不同浓度忧遁草提取物抑制阪崎肠杆菌生长模型的研究

人类感染阪崎肠杆菌(Cronobacter sakazakii)会引起一系列疾病,而忧遁草(Clinacanthus nutans CN)是一种具有消炎抑菌作用的天然药用植物。为了量化评估忧遁草对阪崎肠杆菌的抑制作用,以阪崎肠杆菌为研究对象,探究在阪崎肠杆菌最适生长温度37℃下,不同浓度的忧遁草提取物(25、50、75、100mg/mL)对在BHI中生长的阪崎肠杆菌的影响。结果表明,添加浓度为10%的体系中,忧遁草对延长阪崎肠杆菌的延滞期最长时常为4.116h,阪崎肠杆菌生长速率为1.094,而空白对照组分别为1.253h、1.726。可见,忧遁草对阪崎肠杆菌具有较好的抑制作用,且浓度越高,抑制效果越好。     

辣椒制品中阪崎肠杆菌的检测与鉴定

阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种,在一定条件下可引起人和动物致病。为了加强对食品中有害细菌的监管力度,在对1份辣椒制品实施大肠杆菌常规项目检验的过程中分离出可疑菌株,经分离培养、革兰氏染色、API 20E和全自动VITKE 2生化反应鉴定及实时荧光PCR检测,确定该可疑菌株为阪崎肠杆菌。表明,辣椒制品存在阪崎肠杆菌的污染风险。     

液态奶中阪崎肠杆菌污染状况的调查

[目的]了解某地区液态奶中阪崎肠杆菌的污染情况,为政府加强对液态奶的管理提科学依据。[方法]采用改进方法和PCR法检测液态奶。PCR适宜反应体系为：6μl 10×PCR buffer,4μl dNTPs混合物,2．5Mg^2＋ μl（25mM）,2μl 10μmol正向引物,2山10μmol反向引物,0．25μl（5U／μl）Taq,23．25μl水,总反应体系为50μl;其适宜的PCR扩增程序为：PCR反应采用冷启动,95℃预变性5min;变性95℃ 1min,退火61℃0．5min进行35个循环。PCR反应产物在2％的琼脂糖凝胶中进行电泳,凝胶成像系统观察结果,检出率为2．4％,同时对阪崎肠杆菌的毒力进行了研究,所筛出的4株阪崎肠杆菌均导致受试昆明小鼠死亡。[结果]从167份液态奶样品中检出4株阪崎肠杆菌。     

一种基于TaqMan探针法的阪崎肠杆菌qPCR全自动检测技术体系的建立

[目的]建立快速准确地检测食物样品中食源性致病菌的体系。[方法]配套湖州市微生物制剂与农产品安全重点实验室自主研发的微生物分子检测仪,建立一种基于Taq Man探针法的阪崎肠杆菌q PCR检测体系。[结果]体系建立成功,标准曲线斜率为-3.44,R~2=0.995 5,扩增效率为95.3%。[结论]该q PCR体系特异性强,灵敏度高,明显缩短了检测时间,并具有良好的稳定性与重复性,为食品中阪崎肠杆菌的高通量和自动化检测提供了一个新的途径。     

阪崎克罗诺杆菌中转座子拷贝数实时定量PCR检测方法的建立

[目的]建立检测阪崎克罗诺杆菌中转座子拷贝数的实时定量PCR方法。[方法]以单拷贝持家基因atpD作为内参基因,建立同时含有单拷贝持家基因atpD和EZ-TN5转座子的重组质粒;建立atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测的标准曲线,并利用所建立的标准曲线,对3株阪崎肠杆菌突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子的拷贝数进行检测,并计算其比值。[结果]atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测标准曲线的相关系数分别为0.999和0.998;3株突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子拷贝数比值分别为0.98、1.17与0.91,证明突变株中转座子为单拷贝。[结论]该研究所建立的实时定量PCR方法实用性强,可替代Southern杂交用于不同细菌中EZ-TN5转座子拷贝数的检测。     

