人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响

为了研究人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用及其对细胞凋亡、p53蛋白表达和Caspase-3活性的影响,试验采用MTT方法检测细胞的生长抑制率、DNA片段化试验检测细胞凋亡、流式细胞术测定细胞周期、Western-blot检测p53蛋白表达、Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3的活性.结果表明:人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞的抑制呈现时间和剂量依赖性,有73%的Hela细胞停滞在G0～G1期;Western-blot检测结果显示人乳铁蛋白可以上调p53蛋白的表达; 人乳铁蛋白作用48 h后Caspase-3的活性是0小时时的5.5倍,二者差异极显著(P<0.01).结果说明人乳铁蛋白能显著抑制宫颈癌Hela细胞生长,其抗肿瘤机制与诱导细胞凋亡、调控细胞周期、上调p53表达、活化Caspase-3有关.     

p53基因与肿瘤形成

肿瘤抑制基因的研究已经成为继癌基因之后肿瘤遗传学、分子生物学领域的前沿和热点,尤其是抑癌基因p53越来越被人们重视。研究表明正常的p53,又称野生型p53,在细胞损伤后的修复过程中发挥重要作用。正常p53的功能像"分子警察"一样监视着基因组DNA的完整性。在细胞发生DNA损伤时,p53蛋白能使细胞分裂终止在G1/S期,以使细胞有足够的时间修复损伤,恢复正常状态。若不能修复,野生型p53还能启动细胞的凋亡过程从而引发细胞的程序性死亡,阻止具有癌变倾向的突变细胞产生。而突变型p53基因会导致肿瘤的发生,大多数肿瘤与p53的突变有关。文章着重阐述了p53的表达与突变、p53的稳定调节及p53的转录调控等。     

新疆地锦草提取物体外抗氧化及抑菌活性研究

为了对新疆地锦草提取物的体外抗氧化及抑菌活性进行初步研究,通过测定醇提物还原力、清除羟基自由基和DPPH·自由基的能力来评价抗氧化能力;采用滤纸片法来测定醇、水两种提取物的抑菌活性,并确定最低抑菌浓度(MIC)。结果表明,新疆地锦草醇提取物具有较强的抗氧化能力;地锦草醇、水两种提取物对受试菌株均有明显的抑菌作用,其中醇、水两种提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度一致,MIC为1.56%。醇提物对枯草芽孢杆菌和变形杆菌的最低抑菌浓度一致,MIC为3.125%,而水提物对枯草芽孢杆菌最低抑菌浓度为12.5%,对变形杆菌最低抑菌浓度为25%。;地锦草两种提取物均有较强的热稳定性,但会受到p H值的影响;表明新疆地锦草提取物有较好的抗氧化和抑菌作用,具有较好的开发应用潜力。     

龙葵生物碱诱导HeLa细胞凋亡的研究

用MTT法观察龙葵生物碱的体外抗肿瘤作用,用TUNEL染色法检测龙葵生物碱对HeLa细胞凋亡的影响,用免疫细胞化学方法研究龙葵生物碱对HeLa细胞PCNA和突变型P53蛋白表达的影响。浓度为100μg/mL～800μg/mL的龙葵生物碱对HeLa细胞的生长均表现出一定的抑制作用;TUNEL染色结果提示400μg/mL的龙葵生物碱处理HeLa细胞48 h后,能够诱导更多的细胞出现凋亡;免疫细胞化学分析结果显示,400μg/mL的龙葵生物碱处理HeLa细胞48 h后,会使HeLa细胞中PCNA蛋白和突变型P53蛋白表达量显著下调。结果表明,龙葵生物碱在体外具显著抗宫颈癌活性,其作用机制是通过诱导更多的细胞出现凋亡而实现的。     

