鸡痘活疫苗抗原制备生产新旧工艺的比较

<正>在鸡痘活疫苗的抗原制备中,根据规程要求:鸡胚成纤维细胞的制备用0.25%的胰酶水浴消化25~35 min,玻璃珠摇撞制备细胞悬浮液,24 h形成致密单层后接毒,营养液为乳汉液,血清浓度为3%~6%。按此方法组织生产,出现CPE(特异性细胞病变)时间不规律,效价不稳定的现象。在本次试验中,试验人员采用磁力搅拌器和TV液(胰酶-ED-     

小鼠胚胎干细胞裂解液诱导鸡胚成纤维细胞发生重编程的研究

本研究采用小鼠胚胎干细胞(ESCs)裂解液与鸡胚成纤维细胞共孵育,通过形态学观察和多能性检测,旨在探讨小鼠ESCs裂解液逆转化鸡胚成纤维细胞为多能干细胞的可行性。结果表明:与小鼠ESCs裂解液共孵育的鸡胚成纤维细胞均变为圆形细胞,形成了42.33个细胞集落;经AKP染色以及Oct-4和SSEA-1免疫细胞化学染色,均呈阳性反应,表现出一定的多能干细胞特性;经核型分析表明这些细胞来源于鸡胚成纤维细胞。单独的重编程操作过程和与鸡胚成纤维细胞裂解液共孵育均无法将鸡胚成纤维细胞重编程为具有ESCs特征的细胞,说明参与重编程鸡胚成纤维细胞的物质来源于小鼠ESCs裂解液。因此,ESCs裂解液诱导体细胞重编程逆转化为多能干细胞的作用能够在小鼠和鸡之间发生。     

鸡胚成纤维细胞的常用制备方法

在工业化生产和实验室中,常用鸡胚成纤维细胞(Chicken Embryo Fibroblast CEF)来进行某些病毒的复制。鸡胚成纤维细胞的制备需要将鸡胚以无菌手术取出,用机械的方法将鸡胚剪成小块;洗去红细胞后用胰蛋白酶消化,再采取一些方法将之分散成单细胞悬液;洗去胰蛋白酶,将细胞悬浮在生长液中,计算细胞悬液中的活细胞数(一般情况下,每毫升生长液中含1×10~6至1.5×10~6个活细胞适宜于静止培养,而转动培养则需要2×10~6/ml至3×10~6/ml),分装到合适的培养器内,置温箱或温室内让细胞     

蜂王胎抗衰作用研究初报

以蜂王胎代替细胞培养液中的犊牛血清，观察鸡成纤维细胞的贴壁生长情况。结果表明：１０％的蜂王胎添加物不但可代替犊牛血清，而且可延长细胞的生长时间。提示其对人体抗衰的潜在作用。     

鸡胚成纤维细胞传代的探讨

鸡胚成纤维细胞传代的探讨王建华（江西生物药厂）鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）能否传代这一问题，有的资料说不能传代。为了减少生产用蛋，降低产品的成本，在生产中，对ＣＥＦ能否传代进行了试验性探讨。１材料犊牛血清、７．５％ＮａＨＣＯ３、双抗、０．５％的细胞生长液...     

鸡胚成纤维细胞的冷冻保存

试验研究了不同的冷冻保护液、不同的平衡方法对鸡胚成纤维细胞活力的影响及细胞复苏后的培养情况。结果表明,冷冻保护液Ⅰ和冷冻保护液Ⅱ对细胞的保护效果差异不显著(P>0 05),冷冻保护液Ⅲ对细胞的保护效果优于冷冻保护液Ⅰ和冷冻保护液Ⅱ,并且差异极显著(P<0 01);平衡方法Ⅰ和平衡方法Ⅱ对细胞的存活率影响差异不显著(P>0 05)。复苏后的鸡胚成纤维细胞于体外培养时存在贴壁迟缓,前期生长速度较慢等现象。     

