红心柚和美国枸橼杂种后代对柑橘溃疡病的抗性评价

为了探究枸橼对柑橘溃疡病(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)的抗性遗传规律,以感溃疡病品种红心柚为母本,与抗溃疡病种质美国枸橼进行杂交,获得了F₁代杂种,并以F₁自交后获得了F₂代。对F₁杂种进行活体叶片注射接种鉴定,对所有F₂代253株进行离体叶片注射接种鉴定,随后对其中的225株F₂活体叶片进行注射接种鉴定,并对部分F₂代活体叶片接种后进行溃疡病菌定量分析。鉴定结果表明,红心柚和美国枸橼杂交获得的75个F₁全部为感病,没有抗感性状分离。对253株F₂植株离体叶片鉴定结果显示,76株表现为抗病,177株表现为感病。对225株F₂植株活体叶片鉴定结果显示,72株为感病,症状与感病品种‘冰糖橙’类似;118株为较感病,发病程度较‘冰糖橙’轻,与感病亲本红心柚的病症相似;10株为较抗病,抗性接近于抗病亲本美国枸橼;4株为抗病,抗性与抗病种质...     

柑橘溃疡病抗性相关的SSR标记筛选

以抗柑橘溃疡病的‘宜昌橙2586’与易感病的‘岭南沙田柚’进行杂交,随机选取F₁ 代材料80 株,开展溃疡病抗性田间接种鉴定。鉴定结果表明,溃疡病抗性在F1 代分离明显,若将免疫和高抗类型均视为抗病,中抗、中感和感病类型均视为感病,则抗感的分离比例接近1︰1。采用集合分离分析法BSA (Bulked Segregant Analysis),结合SSR 分子标记技术,筛选到1 个与柑橘溃疡病抗性相关的分子标记CCR-110。利用F₁ 代分离个体和公认的抗感材料对标记进行验证分析,发现该标记表现较好的抗性相关性。F₁ 群体相关分析表明,该标记与柑橘溃疡病抗性的相关系数为0.79;采用最大似然法计算重组率为9.38%±3.5%,通过 Kosambi 函数将其转换成图距单位（cM）,遗传距离为9.11 cM;感病的甜橙类、柚类、枳类没有此标记,抗病的金柑类、宜昌橙类、香橙类、宽皮柑橘类的多数材料出现此标记。     

柑橘溃疡病抗性育种专家系统构建

柑橘溃疡病严重危害我国柑橘产业的发展。进行溃疡病抗性育种是解决这一问题的根本。本文提出建立柑橘溃疡病抗性育种专家系统的设想。本专家系统根据福建省农业科学院果树研究所的育种经验设计而成,包含传统育种和现代育种2个部分,在此基础上,细分为抗感亲本的选择及选配、杂种鉴定、杂种抗性评价、已知抗病基因（R基因）的搜集、抗病候选基因（RGA）的获得、溃疡病抗性基因的克隆等6个模块,基本实现对柑橘溃疡病抗性育种的管理。     

160份葡萄种质资源溃疡病抗性鉴定

溃疡病是葡萄上的重要病害之一,严重影响其果实品质和产量,选育和推广抗性品种是科学防治溃疡病的方法之一。采用刺伤接种枝条法,对保存的160份葡萄种质溃疡病抗性情况进行离体鉴定及评价。结果表明：供试种质病斑长度范围是0.56～9.38 cm,共筛选出141份高抗材料、6份抗病材料;不同种群抗性顺序为野生（100.00%）>种间杂种（91.30%）>欧亚种（91.09%）,不同用途抗性顺序为加工（100.00%）、其他（100.00%）>鲜食（92.37%）>砧木（66.67%）。研究明确了由可可毛色二孢菌引起的溃疡病在葡萄中的危害情况,可为葡萄抗溃疡病育种和新抗源筛选利用工作提供参考。     

柑橘轮斑病抗性鉴定方法的建立

【目的】探究柑橘轮斑病最适宜接种条件,建立一种快速鉴定柑橘轮斑病抗性的方法。【方法】以柑橘轮斑病菌为接种体,运用离体叶片接种法,在室内不同温度下对离体柠檬叶片的不同部位进行接种,探讨柑橘轮斑病的最适宜接种条件。随后采用前期确立的接种体系对27个主栽柑橘品种进行轮斑病抗性评价。【结果】针刺接种易发病,最适宜的接种温度为10℃,最适宜接种部位为叶片背部。27个柑橘品种中沙田柚为免疫品种,091无核沃柑最易感病。【结论】研究建立了叶片背面针刺、10℃条件下保湿培养28 d的抗性鉴定体系。并利用此技术体系鉴定出柚类抗病力最强,杂柑类相对最感病,而橙类、柑类与橘类抗性处于柚类与杂柑类中间。     