化学添加剂对新型重组中性植酸酶稳定性的影响

[目的]为进一步拓展新型重组中性植酸酶的工业应用。[方法]研究海藻糖、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖等糖类及不同的金属离子对其稳定性的影响。[结果]该突变植酸酶的稳定性强烈依赖Ca2+的存在。当CaCl2浓度为0.10 mol/L,90°C加热10 min时,剩余活性约为原来的67.7%。同时,添加糖类对酶稳定性也起到较好的保护作用。当80、85、90°C受热10 min时,海藻糖呈现出最好的保护性能,加入0.8 mol/L左右,可使剩余酶活分别是原来的84.3%、65.5%和48.3%,为未添加时的2.61、4.34和15.00倍。此外,在80℃加热条件下,麦芽糖也表现出较好的保护作用,剩余活性是未添加时的2.51倍。但是,在更高温度下尤其是90℃时,植酸酶的活性几乎完全丧失。[结论]该研究结果可为植酸酶在水产饲料加工中的进一步应用提供参考。     

Establishment of Real-Time Ouantitative PCR Method for Determination of Transposon Copy Number in Cronobacter sakazakii

[目的]建立检测阪崎克罗诺杆菌中转座子拷贝数的实时定量PCR方法.[方法]以单拷贝持家基因atpD作为内参基因,建立同时含有单拷贝持家基因atpD和EZ-TN5转座子的重组质粒;建立atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测的标准曲线,并利用所建立的标准曲线,对3株阪崎肠杆菌突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子的拷贝数进行检测,并计算其比值.[结果]atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测标准曲线的相关系数分别为0.999和0.998;3株突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子拷贝数比值分别为0.98、1.17与0.91,证明突变株中转座子为单拷贝.[结论]该研究所建立的实时定量PCR方法实用性强,可替代Southern杂交用于不同细菌中EZ-TN5转座子拷贝数的检测.     

高温海藻糖合酶释放处理条件及其酶学性质的研究

[目的]对从Bacillus sp.SN02004-01菌所产高温海藻糖合酶产酶特性进行研究。[方法]通过试验研究了菌株细胞的破壁处理工艺及所得细胞海藻糖合酶性质。[结果]以2%甲苯＋0.2%EDTA为破壁试剂,菌体浓度0.05g/ml,温度为35℃,150r/min处理3.0h为最佳处理条件;该细胞酶最适反应pH值7.0,最适反应温度为60℃;Cu2＋、Zn2＋对该酶有抑制作用。[结论]在最佳处理条件下获得最高酶活为54.05u/ml,提高了2倍,说明该酶具有很好的生物反应特性。     

外源海藻糖对干旱胁迫下烟草幼苗抗旱性的影响

[目的]研究外源海藻糖对烟草（Nicotiana tabacum L.）幼苗生长及抗旱性的影响,从而为其在种子加工及包衣方面的应用提供理论依据。[方法]试验通过PEG6000模拟干旱胁迫环境,比较了不同浓度海藻糖处理后对烟草幼苗生长的影响。[结果]在PEG6000模拟干旱条件下,烟苗明显受到干旱胁迫。外源海藻糖处理后的烟草幼苗在干旱胁迫下可明显提高叶片的相对含水量和叶绿素的含量,降低电导率和MDA的含量,提高POD、CAT和SOD酶活性;统计结果表明,海藻糖处理以浓度为10-15 mmol/L的效果最好。[结论]外源海藻糖可缓解干旱对烟草幼苗生长的胁迫,提高烟苗的抗旱性。     

刺激条件对酒香酵母海藻糖代谢的影响

[目的]为微生物发酵法生产海藻糖提供有益的参考。[方法]研究了高渗透压、单一热刺激、周期性酸刺激和周期性热刺激几种刺激条件对酒香酵母海藻糖代谢的影响。[结果]一定浓度的NaCl所形成的渗透压能促进酒香酵母中海藻糖的产生。单一热冲击试验得到的最佳冲击条件为：冲击时机为培养时间12h、热冲击温度45℃、热冲击的持续时间1h。周期性酸刺激试验表明,酸刺激对酒香酵母海藻糖产生有一定的促进作用,多次酸刺激对海藻糖产量无累加效果。周期性热刺激试验表明,适宜的热冲击能够迅速促进细胞海藻糖的合成,对细胞的生长量影响不大,4次热冲击结束时细胞中海藻糖含量增加值呈下降趋势,分别为冲击前海藻糖含量的1.6、1.1、1.1及1.0倍,表明酒香酵母对热冲击的应激性是逐渐减弱的。[结论]对研究酵母在极端环境下的抗逆机制有一定的启示作用。 更多还原     

