株)和重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-6株)对鸭的免疫效果,根据兽医流行病学中利用比较率判断疫苗应用效果的样本量计算方法,得出所需的最小样本量;以田间试验的方式,常规养殖白鸭300只、番鸭240只,并对其进行随机分组;按程序免疫,从10日龄首免后2周开始,每周采集血清测定抗体效价,直至出栏(白鸭45日龄、番鸭66日龄)。结果显示,10日龄白鸭和番鸭的母源抗体分别为3.02 log2和0 log2,需进一步开展研究,以确定最佳首免时间。首免后2周,无论是白鸭还是番鸭,H5N2 D7株疫苗组抗体HI效价和抗体合格率均高于H5N1 Re-6株疫苗组;首免后3~5周,两种疫苗对白鸭和番鸭的HI效价均4 log2,抗体合格率均≥70%。二免后1周至出栏,两种疫苗对白鸭和番鸭均产生较好的免疫效果,HI效价均7 log2,抗体合格率均80%。是否采用对应亚型的血凝抑制抗原对抗体的检测结果有较大影响。研究表明:免疫两种疫苗后均能产生较好的免疫抗体,但相对而言,H5N2 D7株疫苗较H5N1Re-6株疫苗更适合于鸭的免疫;在鸭等水禽中推广使用该疫苗将能更有效地防控高致病性禽流感。     

肉用种鸽高致病性禽流感免疫效果试验

通过对后备种肉鸽、生产种肉鸽采用相同剂量、不同免疫途径接种高致病性禽流感H5N1灭活疫苗,每隔14 d检测1次,观察其免疫抗体滴度变化.试验结果表明:皮下注射的免疫抗体滴度优于肌肉注射,而且一免后的14 d抗体滴度达到高峰,至试验阶段结束时免疫抗体滴度仍然维持4.3log2以上,超过4log2的抗体水平要求.因此,鸽群免疫禽流感H5N1灭活疫苗是可行、有效的     

土杂鸡免疫一次和二次禽流感H5灭活苗免疫效果对比试验

按程序、规范接种的蛋鸡在免疫保护期内其禽流感免疫抗体水平较高且抗体效价整齐。土杂鸡的抗体水平免疫21 d后抗体滴度合格率仅为30%。为提高土杂鸡禽流感免疫抗体合格率,进行了一次免疫和二次免疫效果的对比试验,结果显示:土杂鸡二次免疫禽流感H5灭活苗后,免疫抗体水平显著提高,合格率达90%。试验用的两个不同厂家的禽流感H5灭活苗的免疫效果区别不大。蛋鸡三次免疫后免疫抗体合格率达95%,且抗体效价高而整齐。     

不同免疫剂量与次数对蛋鸡禽流感抗体效价的影响

为探讨新型禽流感病毒三价灭活疫苗（H5N6 H5-Re13株+H5N8 H5-Re14株+H7N9 H7-Re4株）对蛋鸡的免疫效果,研究不同免疫剂量与次数对抗体滴度的影响。将160羽35日龄海兰褐蛋鸡随机分为四组,即单次免疫组（Ⅰ组、Ⅱ组）和两次免疫组（Ⅲ组、Ⅳ组）。其中,Ⅰ组接种0.5 mL疫苗,Ⅱ组接种1.0 m L疫苗,Ⅲ组首免和二免各接种0.5 m L疫苗,Ⅳ组首免接种0.5 mL疫苗,二免接种1.0 mL疫苗。在首免接种后的第21 d、90 d、150 d、180 d测定血液抗体滴度。结果表明：免疫接种21 d后,Ⅳ组的3种抗体滴度均达7.9log2以上,合格率达95%以上,两次免疫组（Ⅲ组、Ⅳ组）的抗体保护期达180 d以上,Ⅲ组与Ⅳ组差异不显著。     

白鸭禽流感H5亚型疫苗免疫促进剂的筛选

选用禽源干扰素、黄芪多糖、人参皂苷、禽用抗菌肽、蜂灵散和植物血细胞凝集素分别按常用剂量单一及两两组合在接种疫苗前后3d连续喂服3次,对14d首免(0.3mL/只)、21d二免(0.6mL/只)禽流感H5亚型疫苗的白鸭进行免疫促进试验。结果显示,各免疫组雏鸭H5AI HI抗体于第6周龄达到峰值,单独作用组分别为8.0log2、7.3log2、7.73log2、9.0log2、9.18log2、9.0log2,免疫对照组为7.75log2。两两组合作用组抗体在6～7周龄达到峰值的7.3log2～9.6log2,其中干扰素+蜂灵散组、干扰素+黄芪多糖组、人参皂苷+抗菌肽组抗体峰值比单用组高1log2～2log2,高于免疫对照组峰值近2个滴度(9.64∶7.75)。试验结果表明,单一促免试验,以蜂灵散、抗菌肽、血凝素三种免疫促进效果最好,高于免疫对照组1个滴度以上。组合免促,以干扰素+蜂灵散效果最好,植物血凝素、蜂灵散单一免促组与之相近。试验初步筛选出了效果较为明显的雏鸭禽流感疫苗免疫促进剂,为以后的进一步研究及应用奠定了基础。