番茄溃疡病病原的鉴定和抗性品种的筛选

以番茄"CM966"病株为试验材料,采用PCR的方法和形态学鉴定法对包头市采集的疑似番茄病株进行鉴定,并构建系统发育树,以期确定其分类地位;以17个番茄品系和品种为试验材料,采用与番茄溃疡病相关的QTL位点中贡献率最高的Rcm5.1对17个番茄品系及品种进行特异性PCR扩增,同时进行田间接种试验,探究番茄溃疡病抗性种质资源。结果表明:采自4个不同番茄种植田的疑似溃疡病病株,均携带番茄溃疡病菌。经过BLAST比对,其中4个病原菌的分离物与GenBank中已报道的密执安棒形杆菌密执安亚种(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis,Cmm)的一致性达90%以上,其中1个病原菌分离物序列与其它菌株亲缘关系较远;对17个番茄品系及品种进行检测,均不携带QTL位点中Rcm5.1点的抗性基因,但是田间接种试验表明有3个品系'山东荷兰'圣490'及'紫晶'表现为高抗,病情指数分别为2%、4%、4%。"160""CM966"'T54'及"普罗旺斯"表现为高感,病情指数均大于50%。     

不同柑橘属种质对柑橘褐斑病菌的抗性评价

【目的】探讨不同柑橘种质及‘梨橙2号’ב晚蜜2号’部分杂交种对柑橘褐斑病菌Alternaria alternata的感病程度及抗性分级标准。【方法】采用室内果实去皮接种观察不同种质的感病程度并根据系统聚类分析法、病斑平均直径法、病情指数法3种抗性评价方法对抗病性进行分级。【结果】大部分宽皮柑橘类种质易感病;甜橙类、柚类和柠檬类种质较抗病。参试的54份种质划分为高抗、抗病、中抗、感病、高感5类,未发现免疫种质;‘胡柚’、‘强德勒’、‘华盛顿脐橙’和‘梁平柚’4个品种为高抗品种。‘梨橙2号’ב晚蜜2号’杂交种抗病性出现分离,可以进行遗传分析。【结论】宽皮柑橘种质及其杂交种和葡萄柚易感病。     

大蒜紫斑病抗性鉴定方法的研究

 以G087 (抗病) 、G064 (中抗) 、G073 (感病) 大蒜为鉴别品种, 对大蒜紫斑病的侵染途径, 抗性鉴定的接种叶龄、接种浓度、接种部位, 接种后培养温度及调查时期等进行了研究。结果表明,苗期紫斑病菌通过伤口和自然孔口均可浸染大蒜植株, 而花芽鳞芽分化期只可通过伤口侵入。抗病性鉴定最适接种叶龄为5叶期; 最适接种浓度为1 ×106个·mL - 1 ; 离体接种法较活体接种法更简便快捷。离体接种鉴定时, 叶面接种和叶背接种鉴定结果无显著性差异; 接种后最适培养温度为21 ℃; 最适调查时期为接种后第6天。以G057 (抗病) 、G103 (中抗) 、G083 (感病) 大蒜为验证品种, 离体接种鉴定结果显示,建立的大蒜紫斑病抗病性鉴定方法可行, 能如实反映品种的真实抗性。     

大蒜白腐病抗性鉴定方法研究

 以汉中红皮蒜（抗病）和改良蒜（感病）为鉴别品种,对大蒜抗白腐病鉴定中的接种叶龄、接种部位、接种后培养温度及调查时期等进行研究。结果表明,苗期白腐病菌通过伤口和自然孔口均可浸染大蒜植株,而花芽鳞芽分化期通过伤口侵入。抗病性鉴定最适接种叶龄为6叶期,离体接种法较活体接种法更简便快捷。离体接种鉴定时叶面接种和叶背接种鉴定结果无显著性差异;接种后最适培养温度为18 ℃,最适调查时期为接种后7 ~ 8 d。以G005（抗病）、G023（感病）和G025（感病）大蒜为验证品种,离体接种鉴定结果显示,建立的大蒜白腐病抗病性鉴定方法可行,能反映品种的真实抗性。     

梨种质资源对腐烂病抗性的室内评价

采用离体枝条分生孢子悬浮液和菌丝块接种测定了11 种梨种质资源共211 份材料对腐烂病的抗性。结果显示：不同种质资源对病菌的侵入和扩展的抵抗均存在差异,抗侵入的占17.5%,抗扩展的占35.1%;同一种质资源对病菌侵入与扩展的抵抗之间也有差异,对病菌侵入和扩展抵抗一致的占30.3%,不一致的占69.7%;所有供试材料中对病菌侵入和扩展均为高抗（HR/HR）的占1.4%,抗病（R/R）的占4.7%,中等（M/M）的占12.3%,感病（S/S）的占10.9%,高感（HS/HS）的占0.9%;通过综合抗性评价发现,‘大香水’、‘杜梨’、‘江岛’、‘康德’、‘龙泉酥’、‘苹果梨’、‘山梨’、‘云红1 号’、‘早玉’和‘长十郎’为抗病（R/R）材料,‘新高’、‘武豆9 号’和‘荆杜3 号’为高抗（HR/HR）材料,‘新星’和‘新黄’为高感（HS/HS）材料。     

