犬瘟热疫苗弱毒的复壮与免疫试验

将一株犬瘟热疫苗株病毒通过Ｖｅｒｏ细胞２０代（ＣＤＶ／Ｒ－２０）后又通过敏感犬的腹腔巨噬细胞，获得一株免疫原性更高的弱毒株（ＣＤＶ／Ｒ－２０／８）。接种同样剂量１０４ＴＣＩＤ５０的ＣＤＶ／Ｒ－２０／８和ＣＤＶ／Ｒ－２０的犬，产生出血清中和（ＳＮ）抗体价的几何平均数分别为１：５４和１：２６。前者为后者的２倍多。接种１０５ＴＣＩＤ５０的ＣＤＶ／Ｒ－２０／８能完全保护犬（１０／１０）抵抗ＣＤＶ强毒的攻击，接种１０４ＴＣＩＤ５０的保护９／１０犬，而对照犬５只全部发病，其中４只死亡。犬体内ＳＮ价可持续一年之久。冻干培养物在４和－３０℃中可分别保存９个月和１２个月而效力不减。     

检测犬冠状病毒中和抗体的方法与应用

在２４孔组织培养板上应用从美国引进的犬冠病毒（ＣＣＶ）参考株ＮＬ－１８与猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）采用固定病毒（１００ＴＣＩＤ５０）稀释血清法建立了ＣＣＶ中和试验,运用该方法测定了１４２条群养犬和３５条散养犬的中和抗体水平,以１：４作为阳性血肖的判定标准,群养犬与散养犬的血清阳性率分别为１００％和８２．９％,测定了母犬的血清与乳汁,所产仔犬脐带血的ＣＣＶ抗体效价,证实母犬可以通过胎盘及乳汁将抗体转移     

检测犬冠状病毒中和抗体的方法与应用

在２４孔组织培养板上应用从美国引进的犬冠状病毒（ＣＣＶ）参考株ＮＬ１８与猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）,采用固定病毒（１００ＴＣＩＤ５０）稀释血清法建立了ＣＣＶ中和试验。运用该方法测定了１４２条群养犬和３５条散养犬的中和抗体水平,以１∶４作为阳性血清的判定标准,群养犬与散养犬的血清阳性率分别为１００％和８２９％;测定了母犬的血清与乳汁、所产仔犬及仔犬脐带血的ＣＣＶ抗体效价,证实母犬可以通过胎盘及乳汁将抗体转移给仔犬,吮食乳汁是仔犬获得母源抗体的主要途径。本试验从抗体水平上证实我国的犬已发生ＣＣＶ感染。     

狂犬病 犬肠炎 犬瘟热 犬腺病毒病犬副流感五联弱毒冻干疫苗的研究

从国外引进的犬瘟热病毒（ＣＤＶ）、犬细小病毒（ＣＰＶ）、犬腺病毒－２型（ＣＡＶ２）和犬副流感病毒病毒（ＣＰＩＶ）四联弱毒样品中，分离筛选出增殖性良好的ＣＰＶ０ＸＮ１，ＣＡＶ２－ＸＮ３和ＣＰＩＶ－ＸＮ４株。另外还通过离体异种细胞交叉传代，获得的ＣＤＶ－ＸＮ１１１２弱毒株；从狂犬病毒株疫苗样品中筛选出ＥＲＡ８３６株。经试验证明这５株病毒在５代以内可作为制苗用种毒。采用静置和旋转培养法高滴度扩增这５株弱     

犬冠状病毒的分离鉴定及其纤突蛋白基因的克隆与序列比较

以犬胎原代细胞，采用同步接种、带毒传代和添加新细胞的方法，从１例腹泻犬脾脏和１例临床健康犬肠内容物中分离出２株犬冠状病毒（ＣＣＶＹＳ１，ＣＣＶ ＣＩ１）。该２株病毒可使ＣＲＦＫ细胞出现典型的细胞融合病变，与从美国引进的ＣＣＶＮＬ－１８参考株形成的细胞病变相似；电镜负染和超薄切片观察，分离毒株细胞培养物中均含有典型的冠状病毒粒子，并形成胞浆内包涵体；经理化学、生物学鉴定，濉有ＣＣＶ的特性；间接免疫荧     

