牛冷冻精液的制作程序

1采精与精液品质检查按照牛冷冻精液国家标准的要求选择公牛,并检疫无病。采得的精液,精子活率不低于0.6,精子密度不低于8亿/毫升,精子畸形率不超过15%。2精液的稀释用牛冷冻精液稀释液,以原精液的活率和密度确定稀释的比例。按国家标准,以解冻后每个输精剂     

细管冷冻精液生产工艺流程

细管冷冻精液的生产包括:采精、精子活率密度评定、经2次稀释、降温、、平衡、精液细管分装、冷冻、精液的予贮及入库等工艺流程如图1所示.     

南阳黄牛种公牛精液品质观察报告

南阳地区冷冻精液中心站于1979年开始生产南阳黄牛颗粒冷冻精液。先后对七头种公牛进行了精液品质观察,共采精609次,冻结412次。种公牛体况中等,精液品质中上等。观察项目有:一、精液品质基本指标根据七头种公牛412批次统计:射精量在1—9.2毫升范围内,精子活率0.6—0.8,精子密度6—10.4亿/毫升,pH 值在6.2—6.5之间,异态精子率一般在15%以下,精液的色泽呈乳白、淡黄、淡白三种,详见表1,不同月份气温对精液品质影响见表2。     

新西兰兔精液冷冻保护剂的筛选

本试验的目的是分析在新西兰兔精液冷冻保存稀释液中分别添加不同浓度的海藻糖、透明质酸、维生素E(Ve)、超氧化物歧化酶(SOD)对兔精液冷冻保存效果的影响,以冻后精子活率、质膜完整性、顶体完整率等作为质量评定指标,筛选出效果较好的新西兰兔精液的冷冻保护剂种类及浓度。结果表明,精液冷冻保存稀释液中添加3种浓度的海藻糖均未提高兔精液冷冻后的精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05);添加0.5%和1%的透明质酸提高了兔精液冷冻后的精子活率(P0.05),但各组间质膜完整率和顶体完整率无显著差异;添加2 g/L Ve提高了兔精子4℃平衡后的活率、冷冻后精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05);添加4 000 IU的SOD提高了兔精子4℃平衡后的活率、冷冻后精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05)。结果证实,在新西兰兔精液冷冻保存稀释液中添加适宜浓度的Ve和SOD可提高兔精液冷冻后的精子活率、质膜完整率和顶体完整率。     

猪精液冷冻技术研究

本研究取得突破性进展。每次30毫升以上块状和15毫升塑料安瓿精液冷冻获得成功;利用电镜观察证明,冻后精子顶体完整率与受胎率呈显著正相关;研制优选出的冷冻、解冻稀释保护液及成套冷冻技术操作程序、其冻精活率0.5左右、情期受胎率70.59％,窝产仔8.34～9.73头。     

近交五指山小型猪精液冷冻保存技术的研究

用液氮熏蒸法在氟板上制作冻精颗粒,以解冻后的精子活率、活力和质膜完整性为判定指标,比较4种冷冻稀释液及不同冷冻-解冻程序对五指山小型猪精液冷冻的效果。结果表明:①Ⅳ号冷冻稀释液冷冻解冻后精子的活率(0.610±0.036)、活力(0.427±0.025)和质膜完整性(0.503±0.015)均显著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ号冷冻稀释液(P<0.05)。②实验中精液在4℃冰箱中平衡降温2 h的精液精子活力、质膜完整性均好于在17℃平衡3 h再放入4℃冰箱中平衡2 h的解冻效果,而且精子活率差异显著(P<0.05)。③湿解法的效果优于干解法。     

