红桤木嫩枝韧皮部双向电泳体系的建立

以当年生红桤木嫩枝韧皮部为试验材料,对双向电泳各个环节条件进行比较选择。结果表明:采用改良TCA/丙酮提取法,结合使用pH 4～7的胶条,上样量1 000μg,凝胶浓度为12%时可分离101个蛋白点,初步建立了一套适用于红桤木嫩枝韧皮部蛋白质组分析的双向电泳技术。     

毛竹笋蛋白的双向电泳分析

以毛竹笋为材料,采用改良TCA-酚法提取竹笋总蛋白,Bradford法测定其浓度为9.470 mg·m L-1,采用1 500μg的上样量,使用24 cm,p H 3~10 NL IPG预制胶条进行总蛋白的双向电泳,凝胶图谱经PDquest 8.0软件分析,结果得出,毛竹笋的蛋白点数有1 014个,等电点主要集中在p H 6.0~7.0范围,相对分子质量集中在在45~116 k Da范围内,占58.48%。     

麻竹叶片蛋白质双向电泳体系的建立

以麻竹花药培养再生植株叶片为材料,比较了改良酚抽法、三氯乙酸(TCA)-丙酮沉淀法和裂解液法3种不同方法对麻竹蛋白质双向电泳的影响,并对上样量、等电聚焦程序、平衡时间等进行了探索与优化.结果表明,用改良酚抽法分离麻竹叶片蛋白质、确定上样量为1 mg· IPG胶条-1、等电聚焦总聚焦功率为100 000 W、胶条两步平衡时间均设置为15 min、考马斯亮进行凝胶染色的实验体系可以获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,凝胶的蛋白斑点匹配率平均为85.57％,总蛋白斑点数的相对标准差为4.86％.本研究建立了一套适合麻竹叶片蛋白质组学分析的双向电泳实验体系,为进一步研究麻竹生长发育分子调控机制及其遗传改良奠定基础.     

建瓯白笋及其竹叶蛋白双向电泳分析

建瓯白笋属于毛竹笋,其肉质鲜嫩、通体洁白、口感脆甜。以建瓯白笋及其竹叶为原料,采用酚抽提法提取竹笋总蛋白,得到了2个质量浓度为11.13和9.98 mg·mL~(-1)的蛋白样品,并进行了总蛋白的双向电泳实验(pH=3～10)。结果表明,建瓯白笋及其竹叶中蛋白种类丰富,其蛋白点数分别为1 626个和900个,竹笋多于竹叶,也多于杭州余杭毛竹冬笋(1 024个);等电点主要集中在pH=5～7,建瓯白笋及其竹叶蛋白点分别为1 102个和589个,占总蛋白点数的67.8%和65.4%;建瓯白笋及其竹叶蛋白的分子量均主要分布在18～66 kDa,蛋白点个数分别为1 083(66.6%)和672(74.7%),以35～45 kDa范围最为集中。因此,建瓯白笋及其竹叶是一种潜在的天然优质植物蛋白源。     

4种黄皮叶片蛋白质提取方法的比较

为了研究不同提取方法对黄皮叶片蛋白质提取质量的影响,以‘杨妃山黄皮’的叶片为材料,采用TrisHCl法、三氯乙酸(TCA)/丙酮法、尿素(Thi)/硫脲(Urea)法、酚(Phe)-甲醇/醋酸铵沉淀法提取叶片组织蛋白质,对获得的蛋白质产量、单向电泳图谱和双向电泳图谱分析比较。结果显示,不同方法的提取效果各异,就提取的蛋白质产率、单向电泳以及双向电泳结果来说,三氯乙酸(TCA)/丙酮法提取效果较理想,单双向电泳图谱辨识度强,蛋白点数多、蛋白点整洁、且纵横纹少。说明该法不但可以较好地去除黄皮叶片中存在的非蛋白物质,而且可以获取高质量的蛋白质。     

