昆仑山小花棘豆生物碱提取及其对小鼠毒性试验

为进一步研究小花棘豆有毒成分提取方法及毒性作用,将昆仑山小花棘豆全草粉用不同浓度乙醇提取,以提取温度、超声时间和料液比等因素进行正交试验,考察对小花棘豆活性成分提取率的影响,并通过毒性试验对小花棘豆生物碱毒性进行评价。结果表明,提取温度、超声时间、料液比对小花棘豆生物碱提取率影响不显著。小花棘豆生物碱是其主要毒性成分,按1∶10浓度注射小花棘豆生物碱约3 mL可致小鼠死亡。     

家畜小花棘豆中毒的研究进展

小花棘豆是豆科棘豆属多年生草本植物 ,全株有毒 ,在国内分布广泛 ,适于在干旱地区生长 ,家畜采食一定量后可逐步“成瘾”,常使大批家畜发病死亡 ,使该草分布地区蒙受巨大的经济损失。文章主要从小花棘豆的生态、部分地区小花棘豆中毒的情况、家畜小花棘豆中毒后的临床症状、病理学、引起小花棘豆中毒的毒性成分 (溶血毒素和有毒生物碱等 )及对小花棘豆中毒家畜采取的防治措施等进行了综述     

小花棘豆主要有毒成分对小鼠体内氧自由基的影响

小花棘豆（Oxytropis glabra DC，俗名：醉马草）是豆科棘豆属多年生草本植物，全草有毒。小花棘豆在民间用作关节痛、牙痛、神经衰弱及皮肤瘙痒等疾病的治疗，具有麻醉、镇静、止痛的功效。小花棘豆是我国西北地区主要的有毒植物，家畜的小花棘豆中毒已给其分布地区的畜牧业造成了巨大的经济损失。现在人们认为小花棘豆属疯草的主要有毒成分是生物碱，其引起中毒的特征性病理变化是组织细胞的胞浆空泡变性。与氧自由基（Oxygen free radial，0FR）引起的空泡变性相似，那么，在小花棘豆中毒的发病机制方面，二者间是否存在一定的相关性呢？     

甘肃棘豆中有毒生物碱的研究

对存在于甘肃棘豆中有毒的总生物碱成分，采用薄层层析的方法进行了分析研究，从中分离，鉴定出以黄华碱等为主的几种喹诺里西啶类毒性化合物，证实了甘肃棘豆中含有类同于黄花棘豆和小花棘豆的毒性生物碱成分，进而从药理学，毒理学和毒代动力学等方面对这３种植物的毒性生物碱做了讨论印证。     

小花棘豆补饲奶牛试验

小花棘豆是一种多年生豆科植物,其营养价值较高,它含粗蛋白17.81%,粗脂肪2.75%,钙1.16%,磷0.241%,粗纤维31.63%,无氮浸出物32.84%,胡萝卜素0.00082%.由于此种植物含有毒成分,家畜采食一定量后,就会发生中毒.不但不能利用,反而成为分布地区畜牧业生产的一大灾害.经查证国内外至今尚未见到利用小花棘豆作为饲草的报道.经我单位同内蒙古农牧学院动物医学系(现农业大学动物科学与医学学院)研究确定小花棘豆主要有毒成分为生物碱,并找到了酸水浸泡脱毒的利用方法,通过补饲山羊、绵羊、菜牛、猪等动物,证明只要合理利用,是安全的,且经济效益明显.为了进一步开拓小花棘豆利用范围.观察小花棘豆补饲奶牛,对产奶量、奶质、奶牛健康情况有无影响.于1987年10月始进行了历时100天的小花棘豆补饲奶牛试验.     

