产几丁质酶烟草内生细菌的筛选及产酶条件研究

从健康烟草叶片中筛选出一株产几丁质酶活性较高的内生细菌FEC-1，经16SrDNA基因序列和菌株生理生化特征分析，确定该菌株为环状芽孢杆菌。对FEC-1菌株产酶发酵条件研究表明，该几丁质酶是诱导酶，最佳氮、碳源是酵母膏和2g／L单糖或二糖，多糖效果相对较差，最适初始pH为9．0左右，最适温度为30℃左右。在优化条件下，摇瓶培养60h时产酶达123．16U／mL。     

产几丁质酶内生放线菌的筛选及其对核盘菌的抑制作用

采用透明圈法对分离自9种植物的186株高产几丁质酶内生放线菌进行筛选,获得1株分离自黄精块茎的菌株GKSHJA,用液培法测定其对病原菌的抑制效果.结果表明:该菌株对油菜菌核病菌的抑制率为85.4%,该菌的粗酶液对其他10种常见植物病原菌菌丝生长具有不同程度的抑制效果;依据形态学特征、生理生化特性和细胞化学分析,该菌株被鉴定为黄色长孢链霉菌(Streptomyces longisporoflavus);对GKSHJA菌株产酶条件的研究结果表明,当碳源为1%的粉状几丁质,氮源为0.30%的牛肉膏,初始pH6,32℃培养6d时,培养液中几丁质酶活性较高.     

产几丁质酶细菌CHB101对稻瘟病菌的抑制作用

采用平板对峙及无菌滤液对稻瘟病孢子萌发影响等方法研究了产几丁质酶细菌CHB101对稻瘟病菌的抑制效果,结果表明该菌对稻瘟病菌有明显抑制作用,在PDA平板上25℃培养6d后抑菌带平均宽为11.0mm,并在显微镜下观察到了稻瘟病菌菌丝细胞质浓缩,细胞壁溃解和细胞质外渗等明显的几丁质酶作用现象。该菌培养后的无菌滤液对稻瘟病孢子萌发有强烈的抑制作用,并随滤液的浓度提高抑制作用越强。而且研究结果显示CHB101的抑菌谱宽,抑菌能力强。     

1株产几丁质酶的越橘内生拮抗细菌的研究

    从笃斯越橘的根部获得1株对12种受试病原真菌都具有拮抗活性的内生细菌DUT菌株,该菌株对菜豆炭疽病病原真菌(Colletotrichum lindemuthianum)抑菌率达70.5%,对2种越橘叶斑病病原菌拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis sp.)和柯氏帚梗柱孢霉(Cylindrocladium colhounii)的抑制率分别达68.6%和57.7%.通过对其形态特征观察、生理生化特性鉴定及16S rDNA序列同源性分析,鉴定该细菌为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens).对DUT菌培养特性研究结果表明,该菌培养8 h可达对数生长期;最适生长pH值为7.5;最适生长温度为28～30 ℃.利用双抗生素标记的DUT菌株回接越橘,该菌株可在越橘体内定殖.DUT菌能够产生几丁质酶,发酵36 h后粗酶液的酶活力可达20.11 U·mL-1.     

烟草赤星病菌GL-6产毒条件研究初报

 为确定烟草赤星病菌GL-6最佳产毒培养条件,作者就菌株的培养方式、培养液类型与产毒时期进行了研究,通过多因素试验方差分析,结果表明GL-6的最佳产毒培养条件为PD培养液静止培养或振荡培养14 d.     

