液态奶中阪崎肠杆菌污染状况的调查

[目的]了解某地区液态奶中阪崎肠杆菌的污染情况,为政府加强对液态奶的管理提科学依据。[方法]采用改进方法和PCR法检测液态奶。PCR适宜反应体系为：6μl 10×PCR buffer,4μl dNTPs混合物,2．5Mg^2＋ μl（25mM）,2μl 10μmol正向引物,2山10μmol反向引物,0．25μl（5U／μl）Taq,23．25μl水,总反应体系为50μl;其适宜的PCR扩增程序为：PCR反应采用冷启动,95℃预变性5min;变性95℃ 1min,退火61℃0．5min进行35个循环。PCR反应产物在2％的琼脂糖凝胶中进行电泳,凝胶成像系统观察结果,检出率为2．4％,同时对阪崎肠杆菌的毒力进行了研究,所筛出的4株阪崎肠杆菌均导致受试昆明小鼠死亡。[结果]从167份液态奶样品中检出4株阪崎肠杆菌。     

辣椒制品中阪崎肠杆菌的检测与鉴定

阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种,在一定条件下可引起人和动物致病。为了加强对食品中有害细菌的监管力度,在对1份辣椒制品实施大肠杆菌常规项目检验的过程中分离出可疑菌株,经分离培养、革兰氏染色、API 20E和全自动VITKE 2生化反应鉴定及实时荧光PCR检测,确定该可疑菌株为阪崎肠杆菌。表明,辣椒制品存在阪崎肠杆菌的污染风险。     

婴幼儿配方乳粉中阪崎肠杆菌检测方法探讨

通过对婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的菌落形态、生化特性等方面的试验,确定采用灭菌蒸馏水(DW)前增菌、肠道菌增菌肉汤(EE)增菌、显色培养基(X--αGlcA)分离培养、再以API20E生化系统鉴定的方法为检出该菌的理想方法。     

一种基于TaqMan探针法的阪崎肠杆菌qPCR全自动检测技术体系的建立

[目的]建立快速准确地检测食物样品中食源性致病菌的体系。[方法]配套湖州市微生物制剂与农产品安全重点实验室自主研发的微生物分子检测仪,建立一种基于Taq Man探针法的阪崎肠杆菌q PCR检测体系。[结果]体系建立成功,标准曲线斜率为-3.44,R~2=0.995 5,扩增效率为95.3%。[结论]该q PCR体系特异性强,灵敏度高,明显缩短了检测时间,并具有良好的稳定性与重复性,为食品中阪崎肠杆菌的高通量和自动化检测提供了一个新的途径。     

食品中克罗诺杆菌(原阪崎肠杆菌)双重PCR检测方法研究

根据克罗诺杆菌(Cronobacter spp.)16S rRNA基因以及局部大分子合成(MMS)操纵子特异序列设计2对引物,经反应体系和条件优化,建立了双重PCR检测方法。特异性检测结果显示,Cronobacter spp.菌株PCR扩增均可见2条特异性条带,而其他菌株PCR扩增均为阴性。纯菌检测双重PCR的灵敏度为6.3×103 CFU.mL-1,而相对应单重PCR的灵敏度分别为6.3×101 CFU.mL-1和6.3×103 CFU.mL-1;人工污染的食品样品(奶粉、牛奶、鸡肉)在经过24 h增菌后,检测限均可达100 CFU.mL-1或100 CFU.g-1。在鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)存在的条件下,双重PCR的检测限没有受到影响。表明本试验建立的双重PCR检测方法具有很好的特异性和灵敏度,能克服食品样品基质及杂菌的干扰,可应用于食品中Cronobacter spp.的检测。     

