基因芯片方法检测6种动物源性人兽共患病病原

为了建立可同时检测H5亚型禽流感病毒、狂犬病病毒、猪链球菌2型、炭疽芽孢杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157的基因芯片检测方法,本实验根据GenBank中上述6种病原的基因序列,设计并合成了特异性的引物和探针.采用点样法制备杂交芯片,将上述病原扩增产物混合后与芯片杂交.杂交结果显示,针对本试验中6种人兽共患传染病所设计的寡核苷酸探针可特异性识别靶基因,与其他常见病原体之间没有交叉反应.检测的灵敏度在1.38×10-5pg/μL～151 pg/μL之间.将建立的基因芯片检测方法对临床样品进行检测,结果与荧光PCR方法一致.     

宠物传播的人兽共患病

人兽共患病就是既能感染人类，又能感染动物的传染病和寄生虫病。截至目前，全世界共发现人兽共患病439种，国内发现的人兽共患病也多达196种。随着人类文明进程的发展和生活水平的不断提高，人类与动物的关系越来越密切，许多人将各种小动物(包括鸟类)作为宠物饲养与观赏，这无疑增加了许多人兽共患病由动物传播给人类的机会，也包括由人传播给动物，进而扩大蔓延的可能性。因此，在饲养宠物的同时，应高度重视和预防人兽共患病的发生及扩散。     

人兽共患病病原对人感染的预防措施

人兽共患病严重影响人类健康,越来越受到社会各方面的高度重视,加强人兽共患病的防治很有必要.人兽共患病多在普通人群、特别是文化层次较低的农村及与畜禽密切接触者中感染.因此,人兽共患病除了在病原学、免疫学、流行病学、检测技术、疫苗等方面进行研究外,还需要在普通人群中加强人兽共患病的防范宣传,建议不吃生肉、半熟肉及生的动物产品;生熟食、菜板、刀具要分开使用;农村要建卫生厕所,人粪经发酵处理后再施肥;畜禽养殖人员、兽医人员、屠宰人员要注意自身防护;被犬(不管是否病犬)咬伤,均需进行紧急免疫预防注射.     

食源性人兽共患病病原活菌检测技术研究进展

食源性人兽共患病已成为威胁人类健康、食品安全和畜牧业发展的重要因素,因此发展快速、准确、高效的人兽共患病病原活菌检测技术非常必要。目前已有多种针对活菌的检测方法。本文比较分析了目前正在使用或开发的人兽共患病病原活菌检测技术。同时,利用PMA-q PCR检测技术,进行了副溶血性弧菌检测效果验证,认为该检测技术兼具检测速度快、灵敏度高、特异性强、成本低等优点,作为一种新型的活菌快速检测技术,具有广阔的应用前景。另外,一种新型的铂化合物检测技术也被证明可用于活菌检测。     

人兽共患病的诊断方法论述

本文从人兽共患病的概念、构成要素、分类、危害、流行特征及诊断方法等方面,阐述了对人兽共患病要及时进行诊断,采取积极有效的防控措施,迅速扑灭疫情,保证人体健康和畜牧业健康持续稳定发展。     

一种条件性人兽共患病原-艰难梭状芽孢杆菌

艰难梭状芽孢杆菌(Clostridiumdiffi-cile,Cd)于1953年由Hall和OToole从新生儿的粪便中分离出来,并证明约有40%的人为带菌者。由于该菌培养极其困难而得名,同时也影响了对其进行深入研究,直到1978年后,George和Bartlett等人采用了特殊的培养基,使该菌分离培养的成功率大大提高,     

人兽共患病的综合防控措施

SARS、禽流感的恐慌渐渐远去,近期人兽共患病又有抬头趋势,布鲁杆菌病、炭疽病的死灰复燃,给我们敲响了警钟,人类与疾病的斗争从来没有停止,我们要时刻提醒自己,任何时候都不能忽视人兽共患病的存在,并与之斗争到底。     

与水生动物病原体感染有关的人兽共患病

人兽共患病是传染病中的一大类,此类疾病有时也称为动物源性传染病;因此,一般认为人兽共患病也包括由水生动物病原体感染引起的人类疾病.虽然由水生动物病原体感染引起的人类疾病比较少,但是却存在巨大的潜在危害性,本文将详细论述水生动物病原体引起的人兽共患病.     

