改良大豆子叶节再生体系的研究

采用大豆种子萌发5~6 d后的子叶节作外植体，对农杆菌介导的大豆遗传转化系统及其影响因素进行了研究。结果表明，将子叶节与农杆菌共培养60 h后放入含卡那霉素50 mg/L的诱芽培养基上，待苗长至4~5 cm后放入生根培养基中进行生根，最后移栽到培养土中，效果较好。对大豆遗传转化再生的主要因素，如大豆基因型、诱导出芽所需激素浓度、卡那霉素筛选压力等条件做了一系列的研究，建立了一个比较好的遗传转化系统，其转化率达到2.8%。     

甘蓝型油菜带节子叶再生体系的建立及遗传转化应用

优良再生体系的建立是农杆菌介导植物遗传转化的基础。本研究建立以甘蓝型油菜含部分子叶节的子叶为外植体的再生体系,该再生体系为:切取5日苗龄甘蓝型油菜含部分子叶节的带柄子叶为外植体,置于添加3 mg/L6-BA的MS基本培养基中培养5天,外植体再生出丛生不定芽,不定芽再生率为100%。基于新建立的带节子叶再生体系,通过农杆菌介导,成功地将用p FGC5941载体构建的Bn TFL1基因干扰载体转入甘蓝型油菜中,从播种到得到生根抗性苗,整个转化周期只需要60~70天,较传统甘蓝型油菜以不带节子叶为外植体100~130天的转化周期大大缩短。     

大豆子叶节植株再生体系的优化及转EPSPS基因的研究

为提高农杆菌介导转化大豆子叶节再生体系的遗传转化效率,优化了激素水平、基因型、抗生素及筛选压力等影响植株再生的多个因素,并用EPSPS基因转化大豆子叶节。结果表明,不定芽诱导培养基中6-苄氨基嘌呤(6-BA)浓度为1.6mg/L时,不定芽诱导率最高,黑农37和合丰35的不定芽诱导率较吉育91高,吲哚丁酸(IBA)诱导生根的适宜浓度为0.5~1.0mg/L。头孢霉素的最适抑菌浓度为500mg/L,草甘膦有效筛选压力为8mg/L,并获得转EPSPS基因的抗性植株。     

黄瓜子叶节离体体细胞再生体系研究

以华北类型自交系L04-203为材料,通过对外植体类型、不定芽诱导培养基、芽伸长培养基等进行研究,建立了以子叶节为外植体通过器官发生方式的黄瓜离体体细胞再生体系.研究表明:附带短下胚轴子叶节为最适外植体;BA/NAA比例对愈伤形成和再生频率有直接影响,NAA为零或低浓度时,在外植体切口处直接形成再生芽,随着NAA浓度增...     

基因型对大豆子叶节系统再生和转化的影响

以大豆子叶节为材料，分别以丛生芽分化率和子叶节区GUS阳性率为指标确定不同大豆基因型对外植体丛生芽诱导的影响及对农杆菌的易感性，探讨基因型对大豆子叶节系统再生和转化的影响。试验结果表明，大豆基因型对子叶节丛生芽诱导及对农杆菌的易感性均有较大影响。筛选出11个丛生芽分化率在70％以上的大豆基因型，筛选出最易感的大豆品种为黑农35，其次为绥农14和合丰35。     

纳米材料钼对大豆子叶节诱导的影响

为提高大豆子叶节转化效率,以豫豆22为试验材料,研究不同浓度(0,20,40,60 mol/L)纳米材料钼(Mo)对大豆子叶节的影响.结果表明,纳米材料钼对出芽、抽茎和生根都有促进作用,在0～40 mol/L范围内随着浓度的升高逐渐增加,40 mol/L时达到最大值,出芽率、抽茎率和生根率分别比对照提高了13.54％、13.18％和11.96％;在60 mol/L时,3项指标均下降,出芽率仍显著高于对照,抽茎率降至与对照无显著差异,生根受到抑制,生根率下降了4.76％,显著低于对照.因此,在0～40 mol/L浓度范围内,向培养基中添加纳米材料钼可以提高大豆子叶节的诱导效果.     