Evaluation of citrus somatic hybrids for tolerance to Phytophthora nicotianae and citrus tristeza virus

Somatic hybridization is a biotechnology tool that can be used in citrus breeding programs to produce somatic hybrids with the complete genetic combination of both parents. The goal of this work was to test the reaction of citrus somatic hybrids that may be useful as rootstocks to trunk and root infections caused by Phytophthora nicotianae van Breda de Haan (P. parasitica Dastur) and to citrus tristeza virus (CTV). The somatic hybrids evaluated were ‘Caipira’ sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck) + ‘Rangpur’ lime (C. limonia Osbeck), ‘Caipira’ sweet orange + ‘Cleopatra’ mandarin (C. reshni hort. ex Tanaka), ‘Caipira’ sweet orange + ‘Volkamer’ lemon (C. volkameriana V. Ten. & Pasq.), ‘Caipira’ sweet orange + rough lemon (C. jambhiri Lush.), ‘Cleopatra’ mandarin + ‘Volkamer’ lemon, ‘Cleopatra’ mandarin + sour orange (C. aurantium L.), ‘Rangpur’ lime + ‘Sunki’ mandarin (C. sunki (Hayata) hort. ex Tanaka), ‘Ruby Blood’ sweet orange (C. sinensis L. Osbeck) + ‘Volkamer’ lemon, ‘Rohde Red’ sweet orange (C. sinensis L. Osbeck) + ‘Volkamer’ lemon, and ‘Valencia’ sweet orange + Fortunella obovata hort. ex Tanaka. For P. nicotianae trunk and root infection assays, plants of the somatic hybrids, obtained from 9-month semi-hardwood cuttings, were evaluated and compared with diploid citrus rootstock cultivars after mycelia inoculation in the trunk or spore infestation in the substrate, respectively. ‘Cleopatra’ mandarin + sour orange, ‘Rangpur’ lime + ‘Sunki’ mandarin, ‘Cleopatra’ mandarin + ‘Volkamer’ lemon, ‘Ruby Blood’ sweet orange + ‘Volkamer’ lemon, ‘Rohde Red’ sweet orange + ‘Volkamer’ lemon, and ‘Caipira’ sweet orange + ‘Volkamer’ lemon had less trunk rot occurrence, whereas the somatic hybrids ‘Cleopatra’ mandarin + ‘Volkamer’ lemon, ‘Cleopatra’ mandarin + sour orange, ‘Caipira’ sweet orange + ‘Volkamer’ lemon, and ‘Caipira’ sweet orange + ‘Rangpur’ lime were tolerant to root rot. For CTV assays, plants of the somatic hybrids along with tolerant and intolerant rootstocks were budded with a mild strain CTV-infected or healthy ‘Valencia’ sweet orange budwood. Differences in average scion shoot length indicated that the hybrids ‘Cleopatra’ mandarin + sour orange and ‘Valencia’ sweet orange + Fortunella obovata were intolerant to CTV.     

分泌型Cecropin B 抗菌肽基因转化血橙提高其抗溃疡病水平

 为了利用Cecropin B（CB）抗菌肽基因提高柑橘对溃疡病的抗性,人工合成了两个含有信 号肽的Cecropin B 抗菌肽基因PR1aCB 和AATCB。洋葱表皮瞬时表达分析表明,与非分泌型CB 抗菌肽 相比,PR1aCB 和AATCB 抗菌肽在细胞间隙中优势积累。进一步构建了CaMV 35S 调控 PR1aCB 和AATCB 基因的植物表达载体,转化塔罗科血橙（Citrus sinensis Osbeck）上胚轴,获得转基因植株。GUS 组织化 学染色、PCR 和Southern blot 分析表明外源基因已成功整合入柑橘基因组。Real-time PCR 定量分析表明, 抗菌肽基因在转基因植株中成功表达。柑橘叶片离体抗性分析表明,转PR1aCB 和AATCB 基因植株的抗 性显著强于非转基因植株,其抗性水平与高抗品种‘南丰蜜橘’（C. succosa Hort. Ex Tan）和‘四季橘’ （C. madurensis）相当。     

