鸡传染性法氏囊病分子流行病学研究

15个江苏省IBDV分离株，对其VP2高变区进行RT-PCR扩增、测序，得到约560bp长的片段。分析比较15个IBDV分离株与参考毒株的VP2高变区(AccI-SpeI)推断的氨基酸序列，构建进化树。氨基酸序列分析以及进化树分析表明，15个IBDV分离株是超强毒株。而且目前vvIBDVs在亚洲各个国家流行，且与欧洲国家的vvIBDVs的进化关系很近。     

鸡传染性法氏囊病分子流行病学研究

15个江苏省IBDV分离株,对其VP2高变区进行RT-PCR扩增、测序,得到约560bp长的片段。分析比较15个IBDV分离株与参考毒株的VP2高变区(AccI-SpeI)推断的氨基酸序列,构建进化树。氨基酸序列分析以及进化树分析表明,15个IBDV分离株是超强毒株。而且目前vvIBDVs在亚洲各个国家流行,且与欧洲国家的vvIBDVs的进化关系很近。     

禽副粘病毒2型标准株和国内分离株的透射电镜及免疫电镜观察

将禽副粘病毒2型的标准毒株Yucaipa病毒和国内分离株F4、F6和F8株分别接种SPF鸡胚，收获鸡胚尿囊液；经差速离心和蔗糖密度梯度离心后，分别制备电镜样品和免疫电镜样品；经10g/L醋酸双氧铀负染后电镜观察病毒粒子形态。电镜下病毒粒子大小差别较大，形态呈圆形成椭圆型，直径150－300nm，有结构致密的基质蛋白膜，有的囊膜外可见纤突。免疫电镜样品中毒病明显集中，便于观察。     

传染性法氏囊病病毒变异株弱毒的培育

传染性法氏囊病病毒３个变异野毒株ＪＤ１、ＪＤ２、ＨＢ）和２个经验血清型１毒株、ＳＣ）直接在鸡胚成纤维细胞上传代,均能不同程度地产生细胞病毒效应（ＣＰＥ）。将５个毒株２１代细胞毒连续回归鸡体５代,除ＪＤ１外,其余毒株均能不同程度导致法氏囊病谱。ＨＺ１４１、ＪＤ１３６、ＳＣ３８、ＪＤ２３７、ＮＢ３８代细胞毒在鸡体内回归５代,均未见法氏囊的眼观病变和组织学变化,囊指数保持稳定,说明ＨＺ１、ＳＣ、ＪＤ１、     

猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法RT-PCR检测方法的建立及应用

为解决当前猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株类型复杂、各毒株之间交叉免疫保护不佳的现状,本研究针对NSP2基因保守区域设计1对特异性引物,通过条件优化,建立一种能够快速区分经典株、高致病性毒株和NADC30-like毒株的检测方法。该方法与CSFV、PCV2、PRV、PEDV、TGEV无交叉反应。对不同毒株类型进行检测,结果显示该方法特异性强,能够将经典株、高致病性猪蓝耳病毒株和类NADC30株进行快速区分,为猪群快速区分PRRSV感染类型及疫苗的选择、使用提供科学防控依据。     

PCR检测炭疽杆菌的研究

以无毒炭疽芽孢苗(steme菌株)、Ⅱ号炭疽芽孢苗(pasteurⅡ菌株)、A16R菌苗(steme菌株)为试验茵，建立了检测炭疽芽孢杆菌质粒DNA的PCR方法。该方法特异性强，敏感性可达1131个菌／ml(无毒炭疽芽孢菌菌株)和1720个菌／ml(Ⅱ号炭疽芽孢菌菌株)。同时建立了可区分炭疽杆菌强、弱毒的多重PCR方法。     

IBDV不同分离株VP2高变区的基因序列分析

对9个IBDV(传染性法氏囊病毒)分离株的、VP2高变区进行RT-PCR扩增、测序，得到约560bp长的片段分析比较9个IBDV分离株与参考毒株的VP2高变区（Aeel-Spell)的氨基酸序列，并构建进化树、结果表明，9个IBDV分离株是超强毒株，并且得出亚洲目前流行的、rvIBDVs与欧洲国家的vvIBDVs的进化关系很近。     

鉴别猪流行性腹泻疫苗毒株与野毒株巢式PCR检测方法的建立及初步应用

根据Gen Bank中猪流行性腹泻病毒(PEDV)的基因序列分别设计两对引物,在完成最佳条件筛选、特异性、敏感性试验的基础上,建立一种快速区分PEDV疫苗毒株与野毒株的巢式PCR检测方法。建立的PCR快速检测方法能分别对PEDV疫苗毒株和野毒株扩增出特异性片段,片段大小分别为774 bp、150bp。该方法对传染性胃肠炎病毒(TGEV)、轮状病毒(Po RV)、猪瘟病毒(HCV)、伪狂犬病病毒(PRV)则不能扩增出特异性片段。该方法具有快速、灵敏、特异、通用等特点,可用于实验室的快速诊断、分子流行病学的调查和野毒株的分离鉴定。     

鉴别PRRSV经典、高致病性和类NADC30毒株PCR方法的建立及初步应用

为了建立鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory virus,PRRSV)经典毒株、高致病性毒株与类NADC30毒株的快速检测方法,根据不同毒株的ORFla核苷酸序列,设计并合成PRRSV特异性引物.经过引物筛选以及对退火温度、引物浓度的优化,建立了应用1对引...     