臭参水提物通过miR-3081-3p及靶基因Ubn2对小鼠结肠癌的调控研究

为了探究臭参水提物通过miRNA对小鼠结肠癌的调控效果，试验首先采用高通量测序技术测定结肠癌模型小鼠的结肠组织中miRNA表达水平，通过GO注释分析和KEGG富集分析对差异表达miRNA进行功能预测，以筛选出的表达差异较显著且尚无相关报道的miR-3081-3p为研究对象并预测其靶基因；然后在NIH-3T3细胞中转染miR-3081-3p模拟物(mimics)并添加臭参水提物进行孵育，通过Western-blot检测其靶基因的表达水平，并利用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果表明：在结肠癌模型小鼠的结肠组织中共发现117个显著差异表达的miRNA,其靶基因主要富集在肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)、Ras、泛素化及NF-κB等信号通路中；其中miR-3081-3p在结肠癌模型小鼠中表达量显著下降54%,其靶基因Ubn2表达量显著上升(P<0.05);在NIH-3T3细胞中，臭参水提物孵育和转染miR-3081-3p模拟物(mimics)均可以提高miR-3081-3p的表达量并降低靶基因Ubn2的表达量，还可降低NIH-3T3细胞凋亡水平。说明臭参...     

猪miR-199a-3p对mTOR基因表达的调控

通过生物信息学预测miR-199a-3p与mTOR-3′UTR的结合位点,人工合成猪mTOR-3′UTR及突变型片段克隆至双荧光素酶载体上,构建野生型(psiCHECK-2-W-mTOR-3′-UTR)和突变型(psiCHECK-2-M-mTOR-3′-UTR)双荧光素酶报告质粒。给PK-15细胞分别转染miR-199a-3p mimics、negative control和mTOR-3′-UTR野生型/突变型双荧光素酶报告载体,用双荧光素酶试剂盒检测荧光素酶活性,分别采用RT-qPCR和Western blot检测mTOR基因的mRNA和蛋白表达水平。结果表明,将含mTOR-3′-UTR的野生型和突变型双荧光素酶报告质粒与miR-199a-3p mimic共转染PK-15细胞,野生型报告质粒表达的荧光素酶活性显著低于其阴性对照组(P0.05);转染miR-199a-3p mimics能显著下调mTOR基因mRNA和蛋白的表达(P0.05),而转染miR-199a-3p Inhibitor组和Inhibitor-NC组相比,mTOR基因蛋白表达差异不显著(P0.05)。成功构建了猪野生型及突变型mTOR-3′-UTR双荧光素酶报告质粒,通过双荧光素酶试验、RT-qPCR及Western blot证实miR-199a-3p与猪mTOR-3′-UTR存在靶向调控关系。     

Tet-On系统调控p53稳定表达的H1299细胞系的建立与应用

应用Tet-on系统和H1299细胞,建立了p53诱导表达的H1299细胞系p53-Tet H1299,p53表达受强力霉素(doxycycline,Dox)调控,存在一定的剂量依赖性。诱导表达的p53蛋白有很好的核定位能力和转录活性,能显著上调p21、TLR3、Bax等多种p53转录激活的下游靶基因表达,同时还可显著抑制水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的复制,说明p53-Tet H1299可作为研究p53抗病毒作用的细胞模型。p53诱导表达细胞系的建立为进一步研究p53抗病毒作用机制、转录调控基因的筛选及其他生物学功能研究提供了很好的研究工具。     

检测p53基因诊断犬乳腺恶性肿瘤的初步研究

研究犬乳腺恶性肿瘤p53基因在体内的表达,探讨其与犬乳腺肿瘤恶性程度的相关性。根据GenBank中犬p53基因序列以及文献报道的高度保守区域,设计1对引物,同时以GAPDH基因序列作为内参,将临床采集的犬乳腺肿瘤组织进行p53基因PCR检测,分析p53基因的表达量变化趋势。结果表明,良性肿瘤组织p53基因的表达量极小;恶性肿瘤组织中的表达量随着其恶化程度明显增高。由此可推断,检测p53基因的表达量可作为诊断犬乳腺肿瘤、判断肿瘤恶化程度及预后的一个重要指标。     