不同浓度的低密度脂蛋白对犬精液冷冻效果研究

为观察低密度脂蛋白(LDL)对犬精液的冷冻效果,试验在江苏农牧科技职业学院犬舍选择5只健康贵宾犬雄犬,采集精液并将检测合格的精液混合后平均分为5份,分别用含0、 6%、8%、10%和12%LDL的5种犬冷冻精液的配方(分别为配方1组、配方2组、配方3组、配方4组、配方5组)处理犬精液,观察5组冻精解冻后精子活率、畸形率、精子膜完整性、精子DNA完整性以及精子的各项运动参数。结果表明:添加8%LDL的配方3组和添加10%LDL的配方4组精液冷冻效果较好,精子活率、畸形率、精子膜完整性、精子DNA完整性和精子运动的各项指标均优于其他组。说明精液冷冻稀释液中添加8%或10%LDL可以提高犬精液的冷冻效果。     

绵羊冻融精子过氧化氢酶活性变化的研究

为了研究冷冻保存对绵羊精液过氧化氢酶(CAT)活性的影响,从而提高绵羊冷冻精液的品质,试验采用CAT比色法对冷冻保存前后绵羊精子和精清中CAT活性进行了研究。结果表明:与冷冻前相比,冷冻保存后绵羊精子中CAT活性极显著降低(P0.01);精清中CAT活性极显著升高(P0.01)。说明冷冻保存对绵羊精子和精清中CAT的活性造成了很大影响;冷冻后精子活率与精子CAT活性呈显著正相关(r=0.887,P0.05),冷冻前精子活率与精子CAT活性呈极显著正相关(r=0.987,P0.01)。说明绵羊精子中CAT的活性与精子活率密切相关,可作为绵羊精液品质评价的参考指标。     

辽宁绒山羊细管冷冻精液研究

本实验研究了辽宁绒山羊细管冷冻精液的稀释液及制作工艺。结果表明:离心洗涤去精清可以提高冷冻-解冻后的精子活率,与不去精清的对照组相比差异显著(P<0.05);以等体积乙二醇替代甘油作防冻剂制作的细管冷冻精液,解冻后的精子活率和顶体完整率显著(P<0.05)高于甘油作防冻剂的对照组。实验还证明,含Tris的柠檬酸盐缓冲液对提高冷冻后精子活率与顶体完整率具有良好的作用。     

我国猪精液冷冻技术研究现状

我国于1974年开始研究猪精液冷冻保存技术,内容主要有:冷冻精液稀释液、平衡时间、冷冻时间、冻后精子活率及输入有效精子数等项目。结果解冻后活率在30～60％之间。1975～1983年共输精21859头母猪,情期受胎率达56.25％(33.30～74.78),窝产仔为8.18头。试验证明我国猪冷冻精液的保存技术有所进展。     

冷冻方法对杜泊绵羊冷冻精液品质的影响

试验对绵羊精液分别采用液氮熏蒸冷冻法和冷冻仪冷冻法进行冷冻,通过测定精液解冻后精子活率、顶体完整率、质膜完整率和谷草转氨酶活性及乳酸脱氢酶活性来比较不同的冷冻方法对解冻后精液品质的影响;通过测定精液稀释后、平衡后、冷冻仪法冷冻后的酶活性来比较谷草转氨酶与乳酸脱氢酶在不同阶段的释放量。结果表明,采用冷冻仪法冷冻后的精子活率和质膜完整率极显著高于液氮熏蒸冷冻法（P<0.01）;冷冻仪法冷冻后的谷草转氨酶和乳酸脱氢酶活性极显著低于液氮熏蒸冷冻法（P<0.01）;精液稀释后的谷草转氨酶和乳酸脱氢酶活性极显著低于精液冷冻后的活性（P<0.01）。表明采用冷冻仪冷冻法的绵羊精液品质好于液氮熏蒸冷冻法。精子中谷草转氨酶主要在平衡阶段释放,而乳酸脱氢酶主要在冷冻阶段释放。     