不同基因型烟草品种接种赤星病菌后抗病蛋白的变化研究

不同基因型烟草品种接种赤星病菌种后,几丁质酶活性变化差别较大,抗病品种净叶黄的几丁质酶在0～12 h上升最快,整个过程都呈上升趋势,活性明显高于不抗病品种长脖黄和豫烟4号,长脖黄和豫烟4号12 h以后,几丁质酶活性上升较快,但低于净叶黄;不同基因型烟草品种在接种赤星病菌后的前12 h,抗病品种净叶黄β-1,3-葡聚糖酶活性上升速度比感病品种长脖黄和豫烟4号要快,而感病品种长脖黄和豫烟4号在12～24 hβ-1,3-葡聚糖酶酶活性上升较快,其上升过程比抗病品种晚了12 h,在整个过程中净叶黄的β-1,3-葡聚糖酶活性都比长脖黄和豫烟4号要高,这可能是净叶黄抗赤星病的原因之一。     

烟草黑胫病菌拮抗内生细菌的筛选

采用稀释分离法从黔南州采集的健康烟草组织中分离获得烟草内生细菌153株,通过平板对峙试验,从中筛选出2株对烟草黑胫病菌具有明显抑制作用的菌株LPN07和LPN09,其对黑胫病菌菌丝生长的抑制率分别为68.99%和65.97%。经16S rDNA序列分析,菌株LPN07和LPN09被鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)细菌。     

几丁质酶产生菌的筛选及其对小麦根腐病菌的抑制作用

以小麦叶部根腐病菌(Helminthosporium sativum)为目标菌,采用病菌细胞壁富集方法,从土壤中筛选出一株对该病菌有较强抑制作用的细菌菌株G0402,根据细菌形态和生理生化特征,确认为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis);该菌对小麦根腐病菌的菌丝生长和孢子萌发有较强的抑制作用。离体实验表明,该菌株所产几丁质酶粗提液对病斑扩展具有较强的抑制作用。电子显微镜观察结果表明,粗酶液能使菌丝出现扭曲变形,细胞壁明显的瓦解。     

甜罗勒根际细菌的筛选鉴定及其对烟草赤星病菌的抑制作用

从甜罗勒(Ocimum basilicum)根际分离得到的28株细菌菌株,通过平板对峙试验筛选出对烟草赤星病菌(Alternaria alternata)抑制作用最强的菌株LL-16,其平均抑菌带宽度为7.77 mm。对LL-16菌株进行生理生化鉴定和16S r DNA序列分析,表明其与Bacillus subtilis(JQ978219)聚类成为一支,支持强度达到71%,同源性为98.9%,鉴定其属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。采用菌落直径法和凹玻片法测定不同浓度的菌液、无菌滤液和灭活滤液对烟草赤星病菌的菌丝生长和孢子萌发的影响。结果表明,一定浓度范围内,菌液、无菌滤液和灭活滤液均能抑制赤星病菌丝生长和孢子芽管伸长,形成泡状芽管,致使病菌丧失侵染能力。同一种处理随着其浓度的降低对赤星病菌的抑制作用减弱。相同浓度的3种处理抑制作用从强到弱依次为菌液、无菌滤液、灭活滤液。     

嘧肽霉素对烟草赤星病菌的抑制作用

研究了嘧肽霉素对烟草赤星病菌的抑制作用.结果表明:在PDA培养基上共同培养时,抑菌圈直径为47.1mm;嘧肽霉素作用方式是抑制孢子萌发,使病菌菌丝生长受到限制,原生质聚集,后菌丝畸形,出现大量原生质外渗;该药液作用位点在菌体的细胞膜上,菌体失去侵染力.     

一株陈化烟叶附生细菌的筛选鉴定及其烟叶发酵效果

以K326(B2F))陈化烟叶为材料,采用平板分离技术分离培养出46株活体纯培养物,依次编号为CHJ1~CHJ46,纯化菌株通过蛋白酶和淀粉酶鉴别培养基筛选培养,鉴别筛出CHJ3和CHJ9两株菌具有淀粉酶水解活性,CHJ5、CHJ28和CHJ36三株菌具有蛋白酶水解活性。CHJ3、CHJ5、CHJ9、CHJ28和CHJ36五株菌菌悬液烟叶发酵试验表明,CHJ5菌株促进烟叶的发酵效果最好,发酵后的烟叶化学成分更加合理,评吸得分达到91分,与其他处理差异达显著水平。对菌株CHJ5的多相鉴定结果表明,CHJ5隶属于微杆菌属(Microbacterium)菌株,暂命名为Microbacterium sp. CHJ5。菌株CHJ5作为烟叶发酵微生物制剂开发的备用菌株,应用前景广阔。     

