适于AFLP分析用的桃成熟叶片DNA提取方法

以多个野生桃秋季成熟叶片为材料,采用改进CTAB法对其基因组总DNA的提取进行了研究,并与其相应幼叶DNA的提取效果进行了比较分析。结果表明,从野生桃成熟叶片提取的DNA除产量低于幼叶外,DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均为1.8～2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物EcoRI-TA/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的野生桃成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。     

花椒DNA提取方法的研究

采用经过改良的SDS法和CTAB法对不同品种花椒进行基因组DNA提取,用核酸蛋白分析仪测量DNA浓度,将提取的基因组DNA进行ISSR分析,以期找到一种提取花椒总DNA提取的最优方法。结果表明:改良的CTAB法更适合花椒基因组DNA的提取,CTAB法比SDS法提取的DNA纯度好,所获得DNA样品的OD260/OD280比值在1.8~2.0范围内,琼脂糖凝胶电泳图谱显示条带清晰。     

四种改良CTAB法提取大叶朴基因组DNA比较研究

以大叶朴成熟叶片为试材,采用4种改良CTAB法提取大叶朴基因组DNA,并比较其提取效果。结果表明:用这4种方法均可获得没有发生褐变、完整性好的DNA。其中方法2(用了低浓度乙醇和高盐去多糖)和方法4(用了低浓度乙醇去多糖)去多糖的效果更好一些,但获得的DNA浓度较低;ISSR扩增结果表明,4种方法提取的DNA均可用于ISSR扩增,但方法2和3扩增的效果稍好一些。     

4种改良CTAB法提取石榴成熟叶片DNA的比较研究

为研究从成熟石榴叶片中提取高质量基因组DNA的方法,根据成熟石榴叶片组织中富含多酚、多糖的特点,以峄城中国石榴种质资源圃20种石榴成熟叶片为材料,分别采用改良CTAB法(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)4种方法提取成熟石榴基因组DNA,通过琼脂糖凝胶、紫外分光光度计分析、ISSR扩增等方法检测所提取DNA的质量.结果 表明,改良CTA...     

一种从果树成熟叶片提取DNA的方法

针对果树成熟叶片富含多糖、多酚及其它次生代谢物质的特点,以8个果树树种的秋季成熟叶片为材料,采用改进的CTAB法对其基因组总DNA进行了提取,并对得到的DNA进行了电泳检测、含量测定和AFLP分析。结果表明,该方法从8种果树的成熟叶片中均能提取出基因组总DNA,且DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均在1.8～2.0之间,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物组合为EcoRI-TA/MseI-CTT,EcoRI-TT/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的果树成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。     

香蕉种质资源的AFLP鉴别与分类中DNA模板的制备

在运用AFLP技术进行香蕉种质资源的鉴别与分类时,成功的关键之一是HMW基因组DNA的成功制备和避免降解,为了获得高纯度的HMW香蕉模板DNA和清晰的AFLP指纹图谱,以粉蕉为试材进行了用不同方法从不同植物体部位提取香蕉DNA的研究。结果表明,以香蕉未展开的幼叶、成熟叶、新根为材料提取的DNA量足以进行AFLP分析,但考虑到取材的方便性,最好选用未展开的幼叶或成熟叶;用改进后的SDS、CTAB法均可以获得HMW基因组DNA和AFLP指纹图谱,SDS法(用氯仿异-戊醇溶液抽提3次)提取的DNA量将近是CTAB法提取的DNA量的2倍,但SDS法提取的DNA纯度不如CTAB法提取的高。两种方法提取的DNA片段大小一致,大约在16kb左右。     

