乙酰胆碱对栉孔扇贝血淋巴中过氧化物酶活性和一氧化氮含量的影响

栉孔扇贝的血淋巴在不同质量浓度的乙酰胆碱作用下于体外孵育3h,测定栉孔扇贝的血清、血细胞中依赖卤素的髓性过氧化物酶、不依赖卤素的髓性过氧化物酶和一氧化氮活性的活力变化。结果表明,乙酰胆碱对于这两种酶和一氧化氮均有一定的影响,髓性过氧化物酶和一氧化氮活性大部分均为先升后降。据此,乙酰胆碱对栉孔扇贝血淋巴中的几种氧化酶有一定的作用。     

病毒感染对栉孔扇贝血淋巴中过氧化氢酶和过氧化物酶活力的影响

用从病贝体内分离的非包涵体球形病毒感染栉孔扇贝,采用分光光度技术,分别于6,24,72h,测定栉孔扇贝血清和血细胞中过氧化氢酶(CAT)活力和过氧化物酶(POD)活力。结果表明,感染病毒后,血清中CAT活力在6,24,72h时,实验组均高于对照组,6h时差异极显著,24h时差异显著,72h时差异不显著;血细胞中CAT活力在6,24,72h时,实验组均高于对照组,6h和24h时差异极显著,72h时差异不显著。血清和血细胞中POD活力在6h和24h时,实验组均高于对照组,且均差异极显著。说明病毒感染后栉孔扇贝血淋巴中CAT和POD的活力增强。     

栉孔扇贝血淋巴中酯酶活性及其性质

采用紫外分光光度法测定栉孔扇贝（Chlamysfarreri）血淋巴中酯酶的活性，并研究底物、抑制剂、激活剂、温度、pH对酯酶活力的影响及酶的热稳定性。结果表明，栉孔扇贝血清与血细胞中均存在酯酶，且血细胞中的酶活力高于血清。血清与血细胞中酯酶的最适作用底物有所不同，血清中为α-醋酸萘酯，而血细胞中为α-丁酸萘酯。当以α-醋酸萘酯为底物时，血清中酯酶的最适温度为45℃，最适pH值为7．5；以α-丁酸萘酯为底物时，血清中酯酶的最适温度为40℃，最适pH值为8．0。以α-醋酸萘酯及α-丁酸萘酯为底物分别测定酶的热稳定时，酶活力变化相似，在20℃时活力最高，而后缓慢下降。栉孔扇贝血淋巴中酯酶属中温型中性酶类，低温下较稳定，底物专一性不强，血清中的酯酶可能来自血细胞，该酶在贝类的免疫防御中町发挥重要的作用。     

氨氮对栉孔扇贝血淋巴活性氧含量和抗氧化酶活性的影响

实验测定了不同浓度氨氮胁迫下栉孔扇贝(Chlamys farreri)血淋巴中胞内胞外活性氧自由基(ROIs)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性的变化。结果表明，在较低浓度氨氮胁迫下，胞内胞外活性氧含量都随氨氮浓度升高而增加，当浓度继续增加到20～40mg／L时，胞内外活性氧含量都明显下降且低于对照组；不同氨氮浓度下两种酶活性也不同，当氨氮浓度为1．25～20mg／L时，CAT活性随氨氮浓度增加而升高，当浓度增大到40mg／L时，CAT活性明显下降且低于对照组；当氨氮浓度为1．25～5mg／L时，SOD活性随氨氮浓度增加而升高，而当浓度为10～40mg／L时，酶活性显著下降。实验结果说明，适当的氨氮刺激可增加胞内外活性氧的含量，增强扇贝的两种抗氧化酶活性，但较高浓度氨氮则使胞内外活性氧的含量显著下降并明显抑制抗氧化酶的活性。     

栉孔扇贝鳃和唇瓣过氧化物酶活性

采用组织化学、电镜细胞化学和分光光度技术对栉孔扇贝(Chlamys farreri)鳃和唇瓣内的过氧化物酶(EC1.11.1.7;POD)进行研究,以探讨扇贝的鳃和唇瓣在免疫防御中的作用。组织化学显示,鳃轴、鳃丝和唇瓣上皮细胞均呈POD强阳性,结缔组织呈弱阳性;病毒感染后酶活力逐步增强。电镜细胞化学定位表明,鳃和唇瓣上皮细胞内有数量和大小不等的POD强阳性颗粒,阳性颗粒多为圆形,直径为150-220 nm;次级溶酶体也呈POD强阳性;内质网和空泡膜等细胞内膜系统以及细胞表面的微绒毛和纤毛呈POD弱阳性。结缔组织中部分血细胞呈POD强阳性。鳃轴上皮细胞内POD高电子密度阳性颗粒较少,而低电子密度阳性颗粒较多;主鳃丝上皮细胞内POD阳性颗粒较少,普通鳃丝上皮细胞内POD高电子致密阳性颗粒和呈POD强阳性的次级溶酶体均较多;唇瓣上皮细胞内POD阳性颗粒较鳃的略少。生化测定显示,鳃轴的POD酶活力最高,鳃丝次之,唇瓣最低;病毒感染24 h后,各部分的酶活力均显著增强。栉孔扇贝鳃和唇瓣内大量的POD可在抵抗病原微生物感染方面发挥重要的作用。     