食品中阪崎克罗诺杆菌的药物敏感性及分子分型研究

克罗诺杆菌是一种革兰氏阴性菌,是配方粉中威胁婴幼儿健康的主要致病菌。近年来,乳制品及食品中常有克罗诺杆菌耐药株的报道,耐药株的出现给临床治疗带来巨大挑战。为探究PFGE型别与耐药表型之间的关联性,采用BD PhoenixTM-100全自动细菌鉴定及药敏系统对食品分离的68株阪崎克罗诺杆菌进行药敏检测,共选择19种抗生素,并采用PFGE对其进行分子分型。结果表明：4株阪崎克罗诺杆菌具有耐药性,耐药率为5.88%。其中,3株对头孢唑啉耐药,1株对四环素耐药。18株菌表现为中介,其中16株对头孢唑啉中介,2株对氯霉素中介。所有菌株对其余16种抗生素均敏感。68株阪崎克罗诺杆菌可分成58个PFGE带型,其中PT037、PT050、PT054、PT007、PT043及PT046带型分别含有4、3、3、2、2、2株菌,其余52个带型各含1株菌,带型较分散。3株头孢唑啉耐药菌株包含3个PFGE带型,18株中介菌株包含16个PFGE带型。检测的阪崎克罗诺杆菌食品分离株耐药率较低,未发现多重耐药菌株,且呈现出高度基因多态性,菌株PFGE带型与耐药性之间无明显相关性。     

阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体的制备及特性分析

本研究以灭活阪崎克罗诺杆菌（CS）为免疫原免疫BALB/c小鼠,5次免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）融合。利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,制备抗CS特异性单克隆抗体。对单克隆抗体进行效价及特异性测定,确定其抗体亚型及单克隆抗体之间的抗原竞争性。结果表明：经4次亚克隆后得到2株稳定产生抗体的细胞株,分别命名为9D10、2H2,9D10抗体和2H2抗体效价较高,分别为2×106、6×106;9D10抗体和2H2抗体与单增李斯特菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌等均不发生交叉反应,特异性良好;2株抗体重链均为IgG2a,轻链均为Kappa;2株抗体之间无抗原竞争性。抗CS单克隆抗体的制备可为其快速检测方法的建立提供基础。     

农业产前信息化的分析与探讨

从生产力三要素出发,分析了农业产前信息化的实现过程,讨论在农业生产前期如何对劳动者、劳动资料和劳动对象进行信息化建设,以此促进整个农业生产的产中信息化和产后信息化,从而提高农业生产效率,逐步推进农业信息化的发展进程,从而突出农业信息化在中国社会主义现代化建设中的重要战略地位。     

阪崎克罗诺杆菌中转座子拷贝数实时定量PCR检测方法的建立

[目的]建立检测阪崎克罗诺杆菌中转座子拷贝数的实时定量PCR方法。[方法]以单拷贝持家基因atpD作为内参基因,建立同时含有单拷贝持家基因atpD和EZ-TN5转座子的重组质粒;建立atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测的标准曲线,并利用所建立的标准曲线,对3株阪崎肠杆菌突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子的拷贝数进行检测,并计算其比值。[结果]atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测标准曲线的相关系数分别为0.999和0.998;3株突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子拷贝数比值分别为0.98、1.17与0.91,证明突变株中转座子为单拷贝。[结论]该研究所建立的实时定量PCR方法实用性强,可替代Southern杂交用于不同细菌中EZ-TN5转座子拷贝数的检测。     