犬冠状病毒YS1株人工感染犬试验

使用从腹泻犬体内分离获得的犬冠状病毒ＹＳ１第５代ＣＲＦＫ细胞培养物,以不同剂量人工感染５０只２￣３月龄健康幼犬 ,１４ｄ内计有１６只犬发病,其中１４只耐过,２只死亡,发病率为３２％,死亡率为１２．５％,患犬粪便经电镜检查和ＲＴ－ＰＣＲ检测,前者见有ＣＣＶ样病毒,后者扩增出ＣＣＶ特异核酸片段。４８只试验犬血清对该病毒的ＳＮ抗体效价随接毒量的不同分别平均为１：３１０、１：２４５、１：１８５、１：１１５     

犬冠状病毒YS1株的致弱驯化与免疫试验

应用猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）单层接毒方法将犬冠状病毒（ＣＣＶ）强毒ＹＳ１株连续传代驯化至６０代,经安全性试验和免疫原性测定,该强毒株已驯化对弱毒水平,对犬安全,免度原性良好。     

犬的传播性性病性肿瘤和对两种治疗效果的评价

对２１６只感染传播性性病性肿瘤（ＴＶＴ）犬的病例报告进行了分析。结果表明春、夏季发病率（５７．９％）稍高于秋、冬季（４２．１％）。母犬发病率（６８．５％）高于公犬（３１．６％）．病犬年龄多在１－５岁（７１．７％）。所有病例用外科手术疗法或注射硫酸长春新碱治疗（０．５ｍｇ或１．０ｍｇ，静脉注射１－４次，间隔一周注射）。在手术治疗的８３只犬中，１８％的病例肿瘤复发，然而８１只用长春新碱治疗的犬在３－５周内１００％症状减轻而没有复发。在４３．２％的病例出现副作用，如呕吐、腹泻、厌食和体温升高。本研究表明，在治疗犬的ＴＶＴ病中，长春新碱效果优于外科手术治疗。     

PCR法检测血清I型马立克氏病病毒及其敏感性试验的研究

以人工合成的针对血清Ｉ号马立克氏病病毒（ＭＤＶ１）Ａ抗原基因（ｇＡ）部分序列的两端寡聚核苷酸为聚合酶链反应（ＰＣＲ）的引物，分别对马立克氏病病毒血清Ｉ型（京－１株，ＭＤ１１／７５Ｃ株）；２型（ＳＢ－１株）；３型（火鸡疱疹病毒的ＦＣ１２６株）毒株和ＧＡ株ＢａｍＨＩ Ｂ片段的ＰＡＣＹ１８４克隆重组质粒ＤＮＡ进行基因扩增反应及其敏感性试验。结果表明，该引物不仅对ＭＤＶ１具有较强的特异性，而且由此引物引导     

犬瘟热病毒抗体检测方法的比较研究

用犬瘟热（ＣＤ）弱毒和自制的高免犬血清，建立了检测犬瘟热病毒（ＣＤＶ）抗体的中和（ＳＮ）试验、间接荧光抗体技术（ＩＦＡＴ）和间接免疫酶染色法。这３种方法对３８份ＣＤ弱毒疫苗免疫犬血清抗体效价的测定结果表明，当被检血清稀释度为１∶１００时，ＳＮ试验、ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法测定时的阳性血清数分别为２９，７和３１份，ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法测定结果相对于ＳＮ试验结果的符合率分别为４２．１％和９４．７％。同时发现，当ＳＮ试验测定的血清效价在１∶１００以上时，ＩＦＡＴ测定结果总是在１∶２５以上，间接免疫酶染色法测定结果总是在１∶１００以上。３种方法以各自初步确定的ＣＤＶ血清抗体效价完全保护值指标计算所测血清的完全保护率，ＳＮ试验为７６．３％，ＩＦＡＴ为７８．９％，间接免疫酶染色法为８１．６％。据此认为，ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法均可部分代替ＳＮ试验用于ＣＤ疫苗免疫效果的评价、免疫犬抗体水平的监测以及ＣＤ的流行病学调查     