栉孔扇贝血淋巴中酚氧化酶和髓过氧物酶活性↑（*）

用电镜细胞化学和分光光度技术对栉孔扇贝血淋巴中的氧化酶（ＰＯ）和髓过氧物酶（ＭＰＯ）进行了研究。结果表明：细胞质中直径分别为３００～４３０ｎｍ和１３０～２００ｎｍ的大、小２种颗粒呈ＰＯ强阳性,次级溶酶体和小颗粒呈ＭＰＯ强阳性。生化血清中存在ＰＯ和ＭＰＯ活性,血细胞仅有ＭＰＯ活性。以ＴＭＢ为底物测得血清中不依赖卤素的ＭＰＯ活力为１０７．２Ｕ,以二乙醇胺为底物测得血清中依赖卤素的ＴＭＢ为底物测得血清中     

人工养殖栉孔扇贝和海湾扇贝血淋巴中部分免疫因子的比较研究

采用分光光度技术对人工养殖的栉孔扇贝和海湾扇贝血淋巴中部分免疫因子进行了比较研究。结果表明,海湾扇贝血清和血细胞中溶菌酶、非特异性酯酶(NSE)、过氧化氢酶(CAT)、髓性过氧化物酶(MPO)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、活性氧和H2O2的活力或含量均高于栉孔扇贝,两种扇贝除血清中MPO活力差异不显著外,其他各组均差异极显著或显著。表明人工养殖海湾扇贝较栉孔扇贝的免疫力强。     

栉孔扇贝神经节一氧化氮合酶的组织化学和免疫组化定位

采用组织化学和免疫组化技术对栉孔扇贝(Chlamys farreri)神经节内的一氧化氮合酶(NOS)进行定位研究。组织化学显示,存在NOS的部位如下：脑神经节内纵行的神经纤维和表层的少量小细胞;足神经节表层的大量小细胞,中央大量水平分布的神经纤维;脏神经节中部大量水平分布的神经纤维,前叶内大量小细胞和神经纤维,后叶内少量小细胞和许多环行神经纤维,侧叶内大量似放射状分布的神经纤维;脑足和脑脏神经索内的神经纤维。免疫组化定位表明,神经型一氧化氮合酶(nNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在整个神经系统内均呈阴性;足神经节和脏神经节内有少量神经细胞呈内皮型一氧化氮合酶(eNOS)强阳性;各神经节和神经索内的部分小细胞和神经纤维呈eNOS弱阳性。栉孔扇贝进化上为较低等的贝类,NOS阳性神经细胞应主要分布于外周器官组织内。神经系统内大量的NOS可在其神经传导和免疫调节等方面发挥重要的作用。     

栉孔扇贝血淋巴中ACP和AKP活性及其电镜细胞化学研究↑（*）

用电镜细胞化学和分光光度技术对栉孔扇贝血淋巴中的酸性磷酸酶（ＡＣＰ） 和碱性磷酸酶（ＡＫＰ） 的研究结果表明,溶酶体呈强的ＡＣＰ 阳性;ＡＫＰ 阳性颗粒常沿细胞膜分布;部分细胞ＡＣＰ 阳性颗粒较多,且靠近细胞膜,胞浆中也有分布。生化测定结果表明,血细胞和血清中均存在ＡＣＰ和ＡＫＰ 活性,且血清中的２ 种酶的酶活力均高于血细胞中,血清中ＡＣＰ和ＡＫＰ 的最适ｐＨ 分别为４ ．４ 和１０ ．３ ,最适温度分别为３５ ℃和５５ ℃。     

浒苔多糖对华贵栉孔扇贝血淋巴中SOD酶和溶菌酶活性的影响

于华贵栉孔扇贝体内注射了0.1%,0.25%,0.5%3个不同浓度的浒苔多糖后,在24,48,72 h分别测定了华贵栉孔扇贝血淋巴中SOD酶和溶菌酶活力。结果表明:0.1%和0.25%实验组扇贝血淋巴中SOD酶活仅在注射24h后显著地高于对照组(P<0.05),而0.5%实验组在注射24 h后极显著高于对照组(P<0.01),而且在注射48h和72 h后仍显著高于对照组(P<0.05);0.1%实验组对扇贝血淋巴中溶菌酶的作用无显著影响,而0.25%和0.5%实验组对扇贝血淋巴中溶菌酶活力在不同测定时间都表现出明显的促进作用,其中0.5%实验组对血细胞中溶菌酶作用效果极显著(P<0.01);说明浒苔多糖具有增强华贵栉孔扇贝免疫活性的作用。     

甲硫氨酸脑啡肽对栉孔扇贝血细胞吞噬和包囊化作用的影响

用荧光显微技术研究了甲硫氨酸脑啡肽对栉孔扇贝血细胞在体外的吞噬作用和包囊化作用的影响进行了研究。结果表明,脑啡肽质量浓度为50μg／ml时血细胞的吞噬率和包囊化率均最低,25μg／ml时次之,5μg／ml时最高,并且均显著高于不加脑啡肽的对照组。质量浓度为5—50μg／m1脑啡肽对栉孔扇贝血细胞的吞噬作用和包囊化作用均有抑制作用,即脑啡肽在栉孔扇贝的免疫调节中起重要的作用。     