犬猫常见的人兽共患病

本文对犬和猫的人兽共患病进行了分类、统计,并通过对各个疾病的临床症状和传播途径的分析总结,阐述其在公共卫生领域中的重要地位和意义.加强了大众对犬猫人兽共患病的认识和为公共卫生政策的制定提供依据和参考.     

3种实验动物相关病原液相芯片检测方法的建立

为建立快速高通量检测实验动物质量相关布鲁菌、沙门菌、弓形虫3种病原体的方法,根据其序列设计引物及探针,探针经修饰后与荧光编码微球偶联,将偶联后的探针与PCR产物杂交反应,通过液相芯片检测仪(Luminex200)检测荧光信号,分析实验动物感染布鲁菌、沙门菌和弓形虫的情况.结果显示:初步建立了可同时检测布鲁菌、沙门菌和弓...     

鹿流行性出血病病毒高通量液相芯片检测方法的建立

为建立可检测鹿流行性出血病病毒(EHDV)的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中EHDV的VP7基因进行序列分析,设计EHDV特异性探针并用生物素标记,与荧光编码微球偶联后与病毒VP7基因的PCR产物杂交反应,用液相芯片检测仪(Liquichip200)检测荧光信号建立了EHDV快速高通量液相芯片检测方法。检测结果显示,该法具有较好的特异性,不与其他虫媒病病毒反应;检测灵敏度为100个TCID50。建立了快速检测EHDV的液相芯片技术,为进一步搭建EHDV快速高通量检测平台奠定了基础。     

液相芯片技术同时检测六种猪繁殖障碍病毒的方法研究

在GenBank中收集猪细小病毒(PPV)结构蛋白VP2基因、猪圆环病毒2型(PCV2)的ORF2序列、猪伪狂犬病毒(PRV)的gB基因、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的NSP2基因、猪瘟病毒(CSFV)的E2基因和乙型脑炎病毒(JEV)的M基因,利用Primer5.0等分子生物学软件对收集的序列分析比较,筛选出上述基因的特异保守序列并设计引物和探针,将设计好的探针与相应的微球偶联,优化条件,建立检测方法。结果表明:建立的检测PPV、PCV2、PRV、PRRSV、CSFV、JEV6种病毒核酸的多重液相芯片技术具有较好的特异性、敏感性和稳定性,对PPV、PCV2、PRV、PRRSV、CSFV、JEV6种病毒核酸的最低检出量分别为8.50×10~2copies/μL、2.87×10~2copies/μL、2.07×10~2copies/μL、2.61×10~2copies/μL、2.34×10~2copies/μL、2.05×10~2copies/μL,与相应病毒PCR/RT-PCR检测方法相比,敏感性提高了100~1000倍;对临床388份样品同步进行荧光PCR与液相芯片检测,结果99.87%相符。本方法为液相芯片技术在动物多病毒快速高通量检测、鉴别诊断等应用方面奠定了基础。     

猪繁殖障碍病毒性疫病六重PCR检测方法的建立及应用

参照GenBank中相关的基因序列,设计了6对引物分别用于扩增PRV gE、PPV NS1、PCV ORF2、PRRSV ORF7、CSFVE2、JEVE基因的部分片段。敏感性和特异性试验结果表明,该mPCR对6种病毒的最低核酸检测量分别为PRV 6.6pg、PPV 96pg、PCV 12.9pg、PRRSV 10.5pg、CSFV 51pg、JEV 46pg,对猪流感病毒(SIV)、大肠杆菌(E.coli)的扩增结果均为阴性。103份临床病料检测结果表明,上述6种猪病毒性疫病在贵州省猪群中普遍存在且混合感染情况严重。该六重PCR方法不仅实现了上述6种病毒的同时检测,更实现了DNA病毒及RNA病毒的同步检测,能够对PRV、PPV、PCV、PRRSV、CSFV、JEV单个或混合感染的临床病料进行快速鉴别诊断。     

