灵芝子实体中三萜酸的提取及其稳定性

研究不同提取方法对灵芝(Ganoderma lingzhi)子实体中三萜酸提取率的影响,结果表明,采用乙醇回流法所得三萜酸的提取得率最大,影响提取的关键因素为液料比、提取时间和提取次数;采用Box-Behnken设计及响应面分析法对这3个因素进行优化,并通过回归拟合,建立了预测灵芝三萜酸提取的多项式模型,可预测灵芝子实体中三萜酸提取率的回归模型如下:Y=0.33+0.003125 X1+0.021 X2-0.014 X_3+0.0005 X_1X_2-0.019 X_1X_3-0.005 X_2X_3-0.044 X_(12)-0.040 X_2~2-0.032 X_3~2。经响应面最优分析,获得3个因素的最佳水平为:液料比25∶1,提取时间2h,提取次数3次。经实际试验验证,在该条件下,灵芝子实体三萜酸提取率可达0.335mg/g,与预测值相比,实测值低1.18%。稳定性试验结果表明,在较低温度下(25℃以下),三萜酸化合物较稳定;但在50℃及以上温度条件下,三萜酸存在明显的降解现象,三萜酸的稳定性与温度及保藏时间呈负相关。     

灵芝三萜提取工艺优化

以灵芝T0菌株的菌丝体为原料,采用超声辅助提取三萜,在单因素试验结果的基础上,通过正交试验得到优化最佳工艺条件.结果表明,在乙醇浓度85％、提取时间30 min、料液比1:30的条件下,灵芝菌丝体三萜的平均得率达到了3.50％.该结果为优化灵芝菌丝体三萜的提取工艺提供了有利参考.     

灵芝三萜和多糖提取工艺研究

采用醇提法、水提法分别提取灵芝三萜和多糖,并与超声波辅助提取效果进行比较。结果,灵芝三萜的最佳提取条件为：采用10倍无水乙醇,在60℃提取60 min,提取2次,三萜提取率为0.76%;灵芝多糖的最佳提取条件为：用90℃热水提取90 min,料（g）液（mL）比1∶20,提取2次,多糖提取率为2.67%。超声波辅助提取,灵芝三萜和多糖的提取率可分别提高20.5%和13.2%。     

树舌灵芝发酵液中灵芝酸的提取及测定

利用有机溶剂萃取法提取树舌灵芝MP-01发酵液中灵芝酸,并用分光光度法测定提取液中灵芝酸的含量,确定了分光光度法测定的最住比色条件为：比色波长为520nm,5％香草醛-冰醋酸和高氯酸用量分别为0．2mL和1．0mL（在反应系统中浓度分别为1．0％和83％）,显色温度70℃,显色时间为25min,在此条件下测得醇溶物和醇沉物提取液中灵芝酸含量分别为0．022mg／g和0．049mg／g。     

固体发酵灵芝菌丝多糖的提取及组分分析

以苯酚硫酸法作为灵芝多糖的测定方法，研究了从固体发酵灵芝菌丝体中提取水溶性多糖的工艺，对浸提过程中的温度、时间、固液比及提取次数4个因素进行了单因素试验和正交试验，并利用Sephadex G-100凝胶色谱法和薄层层析法对主要组分GLPI进行了分子量测定和单糖分析。结果表明，灵芝多糖的最佳提取条件为浸提温度95℃，浸提时间40min，固液比1：20和提取次数为2次；GLP1分子量约为179900，初步判断为甘露聚糖。     

高压超临界CO_2提取灵芝三萜和甾醇成分的研究

为了研究常温高压超临界CO_2提取法提取灵芝三萜和甾醇成分的效果,采用不同高压的超临界CO_2提取法提取灵芝细粉中灵芝三萜和甾醇成分,通过高效液相色谱(HPLC)测定灵芝三萜和甾醇的含量,并与传统的乙醇回流提取法进行比较。研究表明,高压超临界CO_2提取工艺条件为:提取压力85 MPa,提取温度50℃,提取时间4 h,在此条件下灵芝三萜含量为1.35%,麦角甾醇含量为0.32%,而采用乙醇回流提取法提取的灵芝三萜含量为0.92%,麦角甾醇含量为0.2%。与传统乙醇回流提取法相比,采用高压超临界CO_2提取法,灵芝三萜含量提高了46.7%,麦角甾醇含量提高了60%。HPLC图谱表明,高压超临界CO_2提取法的提取物中三萜和甾醇不仅含量高,而且成分种类多。因此高压超临界CO_2提取法具有得率高、提取温度低、提取时间短等优点,为灵芝成分的提取提供了新技术。     