杨树叶片蛋白质双向电泳图谱的建立

[目的]探究适用于杨树叶片蛋白质组学研究的双向电泳体系,建立杨树叶片蛋白质的双向电泳图谱。[方法]本研究以小黑杨(Populus simonii×P. nigra)叶片为材料,对小黑杨叶片双向电泳体系的2D裂解液、蛋白的纯化、IPG胶条的pH范围、蛋白上样量、等电聚焦时间和SDS(Sodium Dodecyl sulfate)平衡时间进行优化。利用优化后的双向电泳体系分别对小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质进行双向电泳实验。[结果]采用2D裂解液Ⅱ对小黑杨叶片蛋白质进行溶解,可显著提高蛋白的溶解性,双向电泳图谱中可分辨出326个蛋白质,比采用2D裂解液Ⅰ溶解的蛋白样品多209个蛋白质。通过蛋白裂解液提取小黑杨叶片蛋白质,利用2D clean-up试剂盒法对蛋白样品进行纯化,所得的双向电泳图谱背景清晰、蛋白质的分离效果较好。小黑杨叶片蛋白质主要集中在pH 4~7内,选用24 cm、pH 4~7的线性IPG胶条进行双向电泳,可获得分离效果较好的393个蛋白质。蛋白上样量提高至1 mg时,可分辨的蛋白质的个数明显增加,由326个增加至454个。10 000V的等电聚焦时间为13 h,SDS平衡时间为40 min时可得到背景清晰、蛋白质个数多、分辨率较高的双向电泳图谱;采用优化后的双向电泳体系对小黑杨、大青杨(Populus ussuriensis Kom.)和84 K杨(Populus alba×P.glandulosa)叶片蛋白质进行双向电泳实验,分别可检测到531、828、525个蛋白质,且蛋白质分离效果好、图谱分辨率高。[结论]优化后的双向电泳体系提高了小黑杨叶片蛋白质双向电泳图谱的分辨率和重复性,采用优化后的双向电泳体系成功的建立了小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质的双向电泳图谱,该体系适用于小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质组学的分析,为杨树叶片蛋白质组学的研究奠定了基础。     

西藏巨柏双向电泳叶片总蛋白提取方法优化

为了获取高质量的西藏巨柏叶片蛋白质,分别采用酚抽提法、TCA/丙酮法和改良的TCA丙酮法3种方法对西藏巨柏叶片进行总蛋白的提取,同时利用蛋白试剂盒(The2-DQuantKit)对蛋白质的浓度和纯度进行了分析测定,并通过蛋白质斑点数量及分布特征,最后确定了最佳蛋白提取方法。结果表明:对样品研磨的精细程度、丙酮清洗沉淀次数等操作细节均能影响提取结果,同时采用改良的TCA丙酮法提纯后的结果最佳。说明改良的TCA丙酮法可应用于西藏巨柏叶片后续的蛋白质组学研究。     

不同冻害补救措施对勃氏甜龙竹笋期生长的影响

2016年1月下旬福建三明市区出现极端低温,最低气温-4. 2℃,造成引种的勃氏甜龙竹遭受较严重的冻害。为探讨不同冻害补救措施对勃氏甜龙竹笋期生长的影响,分别选择砍伐枯竹与扒土施肥结合、砍伐枯竹及未采取冻害补救措施3块样地进行出笋、退笋、笋高、地径及笋重量的调查与分析。结果表明:不同冻害补救措施对勃氏甜龙竹笋期生长达高度显著影响,尤其对勃氏甜龙竹平均每丛笋总重量的影响最大;扒土施肥对冻害补救勃氏甜龙竹笋期生长的促进效果较为明显,出笋期也略长于未采取任何措施的竹林,对提高冻害补救勃氏甜龙竹笋的质量和产量有明显的促进作用。     

5种牡竹属笋用竹竹笋营养成分之比较

对福建省华安县竹种园5种牡竹属笋用竹云南甜龙竹、版纳甜龙竹、勃氏甜龙竹、马来甜龙竹和梁山慈竹竹笋营养进行成分比较。结果表明:5种笋用竹鲜竹笋含水量均接近或超过90%,口感较好;灰分含量勃氏甜龙竹竹笋的最高,达0.893%,版纳甜龙竹最低(0.340%);蛋白质含量最高的是马来甜龙竹(1.717%),最低的是版纳甜龙竹(1.260%);勃氏甜龙竹(0.281%)和云南甜龙竹(0.292%)脂肪含量较低,马来甜龙竹(1.134%)和梁山慈竹(1.083%)脂肪含量较高;勃氏甜龙竹(0.655%)和云南甜龙竹(0.666%)粗纤维含量较低,而梁山慈竹、版纳甜龙竹和马来甜龙竹含量相近,达较高水平,分别达0.953%、0.894%和0.879%。5种竹笋均含有17种氨基酸,氨基酸总含量最高的是勃氏甜龙竹(227.64 mg·g~(-1)),最低的是马来甜龙竹(120.43 mg·g~(-1));必需半必需氨基酸总含量最高的是勃氏甜龙竹(84.26%),最低的是马来甜龙竹(50.67%);呈味氨基酸总量最高的是勃氏甜龙竹,达212.79 mg·g~(-1),其次依次为梁山慈竹(164.71 mg·g~(-1))、版纳甜龙竹(156.35 mg·g~(-1))、云南甜龙竹(141.44 mg·g~(-1))和马来甜龙竹(115.83 mg·g~(-1))。     