产共轭亚油酸乳酸菌的筛选及产物分析

为获得共轭亚油酸 (CLA)乳酸菌的菌种 ,从酸菜汁中筛选出 1株CLA生成能力较强的的乳酸菌 ,发酵液中CLA生成量为 2 6 7 5 μg·mL-1。此株为革兰氏阳性杆菌 ,过氧化氢酶阴性 ,4 5℃下生长 ,15℃基本不生长。基于生化试验和培养基成分的利用情况 ,鉴定为植物乳杆菌Lactobacillusplantarum。经气相色谱检测 ,该菌种合成的CLA产物为c9,t11/t9,c11 CLA和t10 ,c12 CLA的混合物。     

番茄菌根根际土壤产几丁质酶细菌的分离及其几丁质酶活性研究

对盆栽试验根际土壤微生物数量计数结果表明,接种丛枝菌根(AM)真菌苏格兰球囊霉菌(Glomus caledonium)的番茄菌根根际土壤的细菌、真菌、放线菌和产几丁质酶细菌总数显著高于非菌根根际土壤.从番茄菌根根际土壤中分离得到1株产几丁质酶细菌,该菌能够抑制黄瓜尖镰孢的生长.经16S rDNA和生理生化鉴定,该菌为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)菌株.该菌在pH 6～8范围几丁质酶活性没有显著差异,产酶的最适温度为35 ℃,最适装液量为1/5(250 mL三角瓶).在几丁质液体培养基中摇床培养125 h后酶活性与蛋白质含量达到平衡.表明:该菌株具有稳定的产几丁质酶能力,因此具有潜在的生物防治功能.     

油菜亲和性根际菌株的筛选及其促生效果

【目的】从油菜根际土壤中筛选油菜亲和性根际菌株,以期获得油菜专用优良特异性根际促生菌。【方法】采用常规稀释平板法从油菜根际筛选油菜根际细菌,提取油菜凝集素进行复筛,获得油菜亲和性根际细菌,测定复筛菌株的产铁载体、吲哚乙酸(IAA)能力,以及1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶和溶磷活性,采用盆栽试验评价菌株对油菜的促生效果。【结果】经过复筛获得油菜亲和性根际细菌32株,其中30株菌株具有产铁载体能力,16株菌株的产铁载体能力达到5+水平;29株菌株具有溶磷活性,7株菌株产量达到100.00μg/mL;16株菌株能产IAA,菌株P17的产量最高,达到30.48mg/L;7株菌株具有ACC脱氨酶活性。盆栽试验表明,有25株菌株具有不同程度的促生作用,N10和K6促生作用显著,22株菌株的促生作用达到施全肥水平。【结论】采用凝集素作为筛选工具可以快速获得大量与油菜具有特异亲和性的PGPR菌株,菌株N10和K6作为油菜特异性PGPR具有很大的应用潜力。     

产芳香物质益生菌筛选及其对谷物食品发酵效果的研究

从大列巴、馒头、发面饼、麻花、白酒酒曲、米酒中筛选的66种菌及实验室保存的12种菌种中筛选出3种产芳香物质益生菌种,分别加到面粉中用于发酵馒头、玉米粉发酵发糕及制造饮料、糯米粉中,用于发酵粘豆包及发酵饮料,以期进一步增加发酵产品风味,最终得到产品品质更优良的谷物发酵食品。结果表明,酿酒酵母适合发酵面食和发酵酒精性饮料,保加利亚乳杆菌适合面食增香和发酵谷物酸性饮料,嗜酸乳杆菌适合发酵谷物酸性饮料。     