灰枣成熟叶片DNA提取及ISSR反应体系构建

针对枣DNA提取须用幼嫩叶片或组织培养幼苗这一限制相关实验顺利进行的问题,对常用的DNA提取方法CTAB法进行了改良,在破碎细胞之后,先加入2%β巯基乙醇,3%PVP,100mmol/LEDTA以去除成熟叶片细胞质中的多酚等次生物质,再加核裂解液CTAB以释放DNA。改良的CTAB法提取灰枣成熟叶片基因组DNA,分光光度法检测该法提取的样品DNA得率为55.1～79.1μg/g,D260nm/280nm为1.78～1.87;琼脂糖凝胶电泳检测的结果表明,该法提取的样品DNA分子量为23kb左右;该法提取的样品DNA可以被EcoRI和HindⅢ限制性内切酶进行切割。在此基础上构建了方便快捷的灰枣ISSR反应体系。     

适于SSR分析的树莓基因组DNA的快速提取

通过改良CTAB法对不同品种的树莓幼嫩叶片进行DNA提取,并对得到的DNA进行了电泳检测、含量测定和SSR分析.结果表明:该方法所提DNA的纯度和产率都较高,OD260/OD280比值均介于1.7～1.9之间,OD260/OD230比值介于2.0～2.5之间,无降解现象,RNA去除干净,产率均在50～130μg/mL之间.经SSR-PCR分析条带清晰,多态性好,说明此方法提取的树莓基因组DNA完全适于SSR分析.     

早食李基因组DNA提取方法的改进

以改进的CTAB法对三华李品种群中的早食李叶片基因组DNA的提取进行了试验.结果表明,改进的CTAB法适于高质量三华李品种群基因组DNA的提取,提取的早食李基因组DNA完整性较好,无降解,OD260/OD280的比值在1.9～2.0之间,多糖类杂质去除较为干净.经SRAP检验,条带清晰,多态性良好,说明改良CTAB法提取的基因组DNA质量较好,适于三华李高质量基因组DNA的提取.不同时期的不同成熟度的叶片都可以提取到基因组DNA,但以各期的嫩叶(梢)产量最高,效率最好.     

适于宁夏枸杞RAPD分析的DNA高效提取方法

采用优化的CTAB法提取枸杞叶片基因组DNA.利用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测所得DNA的浓度和纯度,并进行了RAPD初步扩增分析.DNA浓度在300 μg /mL,可达400 μg/g(叶片鲜重).OD260/OD280比值为1.44～1.6(理想值为1.8).结果表明:优化CTAB法所提取枸杞总DNA的纯度高、完整、量大,能满足RAPD扩增,条带清晰、稳定,并且提取操作的程序快速、简便,试验成本低、效率高.优化的CTAB法高效提取的枸杞基因组DNA不需经氯化铯梯度离心或柱层析纯化,可以直接用于RAPD分析.     

乙醇法提取枇杷叶总黄酮的研究

对乙醇法提取枇杷叶黄酮的工艺进行研究,采用单因素试验法对影响枇杷叶中黄酮类物质提取率的主要因素进行了考察,利用正交试验优化了提取黄酮类物质的最佳工艺条件。确定了枇杷叶总黄酮的最佳提取工艺为∶料液比1∶50,提取温度80℃,提取时间3 h,乙醇浓度50%。在最佳提取工艺条件下测得解放钟枇杷叶中总黄酮含量为0.3805%,回收率98.37%。     

枇杷属植物基因组DNA提取方法的改进及其应用

以枇杷属的普通枇杷和多种野生枇杷的叶片为材料,对枇杷的DNA提取进行了研究。针对枇杷富含多酚类 等次生物质的特点对枇杷DNA的提取步骤进行了改良处理:采用CTAB-蛋白酶K法加重复抽提,去除枇杷材料中 的相关次生物质,获得了高质量的DNA。所提取的DNA完全能满足PCR、RAPD、AFLP等一些分子生物学实验要 求。     

枇杷AFLP分析体系的建立与应用

为研究枇杷种质资源遗传多样性和亲缘关系的技术平台奠定基础,以来自5个不同国家43份枇杷种质为试材研究枇杷基因组AFLP反应体系。通过检测AFLP分析中DNA提取、酶切及连接、预扩增和选择性扩增的结果,对影响AFLP分析的主要因子进行分析,建立了AFLP分析体系。利用该体系并选用EcoRI—AGG+MseI—CAC引物组合对供试材料进行扩增,获得的条带清晰可辩,说明所建立的反应体系适合于枇杷进行AFLP分析。     