浓缩和纯化操作对口蹄疫A型弱毒病毒含量的影响

使用引进的美国Pall公司微滤、超滤和过滤系统对口蹄疫A型弱毒病毒的细胞培养液进行除细胞碎片纯化、病毒的浓缩和除菌等操作，取样进行病毒含量测定，以探索细胞培养病毒液除细胞碎片、浓缩和除菌后病毒含量的变化规律。结果显示，浓缩前液量少于21700mL时，经除细胞碎片微滤、超滤浓缩和除菌过滤后，毒价严重下降，原液、除碎片微滤液、10倍浓缩液、10倍浓缩除菌过滤液、滤出清液的LD50／0．2mL分别为10^7.5、10^6.5、10^7.5、10^7.25、10^2.0；浓缩前液量多于203200mL时，原液、除碎片微滤液、10倍浓缩液、10倍浓缩除菌过滤液、滤出清液的LD50／0．2mL分别为10^7.5、10^7.5、10^8.25、10^2.0，表明通过使用浓缩技术来提高A型弱毒细胞培养液的病毒含量是可行的。     

蛋源无血清培养基培养鸡类囊胚和鸡、人成纤维细胞的研究

试验采用新鲜种蛋(A0组)和无精蛋(B0组)蛋清培养基培养鸡类囊胚、鸡成纤维细胞和人成纤维细胞；比较了以类囊胚形式存在的鸡胚胎干细胞和鸡成纤维细胞、人成纤维细胞在利用蛋清组分上的区别。结果显示：(1)与B0组相比,A0组培养的类囊胚和鸡成纤维细胞表现出了生长优势,而这点在人成纤维细胞没有体现。(2)类囊胚形成期集中利用蛋白质,其中卵清蛋白的相对量下降最快；人成纤维细胞的蛋清培养液中胰蛋白酶抑制剂显著下降,且也发生在培养早期；鸡成纤维细胞的培养液组分在整个过程中都无显著变化。     

一种优化鸡胚成纤维细胞制备方法及生长曲线测定

鸡胚成纤维细胞（CEF）的来源方便,制备简单,耐受性好,且适合于许多病毒的生长繁殖,因此被广泛用于疫苗的生产、病毒的培养以及一些细胞和分子生物学的研究。然而传统的鸡胚成纤维细胞制备方法存在制备时间长、死细胞较多和细胞贴壁慢的问题。笔者根据经验摸索出一种实验室快速制备CEF的简便方法,并通过台盼蓝染色用细胞计数法绘制了原代CEF及次代CEF的生长曲线。该简便方法的建立为实验室快速制备高质量高纯度的鸡胚成纤维细胞提供了方便,同时对其生长曲线的测定也为进行基因转染方面的研究积累了资料。     

鸡胚成纤维细胞原代培养与纯化的初探

本文利用鸡胚成纤维细胞(CEF)进行原代培养与纯化,了解鸡胚成纤维细胞在一定生理状态下所需的各种条件,从而控制培养基的成分,选择最适合于鸡胚成纤维细胞生长的各种因素。在此实验中消化液的浓度及消化的时间是关键,此外实验过程的无菌也是保证实验成功的重要因素。     

不同pH值对鸡胚成纤维细胞培养的影响

利用不同的pH对鸡胚成纤维细胞进行培养,观察细胞在不同pH条件下的生长状况,研究不同pH对于细胞培养的影响。设置pH值为6.4、6.8、7.2、7.4、7.6和7.8的六个培养条件分别对鸡胚成纤维细胞进行培养,同时做重复对照,给每组中生长良好的细胞接毒,观察其接毒后在不同pH下的生长状况。通过观察可以看出细胞的耐酸性要强于耐碱性,而且鸡胚成纤维细胞在7.4～7.6的范围内生长情况最为良好和稳定。     

鸡传染性法氏囊病毒增殖和纯化方法的研究

本试验通过IBDV标准毒株(IBDVBC6/85F4)和IBDV河北分离株分别接种于SPF鸡胚以及鸡胚成纤维细胞(CEF)。吸取接毒后2～5天内死亡鸡胚的尿囊液和绒毛尿囊膜,及细胞病变达到80%时的细胞培养液。经反复冻融,利用氯仿沉淀病毒,聚乙二醇6000浓缩病毒,蔗糖梯密度低温超速离心和葡聚糖G-200凝胶柱过滤等方法纯化病毒。经分光光度计检测,病毒的蛋白含量为1.377毫克/毫升,琼脂扩散试验证实被检抗原为IBDV。     

鸡卵清蛋白基因5′调控序列表达载体的构建及其在鸡原代输卵管上皮细胞及鸡成纤维细胞的表达

将氯霉素乙酰转移酶（CAT）基因与鸡卵清蛋白基因上游调控序列融合，构建了pCAT-3-OVP(鸡卵清蛋白基因5′调控序列）表达载体。将构建的载体与脂质体混合后制备转染液，转染鸡原代输卵管上皮细胞和鸡成纤维细胞进行瞬时表达。结果表明，在鸡原代输卵管上皮细胞，转染后48h表达量最高，为0．67μg/L;而在鸡成纤维细胞，不论有无类固醇激素存在，均不表达。结果提示，在输卵管细胞中存在细胞特异性转录因子。     