章丘大葱子叶再生体系建立及再生株倍性鉴定

以章丘大葱子叶为材料,研究了不同激素配比对愈伤组织诱导和继代、芽分化、芽点的伸长及根诱导的影响,并对获得的再生植株进行了鉴定。结果表明,诱导章丘大葱子叶产生愈伤组织、愈伤组织的继代培养、愈伤组织芽分化、芽点的伸长及诱导生根的最佳培养基及激素配比分别为：MS+2,4-D 2.0mg/L+KT 0.5mg/L、MS＋2,4-D 2.5mg/L＋KT 0.5mg/L、MS+2,4-D 0+KT 1.0mg/L、MS+KT 0.5mg/L和MS基本培养基;试管苗经驯化移栽后,共有22株成活,成活率为92%,对成活的再生植株进行形态学、叶片气孔及根尖染色体鉴定表明,共有3株发生变异,其中2株为外部形态上的变异,而另一株为染色体的加倍变异。     

不同黄瓜基因型子叶再生体系的建立

以6个不同黄瓜品种和自交系为试材,研究了基因型、激素(6-BA、ABA)对黄瓜离体子叶再生的影响。结果表明:不同基因型黄瓜之间的再生频率差异较大,吉林旱瓜为最佳基因型,在培养基M7(MS+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LABA+2mg/LAgNO3)上再生频率最高达97%,平均每外植体再生芽数为5.2;与对照相比,6-BA、ABA和AgNO3组合能促进芽的再生,显著提高再生芽数,其中6-BA是黄瓜子叶再生的必要激素,而ABA是促进子叶高效再生的激素;此外,MS培养基添加0.1mg/L6-BA能显著促进再生不定芽的伸长。     

小豆子叶节遗传转化体系建立

以小豆品种‘京农6号’子叶节为外植体进行离体再生,旨在建立‘京农6号’子叶节再生遗传转化体系。本研究对农杆菌菌株EHA105侵染子叶节的时间、诱导愈伤生成的适宜6-BA浓度、诱导不定芽的激素浓度及配比及诱导不定根生长的IBA浓度等影响子叶节再生遗传转化体系的因素,结果发现农杆菌EHA105侵染的最佳时间为50 min,GUS阳性率为67.5%;诱导愈伤的适宜6-BA浓度为2.0 mg/L,诱导率为91.4%;诱导不定芽的最适激素是5.0 mg/L ZT,出芽率为62.0%;而0.1 mg/L IBA诱导不定根的效果最好,生根率可达100.0%。本研究建立了小豆‘京农6号’子叶节外植体的遗传转化体系,获得了再生植株,为小豆的CRISPR/Cas9基因编辑技术在小豆功能基因组学和育种中的应用提供了技术参考。     

农杆菌介导大豆子叶节遗传转化的研究

直接以农杆菌转化系统为平台,以栽培大豆(Glycine max L.) 吉林35、中黄28、南农、铁丰29、铁丰30、开育12的子叶节为外植体,用LBA4404 农杆菌（含pPC-KSA质粒）研究了影响大豆子叶节转化的因素。结果表明,大豆品种之间转化存在着差异,吉林35转化率最高,平均转化率为2.16%,单次最高转化率达6.12%;中黄28次之,平均转化     

用根癌农杆菌介导法转化大豆萌动子叶节细胞

利用根癌农杆菌转化萌动大豆成熟子叶节获得了高频率的转基因大豆。从萌发12～16 h的大豆种子切取半片种子作为目标组织,对其子叶节组织进行伤处理后,接种于含有pGB载体的LBA4404农杆菌溶液。pGB载体含有除草剂（phosphinothricin, PPT）抗性基因bar和绿色荧光蛋白基因sgfp。将接种的外植体分别在含有3或5 mg/L PPT的芽诱导培养基、3 mg/L PPT的芽伸长培养基及2～4 mg/L PPT的根诱导培养基上进行了筛选。利用萌发5 d的外植体进行PPT浓度筛选的结果表明,芽诱导、芽伸长及根诱导阶段的PPT浓度分别为5、3及3 mg/L时,转化效率达到最大值,为5.3%。PCR和Southern杂交结果证实了外源基因稳定地整合在大豆基因组中。Northern杂交和GFP分析结果表明被整合的外源基因在大豆细胞中得到了稳定的表达。成熟植株对体外喷洒100 mg/L PPT溶液产生抗性。转化效率达8.9%。     

