莲藕过氧化物酶的分离纯化及性质研究

经40%-85%硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析纯化,得到莲藕过氧化物酶（POD）电泳纯制品.该酶纯化倍数为39.77倍,回收率为11.76%.酶学性质和动力学性质研究表明,该酶最适pH为5.0;最适温度为35℃;以不同浓度的过氧化氢与莲藕POD在25℃、pH5的条件下反应,测得其Km值为9mmol/L.CuSO4和ZnSO4对莲藕POD活性有激活作用;BaCl2、MgCl2及SDS对其活性影响不大;Na2SO4、Li2SO4、KCl和NaCl对POD活性有一定的抑制作用;MnSO4和FeSO4对POD活性有较强的抑制作用;ASA能完全抑制POD的活性.     

辣根过氧化物酶的分离制备和纯化

从辣根块茎分离和纯化了辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）,纯化程度包括匀浆、加热、硫酸铵分级沉淀、丙酮分级沉淀和ＣＭ－２３阴离子交换层析。纯化的ＨＲＰ的Ｋ４值为２．５×１０＾５,ＲＺ值值３．００,酶的比活４０６Ｕ／ｍｇ蛋白。它的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示一条带,酶亚基分子量为４０ＫＤ,等电聚焦电泳呈现三条带,酶不舔生染色呈现多条带,表明有同工酶存在。对酶的分离纯化作了一些改进,如加氨水保持ＰＨ值,加入５ｍｍｏｌ／     

莲藕过氧化物酶的分离纯化及性质研究

经40%～85%硫酸铵分级沉淀、 DEAE-Sepharose离子交换层析、 Sephacryl S-200凝胶过滤层析纯化, 得到莲藕过氧化物酶(POD)电泳纯制品. 该酶纯化倍数为39.77 倍, 回收率为11.76%. 酶学性质和动力学性质研究表明, 该酶最适pH为5.0; 最适温度为35 ℃; 以不同浓度的过氧化氢与莲藕POD在25 ℃、 pH5的条件下反应, 测得其Km值为9 mmol/L. CuSO4和ZnSO4对莲藕POD活性有激活作用; BaCl2、 MgCl2及SDS对其活性影响不大; Na2SO4、 Li2SO4、 KCl和NaCl对POD活性有一定的抑制作用; MnSO4和FeSO4对POD活性有较强的抑制作用; ASA能完全抑制POD的活性.     

龙眼果皮过氧化物酶的分离纯化

以福眼龙眼(D im ocarpus longanaLour.cv.Fuyan)果皮为材料,经硫酸铵盐析分级,以及Stream line Phenyl、DEAE-Cel-lu lose、Phenyl Sepharose H igh Perform ance、Superdex 200 prep grade等柱层析分离,得到由分子质量约45.6 ku的单一亚基组成的4个POD组分,其分子质量分别为290.1、232.1、188.5和170.7 ku.     

甘蔗苗过氧化物酶的分离、纯化及性质测定

从新鲜甘蔗苗分离和纯化了过氧化物酶(POD)，纯化过程包括匀浆、硫酸铵分级沉淀、丙酮分级分离和Sephadex G-100柱层析。过氧化物酶最适pH值是4．4；Km值为0．038mol/L；过氧化物酶在4-55℃下水浴20min，酶的失活率较小，在55℃以上时，酶的失活率越来越大；该酶在4℃下耐藏性较好；受半脱氨酸和抗坏血酸等抗氧化剂的抑制。     

龙眼果皮过氧化物酶的分离纯化研究初报

对福眼龙眼果皮的过氧化物酶(POD)进行分离纯化,得到了一组包含4个不同分子质量的POD.     

香蕉果肉过氧化物酶初步纯化及特性研究

[目的]为控制香蕉POD引起的酶促褐变提供理论依据。[方法]采用饱和度70%硫酸铵盐析和DEAE-Toyopearl 650M离子交换柱层析分离纯化果肉POD,测定香蕉酶液中POD活性和蛋白质含量。[结果]香蕉提取酶液中POD被纯化了约7.3倍,回收率为33.8%。香蕉果肉POD对愈创木酚的Km值为5.98 mmol/L,其最适pH值为6.5,pH值稳定性为pH 6.0~10.0,最适反应温度为35℃。盐酸-L-半胱氨酸、抗坏血酸能显著地抑制香蕉果肉POD的活性,亚硫酸氢钠、植酸、柠檬酸也能有效地抑制该酶活性;而Cu2+对香蕉果肉POD则有明显的激活作用。[结论]香蕉果肉POD的热稳定性低于香蕉PPO热稳定性,其有效的化学抑制剂与香蕉PPO基本一致。     