陕西市售婴幼儿食品中阪崎克罗诺杆菌流行状况及相关特性研究

对陕西省62个品牌的366份市售婴幼儿配方乳粉和米粉及其他食品中阪崎克罗诺杆菌的污染状况进行调查,并对分离株的相关特性进行分析,旨在阐明陕西市售婴幼儿食品的食用安全性。结果表明,87份样品检出阪崎克罗诺杆菌阳性,平均检出率为23.8%。乳粉阳性样品检出率为18.3%,米粉为27.3%,其他婴幼儿配方食品检出率20.0%。共检出169株阪崎克罗诺菌,其中168(99.4%)株对利福平产生抗性,对其他抗生素耐药的菌株比例依次为阿莫西林20.12%、链霉素18.93%、四环素17.16%、氨苄西林12.43%、庆大霉素11.24%和头孢曲松0.59%等。135株(79.88%)分离株携带ompX基因,120株(71.01%)携带cpa基因、111株(65.68%)携带sip基因、93株(55.03%)携带hly基因。按照95%的相似性,169株分离株脉冲场凝胶电泳(Pulse field gel electrophoresis,PFGE)分型后可被分为4个大簇、8个小簇和1个单基因型,部分源于不同品牌或批次食品的菌株基因型相似性较高,表明陕西省市售婴幼儿配方粉及婴幼儿食品中阪崎克罗诺杆菌染问题不容忽视,存在严重的食品安全危胁。     

番茄耐低温研究进展

综述了国内外番茄耐低温的研究成果,包括番茄低温耐受性的生理机制、番茄耐低温遗传、亚适温对番茄生育的鉴定方法,以及提高番茄低;温耐受性的途径,并指出了今后番茄耐低温研究值得深入探讨的问题。     

水分胁迫对莴苣直根低温忍耐性的影响

比利时莴苣的肉质直根是在第一个生长季采收的,经过一段时间的冷藏后,根被沙培或水培在黑暗的条件下使其产生一个大的可食和的叶球。根据的冷藏温度直接影响到莴苣菜的品质。本文研究了比利时莴苣生长过程中不同水分条件对其根的生长及对贮藏低温耐受性的关系。结果表明：生长间的水分胁迫可降低莴苣根和叶的鲜重,提高根的干重。低温有内钾离子渗漏量随温度的降低（０℃,－１℃,－３℃）而增加,根据织钾离子渗漏量甚至达到８０     

海藻糖在酿酒酵母抗铜胁迫中的作用

 【目的】研究铜胁迫下,酿酒酵母胞内海藻糖的积累情况及海藻糖对酿酒酵母的保护作用,为探讨铜胁迫下酿酒酵母的防御保护机制提供理论依据。【方法】以改良模拟葡萄汁为发酵培养基,分别对菌株AWRI、BH8和Freddo进行直接铜胁迫处理（Cu2+浓度为1.00 mmol•L-1）、热激预处理（37oC,1 h）、再铜胁迫处理,同时,设定无铜培养为对照。测定各种处理下酿酒酵母的存活率、胞内海藻糖的积累和6-磷酸海藻糖合成酶（TPS1）酶活性的变化。【结果】与对照相比,1.00 mmol•L-1Cu2+胁迫处理使酵母细胞内海藻糖的含量增加,TPS1酶活性提高。热激预处理可诱导海藻糖的积累,且铜胁迫下细胞的存活率也显著高于直接铜胁迫处理。相同处理条件下,菌株Freddo胞内海藻糖的含量最多,细胞存活率也最高。【结论】铜胁迫处理可诱导胞内海藻糖的积累,并且这一积累对铜胁迫下的酿酒酵母起到一定的保护作用。     

结缕草品种(系)的抗寒性鉴定

以14个结缕草品种(系)为试验材料,以马尼拉和天鹅绒为对照,用电解质渗透法作为指标,比较它们的抗寒性。结果发现:与天鹅绒相比,除了引自中国台湾的Z095的抗寒性较差外,其它几个国产品种(系)的抗寒性都较强;与马尼拉相比,引自中国山东枣庄的Z116的半致死温度与其相同,国外引进品种的抗寒性则较差或与其接近。     

玉米自交系材料耐高温特性鉴定筛选初报

对来自国内外的816份玉米自交系及其资源材料进行了耐高温特性鉴定和筛选。将玉米的耐高温特性分为特耐、高耐、中耐、不耐4个级别。筛选结果为:特耐型2个,高耐型5个,中耐型20个,不耐型789个。试验证明,玉米自交系材料间的耐高温特性存在着明显差异,育种家们手中所拥有的耐高温材料显然太少。     