宁波海域产纤维素酶海洋细菌的筛选

通过两种途径筛选来自宁波海域的具有纤维素酶活性的海洋细菌。在实验室原有的365株海洋细菌资源库中,通过刚果红染色法筛选到27株纤维素酶活性菌株,活性比例为7.40%;在以羧甲基纤维素钠为唯一碳源的分离培养基中,共分离到70株海洋细菌,经过刚果红染色筛选到68株活性菌,活性比例为97.14%。在分析透明圈直径与菌落直径大小的比值(Hc)时发现,两种途径筛选到的活性菌株在产酶能力上存在着显著差异。以羧甲基纤维素钠作为唯一碳源的分离培养基中,虽然活性菌株的比例高,但酶活力相对较小,Hc值大于2的菌株数为0;而从菌株资源库筛选活性菌株时,虽然活性比例小,但酶活力相对较高,其中有25.93%的菌株Hc值大于2,并且有两株Hc值高达5的菌株。研究亮点:近年来微生物来源的纤维素酶研究在国内外一直是研究热点,但宁波海域乃至浙江海域内却尚未开展相关研究工作。本实验从宁波海域采集海洋样品,比较了两种不同途径筛选海洋细菌来源的纤维素酶的研究结果,为海洋微生物的有效筛选提供了一定的参考价值。同时,实验中获得了7株活性较高的纤维素酶活性菌株,为今后的深入研究奠定了基础。     

植物抗镉内生细菌筛选及其对小麦幼苗耐镉能力的影响

[目的]筛选出抗镉内生细菌,为应用植物—微生物联合修复技术修复镉污染土壤提供优势菌株.[方法]对秦岭铅锌尾矿区内优势植物杠柳(Periploca sepium Bunge)和草木樨(Melilotus suaveolens Ledeb)的内生细菌进行分离,筛选出具有较高镉抗性的内生细菌,进行16S rDNA序列分析,对其Cd2+去除率、吲哚乙酸(IAA)活性、铁载体活性和1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶活性等生物学特性进行研究,并利用盆栽试验验证其提高小麦幼苗耐镉胁迫的能力.[结果]在800 mg/L Cd2+浓度条件下共分离筛选得到11株抗镉内生细菌(GS3、CR4、CG7、GR31、GR38、GR42、GR43、GR44、GR45、GR49和GR54),经鉴定均为芽孢杆菌(Bacillus sp.).生物学特性研究结果表明,在800 mg/L Cd2+浓度条件下11株内生细菌的Cd2+去除率在14.56%~79.45%,其中GR44的Cd2+去除率最高;7株内生细菌有IAA活性,其中GR44、GR49和CG7的IAA活性较高;11株内生细菌均有铁载体活性和ACC脱氨酶活性,其中GR44的铁载体活性最高,GR54的ACC脱氨酶活性最高.小麦盆栽试验结果表明,GR44能显著提高小麦幼苗的耐镉能力(P<0.05).[结论]筛选出的抗镉内生细菌GR44可作为植物—微生物联合修复技术中修复镉污染土壤的优势菌株,对矿区复垦具有一定意义.     

产生生物表面活性剂的耐冷菌的筛选及发酵条件优化

从常年堆积的秸秆堆下面的土样和牛场的堆肥中,筛选出13株能产生生物表面活性剂的细菌。其中有6株菌株为耐冷菌,其发酵液在低温环境下(0～10℃)仍具有较低的表面张力,且均属于假单胞菌属(Pseudomonas),其余属于土壤杆菌属(Agrobacterium)。对一株耐冷菌G3-6进行最佳发酵培养基组成和发酵条件进行了研究。经鉴定,其代谢产物是糖脂类。同时也对生物表面活性剂在作物生长中的作用进行了初步的研究。