Susceptibility of Six Bacterial Pathogens of Channel Catfish to Six Antibiotics

Abstract

Two hundred eight bacterial isolates from diseased channel catfish Ictalurus punctatus were screened for susceptibility to apramycin, enrofloxacin, cephalothin, oxytetracycline, sulfadimethoxine-ormetoprim, and tilmicosin by the Kirby-Bauer disk diffusion method. Bacteria evaluated were Edwardsiella ictaluri, E. tarda, Aeromonas sp., A. hydrophila, A. sobria, and Pseudomonas sp. All bacteria were most susceptible to enrofloxacin (99.0%) and apramycin (97.6%), but only 86.5% were susceptible to sulfadimethoxine-ormetoprim, 84.1%o to oxytetracycline, and 75.5% to cephalothin. Edwardsiella ictaluri, E. tarda, A. hydrophila, and A. sobria were 100% susceptible to enrofloxacin. Aeromonas sp., E. ictaluri and E. tarda were 100% susceptible to apramycin. Resistance was detected in all bacterial species to cephalothin, oxytetracycline, sulfadimethoxine-ormetoprim, and tilmicosin. Testing E. ictaluri against sulfadimethoxine-ormetoprim gave larger zones of inhibition on Mueller-Hinton medium than on brain-heart infusion agar.     

奶牛乳房炎常见致病菌多重PCR检测方法的建立

为建立同时快速检测奶牛奶样中无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌和金黄色葡萄球菌的方法,根据无乳链球菌sip基因、停乳链球菌isp基因、乳房链球菌pauA基因和金黄色葡萄球菌nuc基因各设计1对特异性引物,建立多重PCR检测体系。结果显示,该检测方法具有高特异性,无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌和金黄色葡萄球菌敏感性分别为105、104、105、105 CFU/mL。对临床采集的460份奶样检测结果表明,建立的多重PCR体系可以用于临床上无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌和金黄色葡萄球菌感染引起的奶牛乳房炎的检测。     

基于CRISPR-Cas系统的病原体检测研究进展

开发快速、灵敏、特异的检测方法对于新发突发人兽共患病、动物疫病的监测及防控至关重要。规律成簇的间隔短回文重复序列及相关蛋白(CRISPR-Cas)系统以高敏感性、特异性及可扩展性的DNA和RNA识别为特点,已成为新一代的分子诊断工具,在病原体快速检测技术研发中得到广泛应用。在新型冠状病毒肺炎疫情中,基于CRISPR-Cas系统开发的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)检测试剂盒(SHERLOCK和DETECTR)在美国相继获批,中国研发的基于CRISPR-Cas12系统的SARS-CoV-2检测试剂盒也已获批上市,这表明基于CRISPR-Cas系统的病原体检测方法在未来的应用前景非常可观。文章首先简述了CRISPR-Cas系统类型,尤其是常用于病原体检测的Cas9、Cas12和Cas13;介绍了CRISPR-Cas系统的作用机理以及广泛应用。同时分析了CRISPR-Cas检测平台研发的关键技术问题,包括靶标基因的序列保守性、靶标基因的富集与扩增、终信号不同的读取方式等,并对CRISPR-Cas系统的未来发展及应用前景进行了展望。     

单重PCR鉴别犬4种布鲁氏菌检测方法的建立

为建立适合犬布鲁氏菌病临床检测的单重PCR方法,通过对比粗糙型（犬种）与光滑型（羊种、牛种和猪种）布鲁氏菌基因组DNA的序列差异,设计1对引物并优化反应条件,建立了可初步鉴别犬4种布鲁氏菌的PCR方法,然后对该方法的特异性和灵敏度进行评价,并对20份犬布鲁氏菌血清学阳性的血液样品进行临床检测。结果显示,利用建立的PCR反应体系对牛种、羊种和猪种布鲁氏菌均能扩增出717 bp的目的条带,对犬种布鲁氏菌能扩增出366 bp的目的条带;最低可检测到犬种、羊种、猪种和牛种布鲁氏菌基因组DNA浓度分别为5.07×10-2、6.20×10-2、7.80×10-3和5.50×10-2 ng/μL;20份血液样品中共检测到3份犬种布鲁氏菌阳性样品,与使用GB/T 18646—2018引物的PCR检测结果一致。结果表明,本试验建立的单重PCR方法简捷、特异、敏感,适合基层兽医实验室对犬布鲁氏菌病的检测与鉴定。     

食品中致病菌的检测方法研究进展

十三五时期,食品安全问题受到了普遍关注与各级政府的重视。其中,食源性致病菌是食品卫生问题的主要源头,对其进行早期及时检测,可以有效预防疾病发生和准确诊断,具有十分重要的意义。目前的检测方法主要包括免疫学检测技术、分子生物学检测技术、生物传感器检测技术、代谢学检测技术、噬菌体识别检测技术等。本文总结了食源性致病菌检测方法的研究现状,虽然检测水平得到了显著的提升,但均存在一定程度的不足,仍需不断改进。