啤酒酵母海藻糖提取工艺研究

[目的]研究优化啤酒酵母海藻糖提取工艺.[方法]以啤酒废酵母为原料,使用各种不同的方法（微波破壁法、高温处理破壁、煮沸提取法）提取海藻糖,以海藻糖得率以及工艺的效益性为指标考察料液比、浸提时间、浸提温度、辅助因素处理等单因素对海藻糖提取的影响,从而确定从废酵母中提取海藻糖的较佳工艺.[结果]试验得出,微波破碎法耗时少,但不易工业化且提取率不高,比较发现煮沸提取的工艺方法相对最佳.以水作提取剂从废酵母中提取海藻糖的最佳条件是：煮沸80 min,海藻糖提取率为8.147 mg/g干酵母.[结论]研究可为海藻糖的提取及进一步开发利用提供参考.     

光合细菌G3菌株固定化保存方法的研究

[目的]研究一种新的有效的光合细菌菌种保藏方法。[方法]以硫酸铝钾作絮凝剂,海藻糖作保护剂,陶瓷粉作固定剂,分别在常温,4、-20℃下保存光合细菌G3菌株,30 d后测定有效活菌数并观察生长情况。[结果]固定化保存的光合细菌活性较好,生长繁殖旺盛。[结论]固定化方法为光合细菌工业化生产的菌种保藏提供了一种新的有效方法。     

小球藻的风干致死及干燥保护研究

[目的]研究小球藻的风干致死及干燥保护方法。[方法]比较7种保护剂对处于对数生长期的小球藻细胞的保护作用。[结果]海藻糖对藻细胞的保护效果最好,当海藻糖用量为5%时,藻细胞存活率提高了50%。[结论]该研究结果对淡水微藻的诱变育种具有重要指导意义。     

小球藻的风干致死及干燥保护研究

[目的]研究小球藻的风干致死及干燥保护方法。[方法]比较7种保护剂对处于对数生长期的小球藻细胞的保护作用。[结果]海藻糖对藻细胞的保护效果最好,当海藻糖用量为5%时,藻细胞存活率提高了50%。[结论]该研究结果对淡水微藻的诱变育种具有重要指导意义。     

介孔分子筛固定化海藻糖合酶的研究

[目的]对介孔分子筛固定化海藻糖合酶进行研究。[方法]以基因工程菌所产海藻糖合成酶为材料,利用介孔分子筛MCM-41作为载体固定化海藻糖合成酶,并对固定化条件和固定化前后的海藻糖合酶性质进行比较研究。[结果]海藻糖合成酶可通过物理吸附法固定于介孔分子筛MCM-41孔道中,在pH为3,给酶量为62.5 mg/g的条件下,固定12 h时可得到最佳固定化效果;与游离海藻糖合酶相比,固定化后的海藻糖合酶pH稳定性和热稳定性明显改善,并具可重复操作性,有利于酶的使用和储放。[结论]该研究为开发新的固定化海藻糖合成酶提供了理论依据。     

红薯淀粉发酵生产海藻糖研究

[目的]为海藻糖的科学生产提供参考。[方法]对以红薯淀粉为原料发酵生产海藻糖的过程进行研究,通过正交试验确定海藻糖合成酶产生菌的最佳培养基配方,使用最佳培养基来确定最佳发酵时间、发酵温度、pH、装液量等最佳培养条件。[结果]以食尼古丁节杆菌为生产菌,得到海藻糖合成酶的产酶最佳培养基配方为：麦芽糖4%、蛋白胨0.5%、牛肉膏0.6%、K2HPO40.08%、NaH2PO40.12%。确定了以红薯淀粉为原料发酵生产海藻糖的培养条件为发酵时间48 h,最适发酵温度38℃,最适pH 7.0,最适装液量200ml/500 ml。[结论]确定了红薯淀粉发酵生产海藻糖的小试最佳培养基配方和发酵条件,为红薯淀粉发酵生产海藻糖后期的中试和工业化生产提供了科学依据。