呼肠孤病毒弱毒S1133株特性研究

呼肠孤病毒S1133株细胞毒在鸡胚成纤维细胞(CEF)上生长良好，每0．1mL病毒液可达10^6.5～10^7.5TCID50。以10^4.5TCID50／只接种3周龄SPF雏鸡无致病性。免疫雏鸡可抵抗强毒足垫攻击，未免疫对照鸡则不能抗强毒攻击。表明该毒株安全且具有良好的免疫原性。     

不同细胞培养基细胞培养动力学比较试验

应用宜兴赛尔生物化工厂产１９９、Ｆ－１０、１６４０和ＤＭＥＭ细胞培养基与美国Ｓｉｇｍａ公司产１９９、Ｆ－１０、１６４０和ＤＭＥＭ细胞培养基分别配制细胞培养液，培养ＳＰ２／０和Ｖｅｒｏ细胞系及原代鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），做细胞培养动力学比较试验。比较这两种来源的细胞培养基对细胞生长的形态、分裂速度及鸡马立克氏病毒（Ｍａｒｅｋ＇ｓｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ．ＭＤＶ）疫苗毒株ＨＶＴ－ＦＣ１２６和ＲｉｓｐｅｎｓＣＶＩ９８８在ＣＥＦ单层上增殖量的差异。研究结果表明，四种国产细胞培养基与对应的四种进口培养基对细胞生长及病毒增殖的影响无显著差异     

不同制备方法对鸡胚成纤维细胞产量的影响

采用传统法、半胚法和全胚法制备鸡胚成纤维细胞（CEF）单层，在同等条件下均以成纤维细胞为主，并伴有少量的上皮细胞，仅有全胚法含有极少量的肝细胞；培养时细胞贴壁和生长状况3种方法无明显差异（P＞0.05)；CEF的产量，半胚法明显高于其他2种方法。     

进口法国种鸽新城疫病毒的分离和鉴定

用鸡成纤维细胞和鸡胚从30只进口法国种鸽中分离出一株病毒,细胞培养物的HA效价为3log2,尿囊液的HA效价为4log2,新城疫阳性血清能抑制这种血凝作用,HI效价均为7log2,禽流感阳性血清不能抑制这种血凝作用.通过透射电镜观察、毒力测定等最终确认,分离出的病毒为新城疫病毒.     

两种制备鸡胚成纤维细胞的方法比较

在伪狂犬病活疫苗和法氏囊病毒GT株生产上均需制备鸡胚成纤维细胞.在制备鸡胚成纤维细胞过程中,对用连续消化法与玻璃珠分散法两种方法进行比较,结果表明:用玻璃珠分散法制备细胞,易使死亡细胞数大幅增加,在生产中加大成本,并在旋转培养中,影响活细胞的贴壁及生长;而采用胰酶连续消化法制备的细胞,贴壁较好、成活率高,但比前者工作量大;结合两者优点,找出了制备鸡胚成纤维细胞最佳的方法.     

松乳菌多糖在鸡胚水平抗新城疫病毒研究

对松乳菌多糖(胞内多糖和胞外多糖)在鸡胚水平上进行了抗新城疫病毒研究。接种致死量的新城疫病毒和不同浓度松乳菌胞内多糖(或胞外多糖)混合液到9～11日龄鸡胚。通过测定鸡胚平均死亡时间(MDT)、死亡鸡胚尿囊液血凝效价评价多糖对病毒的抑制作用。结果表明松乳菌胞外多糖对病毒没有抑制作用,不能延长新城疫病毒对鸡胚的致死时间,也不能降低血凝效价;松乳菌胞内多糖对新城疫病毒有一定的抑制作用,减缓了鸡胚的死亡,降低了血凝效价,但是对病毒不能完全杀灭。     

鸡痘病毒诱发细胞融合现象的观察

鸡痘病毒在鸡胚绒毛作囊膜及鸡胚成纤维细胞上交替传代后，用本试验提供的条件，可以明显诱发鸡胚成纤维细胞的融合，形成多量多核细胞。经鸡胚及实验鸡回归试验证实，这种细胞融合现象确系鸡痘病毒所为。