勃氏甜龙竹的引种与无性系选育

在福建南靖对泰国的勃氏甜龙竹进行了引种试验。6年的观察和结果分析表明：勃氏甜龙竹适合在中国南亚热带地区生长，其发笋期为5～11月，以6～8月为盛期，占全年发笋量70％以上；在造林第4年后，其笋产量就趋于稳定，比竹材产量提前1年达到稳定。在4个无性系中，以5号无性系的竹材产量或笋产量为最高，分别为45．95t／hm^2／a或12．1t／hm^2／a，并经竹笋的风味和营养成分综合分析，认为勃氏甜龙竹5号无性系是与麻竹、绿竹等相媲美的优良笋材两用竹种，具有重要的推广价值。     

HPLC测定丛生竹中总黄酮及(异)牡荆苷、(异)荭草苷的含量

以勃氏甜龙竹竹叶为原料,对其中竹叶黄酮的超声提取工艺进行研究,同时采用高效液相色谱法(HPLC)对勃氏甜龙竹、箬竹、浦竹仔及椅子竹中总黄酮及牡荆苷、异牡荆苷、荭草苷、异荭草苷的含量进行测定。结果表明,勃氏甜龙竹超声提取最佳的工艺为:甲醇作为提取溶剂、浓度为70%、料液比为1︰10(w︰v)、超声时间60min、温度40℃。在最佳提取条件下,勃氏甜龙竹中总黄酮得率能达到4.63%。采用高效液相色谱-外标法测定4种丛生竹中总黄酮,含量分别为0.795 2%、1.166 9%、0.092 6%、0.897 2%。勃氏甜龙竹、箬竹和椅子竹中均含有牡荆苷、异牡荆苷、荭草苷及异荭草苷,浦竹仔中仅含有牡荆苷和异牡荆苷。分析方法的建立,为丛生竹化学资源的利用奠定基础。     

普洱市勃氏甜龙竹反季节丰产栽培试验

以2-3年生勃氏甜龙竹的壮年竹作母竹,将其伐倒后,把芽饱满的茎秆锯成2~3个节1段的竹秆,培育出1年生的埋节苗,于2002年3月育苗,2003年5月造林。2004年11月和2005年11月,采用羊粪+地膜(处理Ⅰ),沼液+绿肥+地膜(处理Ⅱ),鸡粪+地膜(处理III),鸡粪+绿肥(竹叶)(处理Ⅳ)4种措施,开展勃氏甜龙竹反季节栽培试验,测定其产笋量。结果表明,采用反季节栽培可使勃氏甜龙竹的发笋时间提前至每年1-2月份,与常规方法 (5月发笋)相比,出笋时间提早了2-3个月。处理Ⅲ(鸡粪+地膜)对勃氏甜龙竹竹笋增产效果明显,每公顷产量为5 386.8 kg,比对照(2 887 kg/hm2)增产2 499.8 kg/hm2,增幅达46.41%。     

银杏种胚蛋白提取及双向电泳体系的优化

[目的]探索一套适用于银杏种胚蛋白的双向电泳体系,为研究银杏种胚在不同发育阶段的表达差异蛋白提供基础。[方法]分别从蛋白的不同提取方法(直接提取法、酚提取法、Tris-HCl法、Trizol提取法和TCA-丙酮-酚法)、裂解液中的尿素浓度(6 mol·L~(-1)、7 mol·L~(-1)、8 mol·L~(-1)、9 mol·L~(-1))蛋白上样量(1 500μg、1 650μg、1 800μg)和分离胶浓度(10%、12.5%、15%)四个方面对银杏种胚的蛋白图谱进行分析,筛选出适宜双向电泳的条件。[结果]采用TCA-丙酮-酚法提取银杏种胚蛋白,在裂解液中尿素浓度为8 mol·L~(-1)、上样量为1 650μg、分离胶浓度为12.5%的方法,可以获得分辨率较高、背景更加清晰、重复性更好的银杏种胚蛋白质双向电泳图谱。[结论]建立了适合银杏种胚蛋白双向电泳的体系:TCA-丙酮-酚法制备样品,选取尿素浓度为8 mol·L~(-1)的裂解液提取样品粉末全蛋白,蛋白上样量控制为1 650μg,第二向分离胶浓度定为12.5%。     