枇杷果肉过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

枇杷果肉制成丙酮粉,通过硫酸铵沉淀分级分离、透析、DEAE-纤维素离子交换柱层析纯化,获得两个酶活力峰,第二活力峰的酶制剂经过PAGE和SDS-PAGE电泳获得单一纯的过氧化物酶(PODⅡ),纯酶比活力为710.5U/mg。酶亚基分子量为22.6kDa,等电点pI为3.6。酶的动力学研究表明:酶的最适pH为5.0,在pH2.6～10区域较稳定;酶最适温度是35℃,对热敏感,高于45℃以上酶的稳定性差。酶对愈创木酚和H2O2的表观Km值分别为20.58和12.04mmol/L,以愈创木酚为底物时,酶比活力最大,其次是苯酚、邻苯二酚、对苯二酚和间苯二酚,酶未能催化以焦性没食子酸为底物的氧化反应。Al3+、Mn2+、Zn2+和Hg2+对酶有抑制作用,Mg2+、Ca2+、Cu2+、Fe2+、Ba2+和Pb2+对酶有激活作用;半胱氨酸等12种化合物对酶活力均有不同程度的抑制作用,在防止或减轻枇杷采后的酶促褐变中将起到重要的作用。     

黄孢原毛平革菌过氧化物酶的分离、纯化和酶学特性研究

从木质素降解菌Phanerochaete chrysosporium中纯化出两种木质素降解酶：木质素过氧化物酶（LiP）和锰依赖过氧化物酶（MnP）。经测定LiP和MnP的分子量分别为37kD和40kD,最适作用温度均是37屯;保温2h,LiP的半失活温度为40℃,MnP为45℃;LiP最适作用pH2．8,稳定pH2．2—5．2;MnP最适作用pH4．6,稳定pH4．0—7．0。Fe^2＋LiP和MnP均表现出促进作用,Na^＋、K^＋、Ca^2＋、Mg^2＋、Zn^2＋、Fe^3＋、Ag^＋、CO^2＋、NH4^＋对LiP有促进作用,对MnP则表现出抑制作用。与此相反,Mn^2＋对MnP酶活的高效促进作用,对LiP表现出了轻度的抑制作用,这也体现出了MnP对Mn^2＋的依赖性。Cu^2＋对LiP活性无影响,而对MnP有强烈的抑制作用。Fe^3＋两者活性的抑制都达到了90％。     

女贞果实过氧化物酶的纯化及热稳定性研究

为探讨过氧化物酶在女贞果实发育中的作用,经过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100、DEAE-纤维素离子交换层析分离,从女贞果实中分离提纯过氧化物酶(POD),纯化倍数为48倍,回收率为13.3%。该酶的比活力为1 167.15 U/mg蛋白,最适pH为6.5,对H2O2的Km值为3.85 mmol/L,对愈创木酚的Km值为6.2 mmol/L,最适温度为40℃,热稳定性较好,55℃以下不易失活。其活性受到MnSO4明显抑制。     

响应面法优化藜麦糠皂苷的提取及抗氧化活性

采用超声波浸提法提取皂苷,通过单因素试验考察液料比(A)、乙醇体积分数(B)和超声时间(C)对藜麦糠皂苷得率的影响,并采用Box-Behnken中心组合实验及响应曲面分析法优化藜麦糠皂苷的提取;同时采用还原Fe3+能力及清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、羟自由基(·OH)和超氧阴离子(O2-·)能力分析藜麦糠皂苷抗氧化活性。结果表明,最佳提取工艺条件为液料比39∶1(m L/g),乙醇体积分数74%,超声时间33 min。在此条件下,皂苷得率为23.371 mg/g。抗氧化试验结果表明,藜麦糠皂苷有显著的抗氧化活性,且与皂苷的质量浓度呈剂量依赖性。     

四川地区藜麦叶斑病病原菌的分离及鉴定

通过筛查并鉴定四川地区藜麦叶斑病的致病菌,旨在为后续研发生物防治制剂提供理论依据.分别采集成都金堂、十陵和西昌等种植基地患有藜麦叶斑病的植株.经组织分离、平板纯化分离菌株,并采用科赫法则确定致病菌;扩大培养致病菌菌株,提取其DNA,用rDNA-ITS(rDNA-内转录间隔区)、16S rDNA通用引物进行PCR扩增测序,对测序结果进行BLAST比对,并用MEGA 4.0构建系统发育树.结果显示,分离筛选到的2株细菌菌株SCCDP-2、SCCDP-4能够导致四川地区藜麦叶斑病的发生,经鉴定为成团泛菌(Pantoea agglomerans).     