温度和培养基对空肠弯曲菌冻融耐受性的影响

比较了１５株不同动物来源的空肠弯曲菌的冻融耐受性，结果表明，不同动物来源的菌株间冻融耐受性差异极显著（Ｐ＜０．０１），但与其来源动物不相关．并分析了—１０℃～３７℃、—２５℃～３７℃两种冻融温度和ＦＭＰＧ、Ｐ—基、ＭＳＧ、布氏半固体４种培养基对该菌冻融耐受性的影响，认为温度与培养基间存在极显著的互作现象（Ｐ＜０．０１），４种培养基对该菌耐受性的影响差异极显著，其中以ＦＭＰＧ和Ｐ—基对该菌冻融耐受性的增强效果最佳（６６．２％和６３．９％），ＭＳＧ的效果中等（５２．５％），布氏半固体最差（３１．２％）。在—１０℃～３７℃下，以Ｐ—基最优（６２．７％）．在—２５℃～３７℃下，以ＦＭＰＧ最优（７０．２％）．对ＭＳＧ而言，—１０℃～３７℃下（５９．６％）优于—２５℃～３７℃温度下（４５．３％）。     

极端高温对西花蓟马存活、繁殖特性及体内海藻糖、山梨醇含量的影响

【目的】西花蓟马（Frankliniella occidentalis）是中国的重要外来入侵和检疫性害虫, 对各地的蔬菜和花卉造成了巨大的经济损失。明确极端高温（45℃）对西花蓟马存活率、繁殖力以及体内海藻糖、山梨醇含量的影响,为西花蓟马的防治提供理论依据。【方法】设置45℃条件下高温热激西花蓟马当代成虫、2龄若虫2 h,经过24 h变温模式22℃（4 h）-25℃（8 h）-28℃（4 h）-25℃（8 h）培养后再进行一次45℃ 2 h的热激处理。研究热激处理后其亲代、F₁代和F₂代的种群参数（亲代各虫态存活率、雌成虫寿命,F₁和F₂代种群数量、存活率、性比）以及2龄若虫和成虫体内海藻糖和山梨醇含量的变化。【结果】45℃ 2 h高温热激两次后,西花蓟马各个虫态的存活率均小于50%,且预蛹和蛹的存活率为0,成虫的存活率最高为41.38%,显著高于其他虫态（1龄若虫存活率为5%,2龄若虫存活率为21.36%）（P＜0.05）;西花蓟马2龄若虫和成虫在45℃高温条件下热激2 h两次后,其亲代雌成虫寿命和繁殖力均明显降低,且F₁代也受到较大影响, F₁代种群数量、存活率、性比（♀﹕♂）显著降低,但F₂代种群有所恢复,另外热激处理西花蓟马成虫的雌成虫寿命及繁殖力在亲代、F₁代中都明显高于热激处理2龄若虫（P＜0.05）;西花蓟马亲代成虫和2龄若虫在45℃热激2 h两次后其体内的海藻糖含量明显降低,并且影响到F₁和F₂代种群体内的海藻糖含量,另外热激处理亲代成虫其体内海藻糖含量低于热激处理亲代2龄若虫的海藻糖含量, 且F₁和F₂代与亲代趋势相同（P＜0.05）;西花蓟马亲代成虫和2龄若虫在45℃热激2 h两次后其体内的山梨醇含量明显升高,热激亲代成虫的山梨醇含量高于热激2龄若虫体内的山梨醇含量,且这种热激处理能够影响到后代种群体内山梨醇的含量,F₁和F₂代体内山梨醇含量的变化趋势与亲代相同（P＜0.05）。【结论】45℃极端高温处理不仅对西花蓟马亲代的生长发育、繁殖和生理生化产生了明显的影响,而且这种影响延续到了子代（F₁、F₂代）的不同发育阶段。同时,西花蓟马对极端高温的应对与其体内的海藻糖、山梨醇的含量具有一定的相关性。