勃氏甜龙竹一新品种‘曼歇甜竹’

‘曼歇甜竹’Dendrocalamus brandisii ‘Manxie Tianzhu’属于竹亚科Bambusoideae牡竹属Dendrocalamus Nees的勃氏甜龙竹（云南甜龙竹）Dendrocalamus brandisii（Munro） Kurz,1998年发现于云南省普洱市思茅区南屏镇曼歇坝的勃氏甜龙竹栽培居群中,是勃氏甜龙竹栽培型Dendrocalamus ‘Brandisii’的变异植株经进一步选优、分离、培育而成的优质笋用竹新品种。‘曼歇甜竹’与勃氏甜龙竹栽培型的关键区别在于前者秆形更加高大、粗壮,秆高15~17 m,直径10~16 cm,梢头下垂,2级分枝反抱主枝,秆箨初期绿色,产笋量达7 500 kg/hm²以上;而后者秆形相对较小,其秆高10~15 m,直径10~12 cm,梢头极度下垂,2级分枝不反抱主枝;秆箨初期红棕色至鲜黄色,产笋量在6 000 kg/hm²以下。     

樟树叶片蛋白提取方法及其应用

提取高质量的蛋白质是蛋白质组研究的基础.以樟树5种化学类型(芳樟、异樟、脑樟、油樟和龙脑樟)叶片为材料,采用Tris-HCl结合TCA/丙酮沉淀法提取总蛋白质,并对提取效果进行检测.定量检测结果表明,所有样品的蛋白量都可以满足下一步消化实验的要求;PAGE电泳结果表明,Tris-HCl结合TCA/丙酮沉淀法所得图谱背景清晰,蛋白质信息量很大.检测结果说明用本试验的方法可获得高效、丰富的樟树叶片总蛋白质,能够满足蛋白全谱、磷酸化修饰、目标蛋白分析等相关研究,为深入开展不同化学类型樟树蛋白质组学研究奠定基础.     

锡金龙竹竹笋的营养成分分析与评价

对锡金龙竹鲜笋的矿物质、微量元素、蛋白质、粗纤维、总糖和氨基酸的含量进行了分析测定,并与版纳甜龙竹、勃氏甜龙竹、马来甜龙竹和麻竹竹笋以及6种常用蔬菜的相应含量进行了比较.结果表明:锡金龙竹鲜笋的蛋白质、脂肪、粗纤维、总糖及二氧化硫含量分别为227.7 g/kg,24.6 g/kg,82.7 g/kg,209.3 g/kg和2.65 g/kg,其蛋白质、粗脂肪含量与4种甜龙竹竹笋相当,蛋白质明显高于常用蔬菜,而粗脂肪含量略低于常用蔬菜.其每kg竹笋干物质中矿质元素和微量元素的含量为:P 9.33 g,Ca 42.33 g,K 367.67 g,Mg14.33 g,Fe 5.0 g,Zn 4.6 g,Cu 1.0 g,Mn 3.8 g, 略低或接近于4种甜龙竹竹笋,但明显高于所有参试的常用蔬菜.其锌铜比值为4.60,锌铁比值为0.92,说明锡金龙竹鲜笋所含的铜、铁、锌的比值是比较合理的.其蛋白质中含有17种氨基酸,包括9种人体必需氨基酸,总氨基酸(TAA)、人体必需氨基酸(EAA)和人体非必需氨基酸(NEAA)的含量分别为182.17 g/kg,54.39 g/kg,78.67 g/kg,都高于所有参试的常用蔬菜,其氨基酸总量略高于4种甜龙竹的竹笋.其所含的人体必需氨基酸占总氨基酸(EAA/TAA)的29.86 %,人体必需氨基酸与非必需氨基酸的比值(EAA/NEAA)为69.14,符合FAO推荐的理想蛋白模式,其第一限制性氨基酸为含硫氨基酸,即蛋氨酸和胱氨酸,第二限制性氨基酸为异亮氨酸.认为,锡金龙竹鲜笋中富含矿质元素、微量元素和氨基酸,其粗蛋白质与粗纤维含量明显高于粗脂肪含量,属高蛋白、高纤维、低脂型且营养丰富、具有很高开发潜力的野生食用竹笋.     