小花棘豆总生物碱对小鼠氧自由基的影响

为了探讨小花棘豆主要有毒成分———总生物碱对动物机体内氧自由基的影响,采用紫外分光光度法分别测定了小白鼠血浆、肝和脑中超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)的活性以及脂质氧化代谢终末产物丙二醛(Malonalde-hyde,MDA)的含量。结果表明,攻毒组肝、脑中SOD、GSH-PX活性显著低于对照组(P<0.01),血浆中GSH-PX活性显著低于对照组(P<0.05),SOD活性与对照组则无显著性差异(P>0.05);攻毒组脑、血浆中MDA含量显著高于对照组(P<0.01),但肝脏中的MDA含量却无显著性差异。表明小花棘豆主要有毒成分能显著降低抗氧化酶的活性和提高MDA的含量,并能诱发机体内氧自由基的产生。     

小花棘豆生物碱中毒对小白鼠免疫器官脏器生长指数的影响

试验将80只小白鼠随机分组,分别将苦马豆素(SW)、黄花碱(Ts)和两类生物碱混合物的稀释液胃内灌服小白鼠,并在第7、14、21、28和35天,每组随机取4只小白鼠脱颈致死,检测胸腺(脾脏)生长指数,研究小花棘豆生物碱SW、Ts及两类生物碱的混合物对小白鼠免疫器官脏器生长指数的影响,探讨小花棘豆的中毒机理。试验结果显示:短时间(7 d)内,SW能够提高小白鼠胸腺(脾脏)生长指数,但差异不显著;长时间(28 d),SW能极显著降低胸腺(脾脏)生长指数;整个试验周期,Ts和两类生物碱的混合物均能降低胸腺(脾脏)生长指数,但Ts在第35天差异极显著,两类生物碱的混合物在第28天差异极显著。说明小花棘豆生物碱SW和Ts均能不同程度地降低小白鼠的免疫器官脏器生长指数,从而损害动物机体的免疫器官,对动物机体产生毒害作用。     

内蒙古不同小花棘豆种群苦马豆素及其内生真菌关系的分析

小花棘豆是广泛分布于内蒙古草原和荒漠区的一种有毒植物，其主要毒性成分为有毒生物碱——苦马豆素（swainsonine，SW），牲畜采食后可引起中毒，甚至死亡，给当地畜牧业造成重大经济损失。本研究旨在探究内蒙古不同小花棘豆种群植株苦马豆素及其与内生真菌关系。采集内蒙古8个样地120株小花棘豆，利用萃取、离心、离子交换层析法提取和纯化植物单株和菌丝体的SW，用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）检测SW水平，取茎和叶外植体分离培养内生真菌，提取植物和真菌的总DNA，扩增真菌特异序列，利用内生真菌微生物学特征和DNA序列比对进行鉴定。结果显示：8个种群共111株小花棘豆检测出SW，最高水平为369.05 μg·g^-1，平均水平32.78 μg·g^-1，从38株小花棘豆分离培养出内生真菌，纯培养下菌丝体呈松散白色绒毛状，菌落圆形、隆起、边缘整齐、辐射状生长，颜色逐渐呈现灰色、深灰色或褐色至深褐色，内生真菌均测出SW，其水平为0.83~2 573.24 μg·g^-1，经微生物学研究及5.8S rDNA/ITS序列比对分析，在属水平上鉴定该内生真菌为Alternaria。有Alternaria内生真菌的小花棘豆植株含SW，无该内生真菌的植株不含SW，培养的Alternaria内生真菌合成了SW。     

小鼠小花棘豆生物碱中毒的病理学观察

将32只小鼠随机分成4组，包括3个试验组和1个对照组。试验组每日分别按剂量400、800、1600mg／kg给小鼠灌服小花棘豆生物碱正丁醇萃取部分(粗碱)水溶液，同时给对照组灌服等量的生理盐水。60 d后，采集心、肝、肾、脾和脑进行病理组织学及超微结构检查。结果发现，肝、肾等实质器官的细胞胞质空泡变性，这与苦马豆素中毒引起的病理变化一致，表明小花棘豆的主要有毒成分是苦马豆素。     

小花棘豆生物碱对表皮葡萄球菌的抗菌作用及生物膜形成的影响

探讨小花棘豆生物碱对表皮葡萄球菌的抗菌作用及其对细菌生物膜的抑制作用。以表皮葡萄球菌为研究对象,通过微量肉汤稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),微量板半定量法测定其对表皮葡萄球菌生物膜形成的影响,以去离子水和氯化钠检测小花棘豆生物碱对细菌细胞壁的渗透能力影响。结果表明,小花棘豆生物碱对表皮葡萄球菌的抑菌作用较强,其MIC和MBC分别为1.6mg/mL和3.2mg/mL,1~1/4MIC的小花棘豆生物碱可明显抑制表皮葡萄球菌生物膜的形成,而且1~1/8MIC的小花棘豆生物碱对表皮葡萄球菌细胞壁的渗透能力有一定的影响。说明小花棘豆生物碱对表皮葡萄球菌具有抗菌作用,对其生物膜形成具有明显的抑制作用。     