灵芝菌丝体液态深层发酵合成灵芝三萜动力学研究

基于Logistic方程和Luedeking-Piret方程,对灵芝(Ganoderma lucidum)菌丝体液态深层发酵合成灵芝三萜动力学进行研究。通过检测发酵过程的菌丝体量、基质浓度和产物浓度,进行最优参数估计和非线性拟合。得到菌丝体生长、产物灵芝三萜生成和底物总糖消耗的动力学模型和模型参数。对动力学模型的拟合曲线进行分析,发酵实验值与模型预测值能较好地拟合,所建立的液态深层发酵动力学模型能较好地反应灵芝菌丝体发酵过程。     

不同生长期灵芝子实体三萜酸和多糖含量测定

分别采用HPLC法和药典法测定不同生长期灵芝子实体中三萜酸和灵芝多糖的含量。HPLC法色谱条件:色谱柱为Alltech Alltima C_(18)柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.04%甲酸溶液,检测波长254 nm,流速1.0 m L/min,柱温15℃。结果:灵芝酸C_2、灵芝酸G、灵芝烯酸B、灵芝酸B、灵芝烯酸A、灵芝酸A、灵芝酸D、灵芝烯酸D和灵芝酸C_1的线性范围为5.9~42.0μg/m L,r为0.999,加样回收率为96.42%~104.14%。表现方法可行、重现性好,能定量测定灵芝中三萜酸和多糖的含量。     

灵芝菌丝体及发酵液中三萜化合物的研究进展

三萜类化合物是灵芝(Ganoderma lucidum)的关键药效成分之一.笔者综述灵芝菌丝体及发酵液中三萜化合物的主要组分、深层发酵技术和合成关键酶、抗肿瘤作用及其构效关系.     

灵芝三萜的生物活性及潜在应用研究

灵芝作为重要的药用真菌,其主要生物活性成分包括多糖、糖肽及三萜类化合物等,其中,灵芝三萜类化合物系高度氧化的羊毛甾烷衍生物,表现出强大且独特的生物活性及药理价值,目前灵芝三萜含量已成为《美国药典（United States Pharmacopoeia）》对灵芝质量的评价标准。综述目前关于灵芝三萜生物活性的研究成果,包括细胞毒性和抗肿瘤活性、抗氧化和保肝活性、神经保护作用、助眠特性、抗糖尿病活性等;概述灵芝三萜在功能性食品和保健品开发中的潜在应用价值,并探讨其未来的研究方向。     

灵芝连作障碍的研究进展

分析灵芝产业发展现状,指出连作障碍是灵芝段木栽培的最大制约因素。综述引起灵芝连作障碍的主要因素有土壤微生物种群特性的变化、灵芝产物的自毒作用,以及病原菌的增殖。相应的防控技术有覆沙出芝、采用液氨熏蒸灵芝连作土壤等,提出有换土与不换土多途径协同综合防治两种措施。     

两种无孢灵芝子实体醇提物的比较

以龙芝2号和鹿角灵芝两种无孢灵芝(Ganoderma lingzhi)子实体为原料,95%乙醇超声提取,对醇提物中的三萜进行了分析和体外抗肿瘤实验。结果表明,两种样品的醇提物得率分别为1.8%和3.7%,醇提物中三萜化合物含量分别为0.53%和1.16%;高效液相结果表明,鹿角灵芝中三萜的种类也多于龙芝2号。两种无孢灵芝的醇提物对肿瘤细胞K562和SW620的增殖均有一定的抑制作用,龙芝2号抑制肿瘤增殖的活性优于鹿角灵芝。     

不同日常食用加工方法对灵芝中活性成分利用的比较

为阐明日常的食用加工方法是否能充分利用灵芝(Ganoderma lingzhi)中的活性成分,用苯酚硫酸法和HPLC法分别检测龙芝二号子实体片经水煮、焖烧、水泡、酒浸四种加工处理的提取液中灵芝多糖和灵芝三萜含量,结果水煮、焖烧、水泡40min后多糖基本全部溶出,三萜溶出率分别为85.5%、83.1%、51.1%;50%的白酒浸泡7d后三萜溶出率为95.0%,而多糖溶出率仅为0.31%;用这些方法比较龙芝二号与菌草灵芝的处理结果,结果多糖和三萜溶出效果基本相同;通过比较,焖烧40min能使灵芝片中有效成分大部分溶出。     