北京地区腹泻犬细小病毒感染情况调查

在校动物医院用试剂盒对１３６例门诊腹泻犬粪便进行犬细小病毒（ＣＰＶ）检验，其中阳性７２例（阳性率５２．９％）。阳性病例中，公犬占５２．４％，母犬占５１．６％，因此ＣＰＶ感染与犬性别无关。ＣＰＶ阳性率，以２－４月龄犬为最高（６０．３％），５－６月龄次之（１７．６％），７月龄以后较少。未注射或未按程序注射ＣＰＶ疫苗犬，ＣＰＶ检验阳性率高，即使按程序接种ＣＰＶ疫苗的犬，也仍有感染ＣＰＶ的，其原因有待研究     

北京地区腹泻犬细小病毒感染情况调查

在校动物医院用试剂盒对１３６例门诊腹泻犬粪便进行犬细小病毒（ＣＰＶ）检验，其中阳性７２例（阳性率５２．９％）。阳性病例中，公犬占５２．４％，母犬占５１．６％，因此ＣＰＶ感染与犬性别无关。ＣＰＶ阳性率，以２～４月龄大为最高（６０．３％），５～６月龄次之（１７．６％）。７月龄以后较少。未注射或未按程序注射ＣＰＶ疫苗犬，ＣＰＶ检验阳性率高，即使按程序接种ＣＰＶ疫苗的犬，也仍有感染ＣＰＶ的，其原因有待研究．     

犬瘟热病毒野毒株融合蛋白主要功能区基因的变异研究

根据犬瘟热病毒（ＣＤＶ）融合蛋白（Ｆ）基因的核苷酸序列，设计合成了１０条引物。用１对引物从延吉犬病料中扩增出了含Ｆ２区基因的３１４ｂｐ的片段。除两端引物序列外为２６５ｂｐ，编码８８个氨基酸。它与日本弱毒株（ＣＤＶ－Ｄ，Ｏｏｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ弱毒株（ＣＤＶ－ＯＮ）、海豹瘟热病毒２型（ＰＤＶ２）、１型（ＰＤＶ１）在核苷酸和氨基酸水平上的同源性，分别为９８．１％和９５．５％、９６．２％和９３．２％和     

犬瘟热弱毒疫苗免疫犬抗体消长规律及影响因素

应用犬瘟热病毒（ＣＤＶ）血清中和试验，对从日本引进的犬瘟热弱毒疫苗免疫犬的血清中和抗体效价进行了检测，探讨了免疫剂量、免疫程序和犬的年龄对抗体效价的影响。结果表明，试验犬于第１次免疫后１４ｄ左右产生１∶９以上的血清中和抗体，随后抗体水平迅速升高，３５ｄ时７８．３８％的免疫犬抗体效价超过１∶１００，６０ｄ达到高峰，６个月试验结束时，血清中和抗体效价仍维持在１∶１００以上。该犬瘟热弱毒疫苗的最低免疫剂量为１０３．０ＴＣＩＤ５０，以２周或３周间隔连续免疫３次均可使免疫犬获得完全保护。     

用RT—PCR检测犬外周血液单核细胞中犬瘟热病毒核衣壳蛋…

为了迅捷地诊断犬瘟热病毒（ＣＤＶ）感染，本研究采用及转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，检测犬外周血液核细胞（ＰＢＭＣ）中ＣＤＶ核衣壳蛋白（ＮＰ）基因。以两套引物针对ＣＤＶＯｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ毒株ＮＰ基因的两个片段。应用ＲＴ－ＰＣＲ〉以６株ＣＤＶ毒株感染Ｖｅｒｏ细胞，用ＣＤＶ人工感犬染的的ＰＢＭＣ，在这两处细胞的提的ＲＮＡ中，手增ＮＰ基因片段，取得了较好的结果。在３２例临床疑为ＣＤＶ感染     