甜龙竹高产高效模式林建设技术

甜龙竹为云南优质特产笋材两用大型丛生竹。其笋体洁白粗大,鲜甜可口,生熟均可食用,是我国30多种笋用竹中含糖量和谷氨酸含量最高的竹种;其竹材力学性能良好,是制作竹地板、家具、农具、生活用品等工农业产品的优质原料。据统计,全国已开发出甜龙竹笋材系列产品200多种,产品供不应求。其竹丛高大翠绿,叶片极大,又是优良的观赏竹种。1　形态特征甜龙竹主要品种有勃氏甜龙竹、版纳甜龙竹、马来甜龙竹和野龙竹4个品种。甜龙竹地下茎合轴丛生型;高一般为15～20ｍ,最高25ｍ,粗10～15ｃｍ,最粗可达20ｍ;稍头下垂,节间长30～50ｃｍ,节上下密被白色…     

琴叶风吹楠叶绿素提取方法比较

以琴叶风吹楠2年生苗木叶片为试验材料,比较叶面积法和称重法,95%乙醇、80%丙酮、丙酮-乙醇(2∶1)、试剂盒等4种提取液,和叶样研磨、不研磨处理对提取叶绿素含量的影响,试验结果:叶面积法得到的叶绿素a、叶绿素b和叶绿素总含量与SPAD值的相关系数远大于称重法;在直接浸提条件下,叶面积法4种提取液得到叶绿素总含量均值分别为3.9686、5.9621、6.0023、6.5956 mg/dm2,称重法得到叶绿素总含量分别为1.7353、2.4773、2.6695、2.7669 mg/g,提取效果排序为试剂盒丙酮-乙醇(2∶1)80%丙酮95%乙醇;混合提取液的提取效果均显著高于单一乙醇提取液,而混合提取液之间无显著差异;4种提取液提取研磨处理叶样的叶绿素总含量均值分别为6.088、6.513、6.429、7.278 mg/dm2,不研磨处理提取的叶绿素总含量分别为2.698、5.969、5.627、5.751 mg/dm2,研磨法提取效果较好。试验表明,用叶面积法,叶样研磨处理,以丙酮-乙醇(2∶1)为提取液的方法是较好的琴叶风吹楠叶绿素提取方法。     

黑荆树皮单宁组分研究(Ⅳ)——黑荆树皮多聚原花色素分子量及其分布研究

应用凝胶色谱法对江西赣州不同种源、不同树龄和不同采集高度的黑荆树树皮多聚原花色素的分子量及其分布进行了研究。结果表明黑荆树树皮的丙酮-水(7:3v/v)浸提物的分子量及其分布和种源,树龄和采集高度无明显的关系,其数均分子量(Mn)大都在1000～1100之间,分子量分布在580～3000(10％～90％重量分数计)。同时也测定了绿荆树(Acacia decurrens)、银荆树(A.dealbata)和台湾相思(A.Confusa)的数均分子量,相应为1390,1030和1661。     

勃氏甜龙竹笋苗兼用林林分结构优化模式初步研究

勃氏甜龙竹是一种优良的多用途竹种,近年来在许多适生区得到推广,其资源扩繁主要依赖于母竹移植。研究应用竹子生理整合性等生态学原理,以竹林林分结构调控为核心技术,采用不同林分结构组合,旨在探求笋苗兼用竹林经营模式。结果表明:(1)新造竹林有一明显的出笋数量和笋个体质量增长期,时间区段不同,前3a均快速增长,然后笋个体质量相对稳定,出笋数量仍较快增长。(2)竹笋产量主要影响因子是丛立竹数和立竹胸径,决定出笋数量和笋个体质量。出笋数量与丛立竹数正相关,与笋个体质量负相关。胸径与笋个体质量正相关,与出笋数量无相关。(3)合理的林分结构在450丛·hm-2时,丛立竹数为10株左右,胸径4～6cm。(4)经营类型经济效益明显,新造竹林第2年即有产出,第4年进入丰产期。