不同因素对花生总DNA提取的影响

为探究CTAB方法提取植物DNA中影响DNA产量和质量的诸多因素,以豫花15号花生嫩叶为材料,采用酚氯仿、1 0000 r/min、氯仿、不剪口、氯仿一步、酚氯仿一步、不摇30 min 7种不同的处理方法纯化其基因组DNA,并通过外观、紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳对所提取的DNA样品进行检测,比较不同因素对DNA提取质量的影响.在充分考虑得率、蛋白质含量及DNA分子完整性等指数后,总结出酚氯仿纯化豫花15号花生叶片DNA的最适方法.     

外源DNA直接导入大豆遗传变异的研究

利用花粉管通道导入法,将外源ＤＮＡ导入栽培大豆中,供体的一些抗逆性、优质和其他优良性状,在受体的导入后代中得以表达,分析受体遗传变异规律,发现大豆蛋白质这一生化指标独立于其他农艺性状,是由简单基因控制的遗传。并且从变异后代中筛选出有突出优点且综合性状优良的新种质材料。     

大豆,花生微生物学指标的研究

从徐州和苏州具有代表性的地区采集花生、大豆等7个油料样品进杆测定，以霉菌为重点，对样品在正常品质以及不良储藏条件下的微生物学指标进行了初步探讨．得出：品质正常的油料真菌总理为百～千数量级，内部比外部的菌量低，真菌种类占优势，其优势菌主要是镰刀菌和青霉．模拟储藏后的油料，其菌量比原始样品高2～3个数量级，真菌种类除保持部分田间真菌菌相外，逐步为白曲霉、杂色曲霉等腐生性真菌所代替．品质的劣变和微生物的真菌菌士及菌相的变化有着密切的关系。     

茎瘤芥总DNA提取研究

以茎瘤芥种子为材料采用SDS法和以茎瘤芥幼苗叶片为材料采用CTAB法,提取茎瘤芥总DNA.通过琼脂糖凝胶电泳和紫外吸收光谱对提取获得的DNA进行分析.结果表明,以茎瘤芥种子为材料选用SDS法和以茎瘤芥幼苗叶片为材料选用CrAB法提取的总DNA纯度和完整性均较好.其中,后者提取效果较好.     

以PCR为目的的大豆叶片DNA提取方法的比较研究

模板DNA的质量直接影响PCR扩增的结果,而不同提取方法及其缓冲液的成份与浓度对提取DNA的质量有重要影响。本文以5个栽培大豆品种的叶片为材料,比较分析了SDS与CTAB两种提取方法以及不同浓度CTAB提取缓冲液对所提取的DNA质量的影响,并通过PCR进行检验。实验结果表明：用1％(W/V)、2％(W/V)浓度的CTAB提取缓冲液和1．25％(WV)SDS提取缓冲液所提取的大豆叶片DNA的质量较好,均能满足PCR扩增模板的需求,其中以1．25％(W／V)SDS提取得到的大豆叶片DNA质量最好,以其为模板扩增的效果最佳,而4％浓度的CTAB不适宜提取大豆叶片DNA。     

三种DNA提取方法对检测草莓镶脉病毒稳定性的研究

草莓成熟叶片中含有大量的多糖、蛋白质、多酚和色素等物质,影响高质量DNA的提取和下游PCR反应的进行。为确定适用于PCR技术检测草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的DNA提取方法,从草莓叶片中提取DNA后,对样品中的SVBV进行特异性的PCR检测,比较确定不同DNA提取方法对PCR检测SVBV稳定性的影响。以感染SVBV的草莓叶片为材料,分别采用CTAB试剂盒法、高盐低pH法、改良SDS法提取草莓叶片的总DNA,将不同方法提取的DNA通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法进行测定,对DNA产量和质量进行分析。结果表明,3种方法均能获得较为完整的DNA片段,用CTAB试剂盒提取的DNA质量最高,改良SDS法提取的DNA质量较低。将不同方法提取的DNA经过PCR反应特异性检测SVBV后,将与目的片段大小一致的PCR扩增产物经序列测定及分析,证明与SVBV的序列相吻合,证明了方法的可靠性,其质量能够满足PCR特异性检测需要。     

崂山奶山羊瘤胃微生物总DNA提取方法的优化

对瘤胃微生物总DNA提取方法进行了改进,将冻融法和CATB法相结合,可以将细菌、真菌和古细菌在内的各种微生物的细胞壁充分的粉碎,且DNA提取效果稳定,可以获得足够大的DNA片段(23 kb),可以满足后续试验的需要.     