隐性感染弓形虫小鼠体抗体消长的观察

近年来,已从人和某些动物分离出许多不同毒力的弓形虫株。目前确认能形成包囊的弓形虫弱毒株,国内仅有2株:江苏省南通县猪体内分离到的NT株和青海省互助县绵羊体内分离到的QHO株。由于弓形虫包囊弱毒株在传播弓形虫病上比强毒株更具有重要作用,因而对它的研究(包括免疫学特性)具有特殊的意义。本实验对小鼠人工感染包囊弱毒株(NT株)弓形虫后抗体出现和消长的情况进行了观察。 1.弓形虫虫株:制备弓形虫直接凝集试验(DAT)抗原的虫株,系国际标准的强毒株-RH株;隐性感染小鼠的虫株,系国内包囊弱毒株-NT株。 2.实验动物:本所动物房自行繁殖的昆     

鸡新城疫流行毒株与标准毒株的交叉免疫保护试验

用新城疫(ND)分离强毒油佐剂灭活苗和NDV La Sota油佐剂灭活苗分别免疫母源抗体平均为2 log2的12日龄公雏。免疫后每隔1周采集血清，用微量血凝抑制试验检测HI抗体。免疫后21 d抗体水平达到峰值，抗体水平在6log2以上，维持30 d以上。免疫40 d后，用ND分离强毒株和NDVF48E9分别进行攻毒试验，2种疫苗的保护率均为100％，攻毒结果表明，ND分离强毒株和NDVF48E9株的免疫原性差异不显著。     

艾美耳球虫双重致弱株与强毒株遗传特性的比较研究

鸡球虫病的免疫预防是目前的研究热点。由于强毒苗的使用有其危险性，各国的研究人员都试图研制弱毒苗[1]。经典的减低球虫毒力的方法有2种：一种由Long[2]提出，做法是使球虫适应鸡胚，并通过鸡胚传代。另一种由Jeffers[3]提出，即早熟株的选育。也有报道将二者结合[4]，通过鸡胚选育早熟株。本实验室则以化学诱变剂环磷酸胺（CP）和物理诱变因素紫外线照射对艾美耳球虫卵囊（E．tenella、E．necatrix、E．maxima）进行双重致弱，以期达到减低毒力的目的。通过对3种艾美耳球虫强毒株与双重致弱株遗传特性包括卵囊的形态特征、内生性发育…     

多重聚合酶链反应快速检测鉴别鸡毒支原体强毒株和弱毒疫苗株的研究

根据鸡毒支原体强毒株和弱毒疫苗株基因组的结构特点，设计合成了二对引物XZ1，XZ2和XZ45、XZ46，建立了一种同时检测鉴别MG野毒株和弱毒疫苗株的多重PCR技术。试验结果表明，用这两对引物对MG强毒株和弱毒疫苗侏进行多重PCR，强毒株只扩增出732bp一条带，而弱毒疫苗株则可同时扩增出732bp、524bp二条带，而对其他种类鸡支原体和其它禽病病原的扩增不出现任何条带，结果均为阴性；敏感性测定结果表明，该多重PCR最低能检出1Pg的MG强毒株和弱毒疫苗株的DNA模板。     

新城疫病毒山东强毒株的分离鉴定

从山东流行烈性传染病的鸡群中分离出7株具有血凝活性的病毒，该7株病毒的血凝活性均能被新城疫La Sota株标准阳性血清所抑制，但病毒不能被中和，仍能致死鸡胚。经分离鉴定，分离毒均为新成疫病毒株。通过鸡胚半致死量（ELD50）、最小致死量致鸡胚的平均时间（MDT）、1日龄雏鸡脑内致死指数（ICPI）、6周龄雏鸡静脉致死指数（IVPI）、血凝解脱及血凝素稳定性等试验表明：7株分离病毒均为新城疫病毒强毒性，其毒力与标准强毒株F48E9株相似。     

标记基因型猪繁殖与呼吸综合征重组病毒活疫苗的特点及应用关键技术施

蓝耳病是困扰全球养猪业的主要疾病之一。我国猪场蓝耳病病毒流行和毒株多样性更为复杂。市场上蓝耳疫苗的毒株多种多样,但是传统疫苗存在对不同毒株交叉保护力差,毒力返强等缺点。新型标记型基因工程蓝耳活疫苗(PC株),商品名为蓝立优,是通过反向遗传操作将蓝耳病毒经典毒株和高致病性毒株进行整合而成。试验室和田间试验证实,蓝立优对经典毒株和高致病性毒株均有保护力,同时可以改善由NADC30-like毒株造成的感染,提高生产成绩。另外,全国20余个猪场,7万多头猪只进行的田间应用显示,蓝立优有很好的安全性。科学的饲养管理有利于蓝耳病的防控。蓝立优是一个即安全又有效的新型标记基因型蓝耳活疫苗。     

新城疫病毒分子生物学致病性分析──用抗病毒膜蛋白特异结构多肽抗体进行强弱毒株鉴别

用抗新城疫病毒特异结构多防免疫印渍法，对Muktdswat、HitchnerB1、Lasota、V4和国内两个分离株（NDC、G）进行毒为分析，结果表明该方法可区别上述强弱毒力株，其毒力强弱顺序为:Mukteswar＞HitchnerB1和Lasota＞V4＞NDC。证明该方法在新城疫病毒强弱毒力株的鉴别上特异性强、准确性高，可为NDV的基础研究和流行病学调查提供可靠的理论依据。