我国梨腐烂病病原菌的初步鉴定及序列分析

【目的】为了对我国梨腐烂病病原菌进行初步鉴定和序列分析,【方法】从我国15个省(市)梨产区采集腐烂病样品并观察其田间危害症状,通过组织分离法分离获得168份梨腐烂病菌分离株,从中选取72份进行单孢纯化,共获得79份梨腐烂病菌纯化分离株;观察在PDA、25℃黑暗条件下病原菌菌落形态以及产孢体形态,并对其在梨枝条上产生的分生孢子器徒手切片置显微镜下观察其结构特征和分生孢子形态;采用菌丝块接种法测定梨腐烂病菌在‘翠冠’梨离体枝条上的致病力。对部分菌株rDNA-ITS进行PCR扩增、测序,利用BLAST软件与GenBank数据库进行序列相似性分析,并用MEGA 4.1和邻接法构建系统发育树。【结果】根据梨腐烂病菌各分离株在PDA上的菌落形态特征可分为Ⅰ型和Ⅱ型两种菌落类型,不同梨腐烂病菌分离株在PDA上产生多种类型的产孢体,不同梨腐烂病菌菌株在离体梨树枝条上的致病力存在差异,我国梨腐烂病菌的rDNA-ITS核苷酸序列一致率为99.98%~100%,与苹果腐烂病菌分别聚在同一亚组的两个分支。【结论】我国梨腐烂病病原菌存在不同的菌落类型,其rDNA-ITS核苷酸序列分析显示均为V.mali var.pyri。     

苹果种质资源对苹果树腐烂病抗性评价

为全面了解苹果种质资源对苹果树腐烂病的抗性情况,利用2个不同来源的苹果腐烂病菌株,连续2 a对204份苹果种质资源进行了枝条离体接种鉴定。结果表明,接种后不同的种质资源的发病率和严重度均表现出丰富的多样性。西洋苹果资源（Malus domestica Borkh.）中发病率较低-极低的品种和类型所占的比例较高（16.6...     

我国现行推广黄瓜品种及种质资源对细菌性角斑病的抗性评价

采用室内苗期人工喷雾接种鉴定方法,对我国现行推广的222 个黄瓜品种和52 份黄瓜种质
资源进行了细菌性角斑病的人工接种抗病性鉴定。结果表明,222 个黄瓜栽培品种中,3 个品种D07194
（金满田黄瓜）、D07207（绿丰园8 号青瓜）和D07251（新津春4）表现为高抗,占鉴定品种总数的1.4%;
56 个品种表现为抗病,125 个品种表现为中抗,30 个品种表现为感病,8 个品种表现为高感。从52 份黄
瓜种质资源中筛选出13 份高抗细菌性角斑病的材料,分别为D0618、C05-056、F02-07.04、C05-36、
D0327、C04-02、D0463、D0435-3、D0328、D0462、D2009-1、129 和北进,未发现对细菌性角斑病免
疫的材料。     

Genetic transformation of Citrus sinensis cv. Hamlin with hrpN gene from Erwinia amylovora and evaluation of the transgenic lines for resistance to citrus canker

Transgenic Citrus sinensis (L.) Osb. cv. Hamlin plants expressing the hrpN gene were obtained by Agrobacterium tumefaciens (Smith and Towns) Conn-mediated transformation. hrpN encodes a harpin protein, which elicits the hypersensitive response and systemic acquired resistance in plants. The gene construct consisted of gst1, a pathogen-inducible promoter, a signal peptide for protein secretion to the apoplast, the selection genes nptII or aacC1 and the Nos terminator. The function of gst1 in citrus was evaluated in transgenic C. sinensis cv. Valencia harboring the reporter gene uidA (gus) driven by this promoter. Histochemical analysis for gus revealed that gst1 is activated in citrus leaves by both wounding and inoculation with Xanthomonas axonopodis Starr and Garces pv. citri (Hasse) Vauterin et al. Genetic transformation was confirmed by Southern blot hybridization in eight cv. Hamlin acclimatized plants. RT-PCR confirmed hrpN gene expression in seven cv. Hamlin transgenic lines before pathogen inoculation. Some hrpN transgenic lines showed severe leaf curling and abnormal growth. Six hrpN transgenic lines were propagated and evaluated for susceptibility to X. axonopodis pv. citri. RT-PCR confirmed gene expression in all six hrpN transgenic lines after pathogen inoculation. Several of the hrpN transgenic lines showed reduction in susceptibility to citrus canker as compared with non-transgenic plants. One hrpN transgenic line exhibited normal vegetative development and displayed very high resistance to the pathogen, estimated as up to 79% reduction in disease severity. This is the first report of genetic transformation of citrus using a pathogen-inducible promoter and the hrpN gene. Further evaluations of the transgenic plants under field conditions are planned. Nevertheless, the evidence to date suggests that the hrpN gene reduces the susceptibility of citrus plants to the canker disease.