在4℃降温平衡过程中0.2g/L咖啡因与精子共孵育时间对猪颗粒冻精质量的影响

实验旨在探讨在猪精液于4℃平衡2 h过程中0.2 g/L咖啡因与精液共孵育2 h、1 h和0.5 h,对颗粒冻精解冻后精子活率、活力、质膜完整性和顶体完整性以及解冻后精子体外存活时间等指标的影响,以期进一步提高猪颗粒冻精质量。实验结果表明,在精液冷冻之前,咖啡因不同平衡时间组的精子活率和活力都呈现出升高趋势,但与对照组差异不显著;咖啡因与精液共孵育2 h、1 h和0.5 h组的精子顶体完整率和质膜完整率显著低于对照组,前3组之间差异均不显著。而颗粒冻精解冻后,咖啡因与精液共孵育2 h、1 h和0.5 h组精子活率和活力均显著高于对照组,其中共孵育1 h组显著高于其他3组(P0.05),共孵育2 h组和0.5 h组间差异不显著(P0.05);共孵育2 h组精子顶体完整率和质膜完整率显著低于对照组和共孵育0.5 h、1 h组(P0.05),但后3组之间差异不显著;共孵育2 h组精子存活时间显著低于对照组、共孵育1 h和0.5 h组(P0.05),其中共孵育1 h组精子存活时间最长,达7 d以上。总之,在精液4℃降温平衡过程中咖啡因与精液共孵育1 h对冷冻后精子质量最有利,解冻后精子活率和活力显著高于其他各组,且解冻后精子体外存活时间最长。     

羊冷冻精液的制作技术研究

通过对羊精液冷冻稀释液组成成分的研究,筛选合适的稀释液配方,研究精子平衡时间、解冻温度、稀释倍数和稀释方法等对精子活力的影响。结果如下:①解冻后的精子活率以加入Tris的一组稀释液活率最高,与其他组相比差异极显著(P<0.01)。②精液的平衡时间以平衡4～5h解冻后活率最高。③在45℃～60℃的水温条件下,取得了精子复苏率74.5%的解冻效果。④选用5种稀释比例(精液:稀释液),分别为1∶4、1∶5、1∶6、1∶6、1∶8,结果1∶8的稀释比例精液解冻后活率最高,达到了70%以上。     

黑猩猩精液冷冻和优选研究

对精液进行有效的冷冻保存和解冻优选是人工授精顺利开展的重要步骤。本研究在黑猩猩上做了尝试,分别用人工按摩采精、电刺激采精、附睾采精进行6次精液采集,所测精子活率为0.65～0.90,密度为1.69×10~（10）～6.64×10~（11）（个/L）。用自配精液冷冻液,采用CL-8800程序降温仪成功对所采集的精液进行冷冻保存。在冷冻后的10～400 d,分别对6次冻精解冻,并用人用精液优选试剂盒对其后3次进行解冻后优选。结果显示,解冻后精液活率为0.35～0.7;优选后精液活率为0.85～0.9,密度为4.5×10~（11）～5.0×10~（11）（个/L）,基本可以满足人工授精的需要。     

五种糖类对犬精液冷冻保存效果的研究

选取8只身体健康、性欲旺盛的比格公犬,采集其精液,对鲜精进行质量检测,主要包括颜色、射精量、精子活率、活力和pH。选取精子活率达到70%以上犬精液用于后续精液冷冻试验。分别将含有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖和海藻糖的精液稀释液与精液按照1∶2的比例进行稀释。经冷冻解冻后,进行活率、活力、质膜完整性和顶体完整性的精子质量检测。通过对新鲜精液进行品质检测,结果显示5只合格用犬的平均射精量为2.85 mL,密度为2.01×10~8个/mL,pH为6.56。含有果糖的冷冻稀释液中精子活率和活力最高,分别达59.90%和54.00%;其次是添加葡萄糖和乳糖的稀释液中活率较高,分别为59.21%和56.73%,且两组稀释液中精子解冻后活力均为52.00%。进一步评估精子解冻后质膜完整率,结果显示葡萄糖和果糖组显著高于其他组,分别达48.73%和49.52%;而蔗糖添加组精子质膜完整率最低,为42.21%。稀释液中添加果糖的精子解冻后顶体完整率显著高于其他组,而添加蔗糖组顶体完整率最低。在比格犬的精液冷冻保存中,添加果糖的冷冻稀释液能显著提高精子的活率和活力,从而达到提高冻精质量的效果。     