赤芍水提物对金黄色葡萄球菌肠毒素及蛋白A表达的影响

探讨了赤芍水提物在体外对金黄色葡萄球菌肠毒素A、B及蛋白A分泌及mRNA转录的影响。试验中采用微量倍比稀释法测定赤芍对金黄色葡萄球菌ATCC29213的最小抑菌浓度(MIC);采用Western blot和实时荧光定量PCR检测亚抑菌浓度下赤芍水提物对金黄色葡萄球菌肠毒素A、B及蛋白A在mRNA转录和毒素蛋白分泌表达的影响。结果表明,赤芍水提物对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MIC值为6.3mg/mL;在亚抑菌浓度下,赤芍水提物可以明显抑制肠毒素A、B及蛋白A在蛋白水平和转录水平的表达,且呈现明显的浓度依赖性。     

鸡p53抑制传染性法氏囊病病毒复制及gga-miR-2127对其调控的分子机制

传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的一种高度危害养鸡业的传染病。肿瘤抑制蛋白p53能够抑制多种病毒的复制,但对IBDV复制的影响仍然不清楚。本研究以IBDV为模式病毒,采用体外感染模式,在IBDV感染的DF-1细胞中,p53的表达水平和活性均显著升高。p53过表达可以抑制IBDV的复制,并激活鸡体抗病毒天然免疫基因(IPS-1、IRF3、PKR、OAS、Mx)的表达水平上调;抑制p53的表达则得到相反的结果;表明p53可以激活鸡体的抗病毒天然免疫反应发挥抗IBDV感染作用。利用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析发现,gga-miR-2127可以作用于p53 mRNA的3'UTR;荧光定量RT-PCR和免疫印迹分析表明gga-miR-2127可以使p53的蛋白水平表达降低,但mRNA水平没有变化;gga-miR-2127过表达可以使鸡体的抗病毒天然免疫基因表达降低,IBDV复制水平升高。本研究表明:gga-miR-2127可以作用于p53 mRNA的3'UTR调控p53的表达从而影响其下游抗病毒天然免疫基因的表达来发挥抗IBDV感染的作用。     

地锦草颗粒对鸡的安全性试验

为了评价地锦草颗粒对靶动物鸡的安全性,选取100只健康的10日龄海兰鸡,随机分成5组,每组20只。各组试验鸡分别以1倍推荐剂量(2g/L)、3倍推荐剂量(6g/L)、5倍推荐剂量(10g/L)、10倍推荐剂量(20g/L)的地锦草颗粒连续饮水给药5d,通过对一般临床症状、血液学和血液生化指标、病理组织学等观察和检测,结果表明:地锦草颗粒毒性较小,在鸡体内耐受性高,至少以10倍推荐剂量饮水给药对靶动物鸡是安全的。     

不同处理方法对地锦草发芽率的影响

通过发芽试验探讨不同温度、pH值和湿度处理对地锦草(Euphorbiae humifusa)种子萌发的影响。结果表明:不同温度、pH值和湿度对地锦草种子的萌发均有显著影响。地锦草种子在30℃左右时发芽率和发芽指数最高,分别为52%和22.6。不同pH值处理时,pH值为7时其发芽率和发芽指数最高,分别为48%和23.79。不同湿度处理时,当湿度为90%时,地锦草种子的发芽率和发芽指数最高,分别为55%和23.02。     

地锦草注射液对几种猪病的疗效试验

地锦草注射液的临床疗效试验表明：该制剂对仔猪黄、白痢的总有效率为８６．１％，与其他对照药物的疗效比较，差异显著（Ｐ〈０．０５）；对猪感冒病的总有效率为８３．１％，与其他对照药物的疗效比较，差异极显著（Ｐ〈０．０１）。     

地锦草总黄酮对小鼠免疫功能及细胞因子mRNA表达影响

探讨地锦草总黄酮对小鼠免疫功能及细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-αmRNA表达影响。将小鼠随机分成4组：地锦草总黄酮高剂量组（H组）、中剂量组（M组）、低剂量组（L组）和纯水对照组（C组）,连续灌胃9 d后,检测其单核巨噬细胞吞噬功能、2%绵羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应、肝脏指数和脾脏指数,并用逆转录酶-聚合酶链式反应的方法检测脾脏IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-αmRNA表达水平。结果显示,地锦草总黄酮3个剂量组脾脏指数、廓清指数（K）、吞噬指数（α）、24 h足跖增厚值均显著高于C组;M组和H组肝指数显著高于C组（P〈0.01）;3个剂量组均能提高IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-αmRNA的表达水平,与C组相比,H组最显著。试验结果表明,地锦草总黄酮能有效提高机体的免疫功能及IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-αmRNA表达。     