“粮食之母”、“超级食物”——藜麦“落户”青海

藜麦(Chenopodium quinoa)为藜科(Chenopodiaceae)藜属(Chenopodium)的1年生草本植物,原产于南美洲的安第斯山脉,以其极高的营养价值和多种开发利用价值近年来引起人们的普遍关注。2014年,在青海西宁、乌兰、德令哈和格尔木市进行了适应性种植,长势良好,丰收在望。     

灰树花多糖的分离、纯化与理化性质

灰树花子实体用热水提取，乙醇沉淀，透析冻干得灰树花多糖粗品，再经Sevag法脱蛋白，DEAE－Sephadex A-25柱层析纯化得到4种多糖分别为PGF－1，PGF－2，PGF－3和PGF－4。4种多糖经纸层析，Sephadex G-200柱层析及聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。结果表明都为单一均匀组分：PGF－1经纸层及气相色谱分析证实它是一种葡萄糖；凝胶渗透色谱测定其分子量为11万。红外光谱揭示PGF－1含β－型糖苷键。     

鸡心SOD的分离纯化及部分性质研究

为从新鲜鸡心中获得锰超氧化物歧化酶的电泳纯制品并进行性质研究,将鸡机心匀浆,抽提,正丁醇除脂,丙酮分级沉淀,DEAE-Sepharose层析和Superdex-200层析结果为:酶的比活是1 633U/mg,纯化倍数是139.16,全分子相对分子质量是1.037×105,亚基相对分子质量2.63×104.该酶在50℃～70℃有较好的稳定性,最适温度是40℃,pH值在3～9之间有较好的稳定性.Ca2+、二硫苏糖醇、尿素对鸡心SOD有一定的激活作用,Ba2+和Zn2+对鸡心SOD抑制作用较弱,Cu2+抑制作用较强,低摩尔浓度乙二胺四乙酸二钠对酶有激活作用,高摩尔浓度有抑制作用.     

米糠过氧化物酶的酶学性质研究

以邻苯二胺、过氧化氢为底物,采用分光光度计测定氧化产物的方法对米糠过氧化物酶的性质进行了研究,结果表明:过氧化物酶活性在35℃达到最大值,最适pH值为6.5,在反应5 min时,达到酶的最大反应活度;金属离子钾、钠、钙对过氧化物酶有不同程度的抑制作用,抑制作用表现为钙离子>钠离子>钾离子,木瓜蛋白酶和抗坏血酸在不同范围下呈现出不同的抑制和促进作用。由Linewear-Burk方程,得到过氧化氢Vmax=9.708×10-3△A/min,Km=15.135×10-3mol/L;邻苯二胺的Vmax=12.346×10-3△A/min,Km=19.247×10-3mol/L。     

米糠过氧化物酶的酶学性质研究

以邻苯二胺、过氧化氢为底物,采用分光光度计测定氧化产物的方法对米糠过氧化物酶的性质进行了研究,结果表明:过氧化物酶活性在35℃达到最大值,最适pH值为6.5,在反应5 min时,达到酶的最大反应活度;金属离子钾、钠、钙对过氧化物酶有不同程度的抑制作用,抑制作用表现为钙离子>钠离子>钾离子,木瓜蛋白酶和抗坏血酸在不同范围下呈现出不同的抑制和促进作用。由Linewear-Burk方程,得到过氧化氢Vmax=9.708×10-3△A/min,Km=15.135×10-3mol/L;邻苯二胺的Vmax=12.346×10-3△A/min,Km=19.247×10-3mol/L。     

藜麦种子总黄酮的提取及体外抑菌作用

采用96孔板微量法和牛津杯法研究藜麦种子总黄酮对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌的抑制作用。结果表明,藜麦种子总黄酮对供试菌株的抑制效果由大到小顺序为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌,对金黄色葡萄球菌基本没有抑菌作用。最低抑菌浓度值分别为:大肠杆菌32 mg/m L、枯草芽孢杆菌64 mg/m L、白色念珠菌128 mg/m L、铜绿假单胞菌256 mg/m L、金黄色葡萄球菌512 mg/m L。说明藜麦种子总黄酮对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和铜绿假单胞菌有抑菌作用,对金黄色葡萄球菌不敏感。