大豆DNA导入引起大麦籽粒蛋白含量及氨基酸含量变异的遗传稳定性分析

采用花粉管通道法和两种不同压力基因枪法将大豆总DNA导入大麦，提高了大麦后代籽粒的蛋白质含量和必需氨基酸含量。四代大麦籽粒蛋白质含量追踪分析及第四代籽粒氨基酸含量分析结果表明，部分大麦籽粒的高蛋白含量及质量变异性状能够稳定遗传。本试验还分析比较了两种DNA导入法，采用基因枪法比花粉管通道法在保持后代高蛋白遗传稳定性方面效果更好。在两种不同压力基因枪处理中，1300psi压力处理比1500psi压力处理更适合大豆总DNA的导入。在本试验中我们还获得了两个高蛋白性状较稳定的穗行，它们的蛋白质平均含量分别比对照提高20．67％和17．99％。     

国槐DNA导入花生栽培品种选育抗叶斑病新种质的鉴定

为了培育抗花生叶斑病的新种质,利用花粉管通道技术将国槐DNA导入花生栽培品种79266,在变异后代筛选抗叶斑病材料,对选出的5个种质系进行叶斑病抗性和农艺性状的田间鉴定,并进行抗病种质系与受体DNA差异的SSR多态性分析。获得的主要结果如下:受体品种79266感染叶斑病(包含花生褐斑病、黑斑病和网斑病)病程曲线的线下面积(AUDPC值)为205.3,5个抗病种质系的AUDPC值极显著低于受体品种,其中05D1128的AUDPC值最小,为112.0,感病最轻;收获前7 d调查花生褐斑病和网斑病的发病程度,05D1148对花生褐斑病的抗性最强,其病级和病情指数均极显著低于受体品种,抗性比受体品种提高17.56%。05D1128对网斑病的抗性最强,其病级和病情指数均极显著低于受体品种,抗性比受体品种提高31.83%;叶斑病抗性最强的05D1128与受体品种相比,百果重和百仁重明显提高,但荚果产量和籽仁产量极显著降低。褐斑病抗性最强的05D1148与受体品种相比,二者所考察农艺性状间无显著差异;采用40对SSR引物进行PCR扩增,在05D106、05D1128、05D1144、05D1148、05D1172 5个新种质系与受体间检测到的多态性位点数分别是9,8,5,6和7。因此,利用国槐DNA导入花生栽培品种提高其对叶斑病的抗性的育种方法是有效的,所选育种质系中05D1148对叶斑病的抗性和农艺性状的综合表现最好,可以作为新的花生抗叶斑病种质材料加以利用。     

离子束辅助大豆基因群导入小麦的研究

用低能离子束辅助,将大豆全DNA分别导入中育5号、淮阴9628两个小麦品种,获得高蛋白(>18 5%)单株5株,最高株蛋白质含量为21 44%;低蛋白(<11 5%)单株3株,最低株蛋白质含量为10 96%。研究结果还表明,不同小麦受体基因型的转化效率明显不同。     

大豆黑农33DNA导入水稻恢复系R73的研究

用大豆黑农３３做供体，水稻恢复系Ｒ７３做受体，化粉管通道法进行外源ＤＮＡ导入。共处理颖花１５１朵，当代结实粒５２粒，Ｄ１代成苗２１株，获４株变异株，变异转化率７．７％。变异后代在抽期其株高，穗长、穗型、千粒重、每产粒娄航籽粒白质含量等性状均产生明显变异，经过儿代选择，Ｄ４代有２个株系的米质优于受体恢７３，其闰透明度高，垩白率低，具有很大的选择前途。     

甘蔗基因组DNA提取方法的研究

试验是以甘蔗的嫩叶为材料,通过对前人的CTAB提取方法进行改良,以探索更好的甘蔗基因组DNA提取方法。通过改良最后得到的CTAB提取方法Ⅲ具有成本低、操作简单、省时等特点,并且得到的DNA经核酸蛋白质分析仪、琼脂糖凝胶电泳及RAPD检测分析表明方法Ⅲ提取得到的DNA完整性好,纯度高,可以直接用于各种分子标记。     

大豆DNA导入引起稻米蛋白质含量变异的遗传稳定性及赖氨酸含量分析

利用浸种及苗期浇灌法和花粉管通道法将高蛋白含量的大豆总DNA导入水稻，提高了水稻后代种子的蛋白质含量和总氨基酸及赖氨酸含量。三代水稻种子蛋白质含量的数据分析结果表明：利用大豆总NDA的导入不仅可以迅速有效地提高稻米蛋白质和赖氨酸含量，而且稻米高蛋白、高忱酸变异性状还能够稳定表达至第三代；本试验还分析比较了两种DNA直接导入法，虽然从总体而言，在提高种子蛋白质含量以及保持后代种子高蛋白性状的遗传稳定性方法，利用花粉管通道法导入外源大豆DNA，相对浸种及苗期浇灌法效果更好，但从不同株系蛋白质含量的追踪分析结果显示，连续两年采用大豆DNA溶液浸种及苗期浇灌处理获得的株系，在维持后代种子高蛋白性状的表现方面效果更明显：三代经大豆DNA处理的水稻种子，赖氨酸含量都伴随着氨基酸总含量的提高而提高，而且第二代和第三代种子的赖氨酸含量都超过0.5%。     