新疆鸡传染性法氏囊病病毒生物学特性的研究

应用鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）从新疆地区分离到３株细胞适应株,对其进行了理化特性和血清学特性的鉴定。结果表明３个毒株能抵抗氯仿,耐热（５６℃１小时）、（７０℃１小时或８０℃１小时）、耐酸（ｐＨ２）、对碱（ｐＨ１２）敏感。但与国内已报道的毒株相比,对热（７０℃）和碱（ｐＨ１２,３７℃１小时）的抵抗力则更强些,在这些条件下均不能完全灭活。血清中和试验表明均为ＩＢＤＶ血清Ｉ型。交叉中和试验表明,分离的３株毒株有１株和另外２株是不同的血清亚型,确证了新疆也存在ＩＢＤＶ血清亚型。３株病毒在ＣＥＦ上连续传代已基本致弱,其细胞培养液接种鸡能产生相应的免疫抗体。     

多聚酶链反应区分血清Ⅰ型MDV强弱毒株

选用血清Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ＿１）基因组中位于１３２ｂｐ正向重复序列两侧的２段寡聚核苷酸为多聚酶链反应（ＰＣＲ）的引物，分别对Ⅰ型ＭＤＶ强毒株（京－１株）和弱毒株（Ｍｄ１１／７５Ｃ株）的核酸进行基因扩增。结果显示：该弱毒株核酸基因中含６个或更多个拷贝数的１３２ｂｐ正向重复序列，而强毒株核酸基因中仅含２个，相同引物对Ⅱ型、Ⅲ型ＭＤＶ（ＳＢ－１株，Ｆｃ１２６株）和禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）核酸作ＰＣＲ扩增，未检出任何核酸片段。     

水貂病毒性肠炎弱毒疫苗株的选育及实验免疫研究

从自然发病死亡貂体内分离到１株水貂病毒性肠炎（ＭＶＦ）强毒株－ＭＥＶ，将该株病毒在犊牛睾丸（ＣＴ）细胞和猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）上混合培养进行适应。当传至５６代时，在ＣＴ细胞上出现细胞病变（ＣＰＥ），而后单独在ＣＴ细胞上传至７０代，经终点稀释克隆和鉴定获得一弱毒株。以其制备的ＣＴ细胞弱毒疫苗，给每只貂注射或口服１～５ｍＬ均未见任何不良反应。注苗后１２、６０、７２、１８０ｄ攻毒，保护率均为１００％。     

抗犬细小病毒高免血清的制备和应用

应用差速离心和密度梯平衡离心技术从患ＣＰＶ性肠炎的犬粪便和肠内容物中提纯的ＣＰＶ抗原接种犬，制备了高效价的抗血清，用该血清共治疗７８头病犬，治愈率达８２％（６４／７８），实践表明，自制的高免血清对患ＣＰＶ性肠炎的病犬具有治疗和控制疾病发展的作用，特别是早期病例，仅用抗血清即可治愈，对中期病犬结合支持和对症疗法，可大大提高治愈率，有很高的应用价值。     

马源轮状病毒血清3型引起的马驹腹泻

１９８７年３－７月，在１６８例马驹腹泻病例中观察到８９例（５３％）由轮状病一道因清３型引起，从６２病例粪便中共分离到５１株ＲＶ，分离株（ＣＨ－３）具有独特的毒ＲＮＡ电泳型且不同于该农场广泛流行的其他病毒株，用抗人和动物的ＲＶ血清１－１２型抗血清分别与ＣＨ－３病毒进行中和试验均呈阴性，但Ｃ－３病毒株双股ＲＮＡ能与马源ＲＶ血清３型株进行探针杂交。