蓖麻子叶节遗传转化研究

利用前期构建的P450基因的RNAi植物表达载体侵染蓖麻受体材料,旨在获得转P450基因的阳性株。以蓖麻品种通蓖5号为试验材料,利用根癌农杆菌介导法转化蓖麻子叶节,研究影响子叶节遗传转化的若干因素。结果表明:子叶节对Kan较为敏感,适宜筛选质量浓度为250 mg/L;外植体预培养2～3 d,侵染用农杆菌菌液OD600=0.8,侵染时间10 min,共培养3 d,可获得较高的遗传转化效率。再生植株经PCR和Southern Blot检测,证明为转基因植株。     

大豆幼荚子叶原生质体培养及植株再生

本文研究了13个栽培大豆（Glycine max L.）品种原生质体培养的再生能力。从大豆幼荚子叶酶解游离原生质体,用Gellan Gum进行株状包埋,悬浮在含2,4-D 0.1-0.2mg/L,BA0.5-1.0mg/L的改良MS液体培养基中,原生质体培养3天后开始第一次分裂,以后持续分裂。供试基因型间的10天植板率差异显著,变幅为33-67%。30天内形成大量的     

辣椒子叶离体培养再生植株

随着收集到的８个商品辣椒品种的子叶外植体在ＰＤ培养基上形成芽丛，转移到ＰＥ培养基上伸长为具２－３个节的茎芽，茎芽在ＰＲ培养基上生根，得到了再生植株。芽分化率达１００％，移栽成活率１００％。多植体切除芽后回到ＰＤ培养基上的反复操作可重复诱导芽的分化，提高繁殖系数。     

西瓜再生系统的建立

以京欣一号、查理斯顿、巨人、井神小西瓜、黑崩筋５个品种苗龄６ｄ的子叶为外植体,建立了西瓜无性繁殖系和高效的培养体系,在ＭＳ＋ＢＡ５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ培养基上,芽诱导率为４６．６－９４％,转接到附加ＫＴ０．２ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上进行再生芽的伸长培养后,在ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ的根诱导培养基上的诱导率达９６．２％     

白果强丰番茄高效再生体系的建立

以番茄白果强丰的子叶和下胚轴为外植体,通过不同激素处理,诱导愈伤组织、不定芽及不定根的形成,以期建立白果强丰高效再生体系,为其遗传转化奠定良好的基础。结果表明,各处理对愈伤组织的诱导没有显著差别,出愈率均达到了93%以上。出芽率方面,以外植体为子叶的,以处理Ⅱ(MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.2mg/L)的出芽率最高,为93.33%;外植体为下胚轴的,以处理Ⅳ(MS+6-BA2.0mg/L+IAA0.2mg/L)出芽率最高,为80.00%。两者相比,子叶作为外植体的出芽率高。诱导不定芽生根时,两种处理生根率均为100%,但处理Ⅵ(MS+IAA0.5mg/L)不定根数多,根系较发达,为较优不定根诱导培养基。     

北海道特产小果树HASKAOP高效再生体系的建立

北海道特产小果树HASKAOP具有很高的营养价值,是重要的野生果树资源。但由于其是木本植物,苗木繁殖周期长。因此对其节间培养及其增殖的条件进行了探讨,建立了高效再生体系。结果表明:其最适宜的不定芽诱导培养基为1/2MS BA0.5mg/L和1/2MS CPPU0.15mg/L,并且CPPU的作用强于BA;根系最适宜的诱导培养基为1/2MS IBA0.5mg/L。生根率高达90%。     

无籽西瓜子叶离体培养及植株再生研究

以无籽西瓜黑蜜5号无菌苗子叶为材料,对组织培养植株再生的条件进行了详细的研究。研究结果表明：子叶芽诱导的最佳培养基配方为MS＋6-BA3.0mg/L＋NAA0.1mg/L。芽的诱导需要先在黑暗条件下启动,生长分化则须在光下进行。适宜的生根培养基配方为1/2MS＋IAA0.4mg/L和1/2MS＋IBA0.3mg/L。试验初步建立了适用于无籽西瓜遗传转化和快速繁育的子叶再生系统。     

不同基因型对白菜子叶培养不定芽再生的影响

探讨了基因型对白菜子叶培养不定芽再生的影响。结果表明，不同基因型的不定芽再生率和平均每子叶生芽数差异极大，在被检索的123个大白菜和20个小白菜品种中，芽再生率为0－97.5%，平均每子味生芽数为1.0-10.7个。17个大白菜和5个小白菜品种的不定芽再生率在80％以上。芽再生率与品种起源地、结球类型及熟性无相关。