猕猴桃基因组DNA提取方法的研究进展

对猕猴桃基因组DNA提取的各个环节的进展进行综述。经分析得出,干叶片是一种较为理想的材料,容易保存,获得的基因组DNA质量也较高。提取方法主要有SDS和CTAB法,SDS法可以较好的将DNA与蛋白质分开,而CTAB法则可以较好的将基因组DNA与糖等杂质分离开;此外还有一些改良的提取基因组DNA的方法,都是比较实用的。可以根据不同的条件选取不同的方法。     

A high throughput DNA extraction method with high yield and quality

Background

Preparation of large quantity and high quality genomic DNA from a large number of plant samples is a major bottleneck for most genetic and genomic analyses, such as, genetic mapping, TILLING (Targeting Induced Local Lesion IN Genome), and next-generation sequencing directly from sheared genomic DNA. A variety of DNA preparation methods and commercial kits are available. However, they are either low throughput, low yield, or costly. Here, we describe a method for high throughput genomic DNA isolation from sorghum [Sorghum bicolor (L.) Moench] leaves and dry seeds with high yield, high quality, and affordable cost.

Results

We developed a high throughput DNA isolation method by combining a high yield CTAB extraction method with an improved cleanup procedure based on MagAttract kit. The method yielded large quantity and high quality DNA from both lyophilized sorghum leaves and dry seeds. The DNA yield was improved by nearly 30 fold with 4 times less consumption of MagAttract beads. The method can also be used in other plant species, including cotton leaves and pine needles.

Conclusion

A high throughput system for DNA extraction from sorghum leaves and seeds was developed and validated. The main advantages of the method are low cost, high yield, high quality, and high throughput. One person can process two 96-well plates in a working day at a cost of $0.10 per sample of magnetic beads plus other consumables that other methods will also need.     

越橘基因组DNA的快速提取及分析

为了从富含多酚、多糖及色素的越橘叶片中提取适用于分子生物学研究的高质量基因组DNA。以越橘幼叶为实验材料,比较了CTAB、SDS、高盐低pH值3种提取方法,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、RAPD-PCR、酶切等方法对获得的DNA进行了分析,结果表明,快速CTAB法所提取的DNA产量高、质量好,完全能够满足RAPD、PCR等分子生物学实验的要求。     

中国特有种虎榛SSR反应体系的初步研究

为了探讨适于中国特有种虎榛DNA提取的方法和建立虎榛的SSR反应体系,该试验以虎榛幼嫩叶片为材料,通过对CTAB法的改良,摸索出了适于虎榛DNA的提取方法,并以核酸产量、纯度、片断分布情况等指标进行了评价,同时应用16对欧榛SSR引物对虎榛进行了跨属转移,获得了清晰稳定的扩增图谱;上述结果表明获得的基因组质量较高,同时也表明反映体系对虎榛的SSR分析是可行的;并对影响虎榛基因组DNA的制备及扩增反应因素进行了简要的分析讨论。     

不同方法提取牛心朴子基因组DNA效果的比较研究

以牛心朴子的叶片、茎段、根为试材,采用改良的CTAB法Ⅰ、CTAB法Ⅱ和SDS法对其进行了基因组DNA提取效果的比较分析.结果表明.CTAB法Ⅰ从3个部位都能提出较高浓度的DNA,电泳条带完整清晰;CTAB法Ⅱ从3个部位都能提出DNA,条带明亮,但有明显拖尾现象;SDS法从叶片中能提出较高的DNA,但从茎和根中所提的DNA含量较小,电泳条带暗;3种方法所提的DNA其RAPD扩增效果以CTAB法Ⅰ最好,CTAB法Ⅱ次之,SDS法最差.叶片提取的DNA平均纯度、浓度和得率为最高,RAPD扩增效果最好,茎次之,根最低.说明CTAB法工是牛心朴子DNA的高效提取方法,不同部位以牛心朴子叶子提取的DNA得率高,扩增效果最好.