地锦草不同组方对大肠杆菌的体外抑菌试验

为研制以地锦草为主药,组方治疗临床大肠杆菌病,提供理论依据,自拟中药处方6个,经水煮处理制成浓度为1g/mL的受试溶液,采用试管倍比稀释法和平板打孔法,对猪源致病性大肠杆菌O20、O48和O161进行体外抑菌试验。试验结果:组方Ⅲ抑菌作用最强,对O48和O161的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)均为62.5mg/mL,对O20的最低抑菌浓度(MIC)为62.5mg/mL,最小杀菌浓度(MBC)为125mg/mL。     

中草药对致病性维氏气单胞菌体外抑菌活性及 最优组方研究

本研究旨在寻找防治鲟鱼病害的有效中草药药物。用水煎煮法提取天然物中草药有效成分,采用试管法测定各提取物对维氏气单胞菌的最低抑菌浓度,最后通过正交试验确定了4种中草药提取物体外抑菌的最优组方。33种中草药提取物对维氏气单胞菌抑菌效果最好的是五倍子,其MIC为0.97 μg/mL;其次是地榆和黄芩,两者MIC均为1.95 μg/mL;马齿苋和苦参抑菌效果最差,MIC为250 μg/mL。选取五倍子、地榆、地锦草和连翘进行正交试验,其最优组方为1∶2∶4∶8,该组方对维氏气单胞菌有明显的抑制作用,为进一步应用中草药防治水产养殖病害提供依据。     

地锦草多糖提取工艺研究

用超声波结合正交试验方法研究了超声波对地锦草多糖提取条件的影响。结果表明,在试验条件限定的范围内,对浸出率影响顺序为超声时间（B）〉超声温度（C）〉料水比（A）〉提取次数（D）。其最佳提取工艺为料水比（1：30）,超声时间20min,提取温度40℃,提取1次。     

基于草地退化指示植物大狼毒的植被指数研究

为建立基于指示植物的滇西北地区草地退化遥感评价技术体系,将有毒植物大狼毒（Euphorbia jolkinii）作为草地退化的指示植物,筛选并构建了反映草地群落中大狼毒组分信息的植被指数。结果表明：部分特殊样地有可能放大GPS定位偏差对植被指数与地面调查指标相关性研究的不利影响,最好予以剔除。现有的植被指数与大狼毒调查指标的相关性略低于其与总体调查指标的相关性,不适合作为大狼毒的遥感监测指标。采用Landsat 5卫星第5波段影像校正后的植被指数与大狼毒调查指标的相关性增加,而与总体调查指标的相关性降低,在弱化样地总体群落信息、突出大狼毒组分信息方面GNDVIc表现最佳,较适用于草地群落中大狼毒组分的遥感监测。     

狼毒及瑞香狼毒的研究进展

大戟科狼毒含有挥发油成分、萜类、植物甾醇类、蒽醌、鞣质类、苯乙酮、杀虫成分。月腺大戟还分离出了黄酮类化合物;而瑞香狼毒含有木脂素、黄酮类化合物、二萜类化合物、香豆素类化合物、三萜类化合物、甾醇类以及其他成分。大戟科狼毒与瑞香狼毒的生物活性都有抗癌或抗肿瘤、抗茵、抗病毒、抗惊厥、杀虫作用,但二者的作用方式却不同,大戟科狼毒还独有抗白血病作用,而瑞香狼毒独有治疗和预防免疫缺陷的作用。关于狼毒的记载与研究的历史较早,但对于瑞香狼毒与大戟科植物狼毒大戟和月腺大戟的收载比较混乱,因此,对瑞香狼毒与大戟科狼毒在植物形态、生长分布、化学成分研究以及生物活性研究上进行了对比。