外源DNA导入小麦及其后代抗性与品质变化的初步研究

本文报道了在小麦自交授粉后,利用其形成的花粉管通道,钭外源ＤＮＡ直接导入小麦及其后代抗性与品质变化的研究结果。结果表明：外源ＤＮＡ片段直接导入受体小麦,部分片段可以被受体小麦细胞ＤＮＡ整合并表达。还表明,利用花粉管通道途径实现外源ＤＮＡ直接导入小麦,提高小麦抗性和品质,进行小麦种质创新和品质改良是可行的。     

新疆甘草DNA导入大豆性状变异的研究初报

1996年以大豆为受体，新疆甘草为供体，采用花粉管通道技术，将新疆甘 草DNA导入受体大豆中，当代种子全部收获（D0代） 。     

高质量枣树基因组DNA提取方法的研究

主要针对枣树组织中多糖严重干扰基因组DNA提取质量的问题，本研究比较了常规CTAB法、TE3D法和改良CTAB法3种方法的处理效果。结果表明：常规CTAB法提取DNA难以去除植物组织中的多糖类杂质；TE3D法提取DNA多糖杂质少，但产率低、易降解、褐化严重；而改良CTAB法提取DNA量大(1000ng／μl左右)，产率高，可达120μg DNA／g新鲜组织，无明显降解，杂质少，A260/A280比值1．80左右，通过基因组DNA-AFLP指纹图谱分析，完全满足实验要求。并进一步对改良CTAB法的关键步骤作出具体分析讨论。     

适合AFLP分析用的节瓜基因组DNA提取方法的研究

本研究以CTAB法为基础,采用以下5种处理提取节瓜叶片基因组DNA:A、PVPP(3%)+抗坏血酸(100 mmol/L);B、β-巯基乙醇(3%)+抗坏血酸(100 mmol/L):C、PVPP(3%)+半胱氨酸(5%);D、PVPP(3%)+β-巯基乙醇(3%);E、抗坏血酸(100 mmol/L)+半胱氨酸(5%).实验结果表明:在5种处理中,C处理提取的DNA质量最高,其溶液呈无色透明状,经核酸蛋白仪测定其OD260/OD280为1.8～2.0;经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,节瓜叶片基因组DNA带型清晰、完整、无降解,蛋白、多糖、酚类及RNA等去除比较彻底;经AFLP分析,酶切彻底,PCR扩增后的带型清晰稳定,重复性好,说明C处理提取的节瓜基因组DNA完全满足AFLP分析的要求.     

转基因作物深加工产品的DNA提取方法研究

由于转基因作物深加工产品中的DNA受到破坏,含量低、质量下降,提取困难,直接影响了后续的转基因定性检测。为解决这一难题,以酱油和番茄酱为样本进行了原料DNA提取方法的试验。针对酱油中添加大量焦糖色素和番茄酱偏酸的特点,通过加入样品预处理程序,有效地去除了酱油中的焦糖色素分子和调整了番茄酱沉淀的pH 值。利用大豆和番茄的内源特异参照基因进行PCR扩增,结果证明了利用该方法所提取的DNA完全能够满足转基因定性检测的需要,方法简单、快速、有效。     

响应面法优化超声波辅助提取花生红衣原花色素的研究

以花生红衣为原料,采用超声波辅助提取原花色素.在单因素试验基础上,选取溶剂浓度、超声功率、液料比3个变量,利用Box-Behnken中心组合试验和响应面分析法对其工艺进行优化.结果表明,最佳工艺参数为:丙酮体积分数62％,超声波功率120 W,液料比47∶1,花生红衣原花色素的得率最高可达12.597 mg/g.     

不同基因型大豆糖分积累规律的研究(Ⅰ)——可溶性总糖含量积累规律的研究

大豆光合作用的主要产物是糖类,本文选用6个不同基因型的大豆品种,运用框栽的方法,研究了大豆可溶性总糖含量的动态变化,结果表明,不同营养器官的可溶性总糖的最大含量值出现在结荚期,荚果中的可溶性总糖表现出持续降低的变化规律。在大豆生育过程中,叶柄是各器官中糖类代谢比较旺盛的部位,可溶性总糖含量为叶柄>叶片>根>茎,秣食豆总糖含量最高;小金黄、丰收10和绥农14叶柄和根中总糖含量呈极显著正相关(r值分别为0.971、0.905、0.932),龙选1号、不结瘤大豆和秣食豆的叶柄和根中的总糖含量达到显著正相关(r值分别为0.874、0.850、0.657)。