灵芝中性三萜类成分的抗肿瘤作用

从灵芝(Ganoderma lucidum)子实体中分离纯化得到中性三萜部分,经HPLC检测发现主要有8个峰,与灵芝三萜酸性部分的峰基本不重叠。灵芝中性三萜部分对多种肿瘤细胞的增殖有抑制作用,并观察到可诱导肠癌SW620细胞凋亡。     

灵芝细胞中异源表达透明颤菌血红蛋白基因提高胞外多糖的产量

在灵芝(Ganoderma lingzhi)中异源表达透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin,VHb)基因,采用一氧化碳差异波谱分析的方法检测转基因菌株的生物活性,并对野生型菌株和工程菌株进行发酵,通过荧光定量PCR对灵芝多糖生物合成途径上的葡萄糖磷酸变位酶(α-phosphoglucomutase,PGM)、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(uridinediphosphate glucose pyrophosphorylase,UGP)和β-1,3-葡聚糖合酶(β-1,3-glucan synthase,GLS)3个基因的转录水平进行分析。研究表明:透明颤菌血红蛋白基因(Vitreoscilla hemoglobin gene,vgb)在灵芝中能够成功表达,并且具有生物活性;工程菌株中胞外多糖的最高产量达0.83g/L,比野生型菌株提高了88.6%;与野生型菌株相比,工程菌株中多糖生物合成途径上PGM、UGP和GLS基因的相对表达量分别是1.52、1.55和3.85。异源表达透明颤菌血红蛋白基因是提高灵芝胞外多糖产量的一种有效方法。     

灵芝发酵菌丝三萜类化合物含量的测定

建立了灵芝发酵菌丝三萜类化合物含量的检测方法。方法以齐墩果酸作为标准品．用香草醛一高氯酸发色体系进行比色．确定灵芝发酵菌丝三萜含量测定的实验条件．结果三萜类在20—140ug范围内有很好的线性关系．y=0．005x-0．019r=0．998。结论本法简便、准确、重复性好．可用于灵芝发酵菌丝三萜类含量的检测．以鉴定灵芝的品质及其产品的三萜含量。     

废弃葡萄枝蔓栽培灵芝的适宜菌株筛选

为筛选适合以葡萄枝屑替代部分木屑为原料进行栽培的优良灵芝菌株,采用果园废弃的葡萄枝屑为主料,对8个灵芝菌株进行栽培试验,考察产量和生物转化率等指标,并检测其子实体和孢子的灵芝多糖及三萜含量,进行综合评分。结果:子实体和孢子产量、生物转化率、子实体和孢子的三萜含量均以GH8为好,其综合评分为83.24,也最高;子实体多糖则以圆8较高。8个菌株的多糖和三萜酸含量均超出国家药典标准。因此GH8可作为葡萄枝屑栽培灵芝的适宜菌株。     

液体培养条件下温度对灵芝菌丝作用效果研究

采用食用菌菌丝液体培养的方法,分析了不同温度条件对灵芝菌丝生长的影响。结果表明:对比不同温度条件下灵芝菌丝干重,在设置的5个温度条件下,对灵芝菌丝生长的促进作用大小依次为:28℃25℃30℃23℃室温,并且恒温优于室内的变温。     

两项灵芝孢子粉培育、采集专利技术的实施效果

20世纪末全国孢子粉产量极低,仅占子实体产量的3.6%,《一种灵芝孢子粉培育和采集技术》和《一种灵芝孢子粉高产培育方法》两项专利技术的应用将这一比率提高到185%。介绍两项专利的技术特点;为促进专利价值实现,专利权人联合相关单位,采取多种推广措施,促进专利技术的实施,取得良好效果,两项专利公开16年平均每年灵芝孢子栽培9 600亩,累计培育灵芝孢子粉约10.7万吨,实现销售收入128亿元,利润高达45亿元。     

灵芝单核和双核菌丝培养条件的比较研究

研究不同培养条件对灵芝单核、双核菌株生长的影响,并分析其对环境适应力的差异。不同单核菌株间生长势出现一定程度的差异性,单核菌丝在水分、温度、pH值的适应能力上弱于双核菌丝,但在光照适应性上强于双核菌丝,单核菌丝生长势总体上弱于双核菌丝。灵芝单核、双核菌株都存在吐水现象,但单核对水分更敏感。灵芝单核菌株与双核菌株在水分、温度、pH、光照上都存在较大环境适应力差异,双核菌株对环境适应能力要强于单核菌株。