栉孔扇贝亲贝室外饲养试验

在室外塑料大棚中以自然（接种）繁殖方法，使饵料生物的总密度超过６万个细胞／ｍｌ；饲养栉孔扇贝亲贝３０天，亲贝的成活率在９６％以上，性腺成熟并产卵，亲贝的各项生物指标均明显好于自然海区。     

大连黑岛海域筏式养殖试验

2003～2004年6-7月投放2．5～3．0cm的栉孔扇贝苗种,养殖约5个月,12月份收获时平均壳高6．0cm以上,成活率90％,出柱率14％。2003年养殖10台筏,当年投资当年见利。2004年新增加了90台筏,当年基本收回投资。     

硫酸铜对栉孔扇贝急性毒性胁迫研究

探讨了硫酸铜对栉孔扇贝的24、48、72、96 h的毒性,并计算出硫酸铜对栉孔扇贝的24、48、72、96 h的半致死质量浓度(LC50)分别为(0.32±0.099)mg/L、(0.112±0.022)mg/L、(0.074±0.005)mg/L、(0.063±0.005)mg/L,安全质量浓度为0.012 mg/L...     

栉孔扇贝夏季大规模死亡的神经网络（ANN）预测模型

根据2002和2003年对山东荣成桑沟湾栉孔扇贝养殖海区的水温、盐度、pH、氨氮浓度、亚硝氮浓度等环境因子和扇贝血清中的蛋白浓度、酸性磷酸酶活力、碱性磷酸酶活力、超氧化物歧化酶活力和过氧化氢酶活力等免疫学指标及栉孔扇贝养殖密度和死亡率的监测数据,运用人工神经网络（ANN）的原理和误差反相传播（BP）网络的方法,利用MATLAB软件初步建立养殖栉孔扇贝夏季大规模死亡的BP人工神经网络预测模型。预测模型经过300次的学习训练,误差平方和由67.46下降至0.0091。该预测模型对未参与模型构建的样本预测的结果与实际监测结果的符合率达到87.5％。本研究首次将人工神经网络与水产动物病害死亡的预测相结合,建立的预测模型具有对数据适应能力强,可适时学习,预测结果准确等突出优点,为水产养殖动物病害死亡程度的预测提供了一个新的研究方法。     

栉孔扇贝血清中的免疫因子的研究↑（*）

本文对栉孔扇贝血清的细菌凝集活性、抑菌活性和溶菌活性进行研究。选用２４种细菌和真菌进行凝集试验,发现栉孔扇贝血清能够对金黄色葡萄球菌和代远洋弧菌产生凝集作用,血清的细菌凝集作用经数种细菌刺激没有发生改变,说明这种凝集作用是不可诱导的。栉孔扇贝的血清对某些细菌的生长有一定的抑制作用,但在体外彻底杀灭细菌的效果极差,经大肠杆菌和副溶血弧菌刺激后,抑菌效果基本不变。栉孔扇贝血清还具有一定的溶菌作用,而且大肠杆菌的刺激可以明显提高这种溶菌作用。     

扇贝多肽对氧化所致胸腺细胞凋亡的影响

观察扇贝多肽(Polypeptide from Chlamys ferreri)(PCF)对实验性氧化所致小鼠胸腺细胞凋亡的影响。采用台盼蓝(Trypan Blue)活细胞拒染法在普通光学显微镜下观察细胞的存活率；以四甲基氮唑盐(MTT)法测定细胞的增殖活性；以生化检测(DNA ladder)法观察PCF对细胞DNA片断化的影响；用透射电镜观察细胞的超微形态结构变化。台盼蓝染色法证实PCF能增强细胞的活性并与PCF浓度成正比；MTT法表明PCF不仅能保护细胞免受损伤，而且还能促进细胞的增殖，并有PCF依赖性；生化检测显示PCF能减少细胞凋亡的DNA片断化数目；细胞的超微结构还表明PCF能维持细胞结构的完整性。PCF可明显抑制实验性氧化损伤小鼠胸腺细胞的凋亡并有药物依赖性，而且明显优于维生素C。     

鳗弧菌注射对栉孔扇贝免疫活性的影响

测定了鳗弧菌(Vibrio anguillarum)注射对栉孔扇贝(Chlamys farreri)胞内活性氧(ROS)含量和过氧化氢酶(CAT)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。结果表明,在注射后5、24、48和72h各免疫指标都有明显变化;胞内ROS含量在24、48和72h明显升高,且均高于对照组,形成抛物线趋势,在48h达到最高;血清中CAT活性均有升高趋势;肝脏中ACP活性在24、48和72h与注射生理盐水组相比明显升高;栉孔扇贝体内ALP活性有明显升高的趋势,且在注射后24h活性达到最高,而后有所下降。结果表明,鳗弧菌对栉孔扇贝免疫系统有明显的刺激作用。