影响大额牛精液质量主要因素的研究

[目的]大额牛为我国地方畜禽遗传资源濒危品种,为了加强大额牛的保种力度,提高保种效率;本研究对影响大额牛精液质量的主要因素如采精方法、季节、个体遗传等进行了比较研究。[方法]大额牛用电刺激法和假阴道法采精,按照牛冷冻精液国家标准GB4143-2008的方法测定大额牛的采精量,精子密度,原精活力和冷冻精液解冻活力,用程控冷冻仪冷冻大额牛精液。[结果]大额牛冷冻精液解冻效果较好,采精量为5.009±2.239m}(n=226),原精活力为54.184±15.760%(n=223),精子密度为7.207±6.387亿/mL(n=225),解冻活力为36.007±2.092%(n=136)。精子冷冻解冻复苏率达50%以上。大额牛电刺激采精成功率高。[结论]迁地保护条件下大额牛电刺激法采精获得很好效果,也能用假阴道法采精,精液冷冻解冻效果较好,有利于大额牛遗传物质的保存。     

水貂人工授精的研究

1983～1986年对水貂进行电刺激,阴道采精94头次,成功81次,成功率86.2％。测得公貂射精量为0.11±0.01毫升,精子密度10.70±2.99千万,精子活力0.716±0.021。研究制定水貂精液冷冻程序。冷冻24次,解冻后精子复苏率为83.7％。1985年用冻精按常规从阴道给母貂输精,产出2窝健康仔貂(共输5只),每窝产仔2.0±1.0只。     

猪浓缩冷冻精液的受胎能力和一种新的解冻操作方法

采精后2小时,将每份含6×10~9个精子的精液离心分离10分钟(300_g)。去除精清,并用BF5稀释液把精子重新稀释成5毫升的混匀精液。精液在2小时内逐步冷却到5℃,再加入5毫升含2%甘油的BF5液。将精液混匀后,立即在干冰上冷冻成0.15到0.2毫升的颗粒,然后移入液氮保存。输精时,每次从液氮中取出10毫升的颗粒,倒入泡沫塑料制的槽形容器内,静置三分钟,随即把颗粒倾入250毫升的烧杯中,杯内装有25毫升50℃的BTS液,摇动烧杯直至颗粒融化为止。解冻的精液倒入输精瓶,再用15毫升的BTS液冲洗烧杯,洗下的液体加到输精瓶中。用一头公猪的单精或用二头公猪的混精的冷冻精液给26头小母猪输精。每头小母猪输精两次,每个剂量含6×10~9个精子。26头小母猪中有22头(85%)产生受精卵,22头的卵有87%受精并正常地发育。混精输精的受胎效果并不比单精输精优异。本研究中使用的冷冻和解冻法操作简易,贮存容量小,精液活力高;妊娠率和受精率接近新鲜精液的正常指标。     

平衡温度对种公牛冷冻精液制作效果的影响

本试验将三头种公牛的精液稀释、平衡,封装后各分为5组,经不同的平衡温度后进行冷冻,检查牛冷冻精液解冻后的精子活力、顶体完整率、畸形率、37℃4h存活率。结果表明,牛冷冻精液在制作过程中,最佳平衡温度为4℃,在此条件下,冻精质量可以达到国家标准。     

马精液冷冻与输精效果观察

我站根据有关马匹冷冻精液研究资料,在83年选用原基层站配种用的两匹种公马进行马冷冻精液的试验研究,达到了较好水平。试验方法一、精液处理与冷冻按常规采精和精液品质检查,将合格的精液立即用11%蔗糖液,在同温下以1:1稀释,分装于15—20毫升灭菌的离心试管中,在18—25℃温度下以2500转/分的速度离心10—12分钟,除去上清液,余下精子部分添加精子保护液(蒸馏水100毫升、蔗糖11