小花棘豆对卡拉库尔羊瘤胃内环境的影响

试验将9只健康的卡拉库尔公羊分为3组,每组3只,分别为对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组,研究不同的小花棘豆添加量对卡拉库尔羊瘤胃内环境及微生物发酵参数的影响。结果表明,日粮中添加小花棘豆可降低卡拉库尔羊瘤胃液pH;随着小花棘豆添加量的增加,卡拉库尔羊瘤胃液氨氮含量升高,菌体蛋白含量下降;日粮中添加小花棘豆有促进瘤胃液总挥发性脂肪酸含量升高和乙酸/丙酸比降低的趋势。     

小花棘豆中毒对和田羊瘤胃微生物数量的影响

探讨小花棘豆对和田羊瘤胃微生物区系的影响,进一步揭示小花棘豆的毒性作用机理。将12只和田羊随机分为3组,即对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组。试验组分别按10g/kg和20g/kg的剂量饲喂小花棘豆,至典型临床症状出现为止。攻毒前及攻毒后每隔7d取瘤胃液,检测瘤胃液中微生物数量的变化。结果显示,与正常对照相比,试验羊瘤胃液中总细菌数、白色瘤胃球菌数、黄化瘤胃球菌数、纤毛虫数、内毛虫数和双毛虫数极显著下降（P〈0.01）,并与小花棘豆中毒呈现较强的相关性;而瘤胃液中厌氧真菌数、产琥珀酸拟杆菌数和等毛虫数与小花棘豆中毒无明显相关性。结果表明,小花棘豆中毒可显著影响和田羊瘤胃纤维素分解菌和纤毛虫数量,且具有一定的时间效应和剂量效应关系。     

小花棘豆总黄酮体内抗氧化作用的研究

试验以小花棘豆为研究对象,测定其总黄酮提取物在体内的抗氧化活性。采用超声波协助提取法提取小花棘豆中总黄酮,并使用肝脏损伤小鼠模型(四氯化碳造模)测定小花棘豆总黄酮提取物在体内的抗氧化活性。结果表明,小花棘豆总黄酮可以显著提高小鼠血清和肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,并降低丙二醛(MDA)含量和脑组织中脂褐素(LP)含量。因此,小花棘豆总黄酮具有一定的体内抗氧化活性,有一定的利用前景。     

小花棘豆添加量对卡拉库尔羊利用青贮饲料的影响

试验选用9只健康的雄性卡拉库尔公羊为试验动物,采用全收粪消化试验方法,研究不同的小花棘豆添加量下卡拉库尔羊对青贮饲料的利用率。试验结果表明,小花棘豆添加量在400 g/d和800 g/d时,卡拉库尔羊干物质、粗蛋白、粗脂肪和矿物质采食量均有所提高,NDF和ADF采食量降低;卡拉库尔羊干物质、粗蛋白、粗脂肪、矿物质和ADF的消化率均显著增高,NDF消化率变化不显著。通过对试验羊AMA、AKP、BUN、GOT、GPT、LDH活性的监测,400 g/d和800 g/d的小花棘豆添加量对卡拉库尔羊的健康无明显影响。     

小鼠日粮中添加小花棘豆黄酮的安全性试验

试验旨在研究小鼠日粮中添加不同剂量的小花棘豆黄酮在其饲喂过程中的安全性。选用48只6~8周龄、体重为(20±2)g的小鼠,随机分为4组,每组12只,雌、雄各半。对照组饲喂全混合日粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在全混合日粮中分别添加10、30、50 mg/kg小花棘豆黄酮,试验期为30 d。结果表明,小鼠采食小花棘豆黄酮后未见异常临床症状;小鼠血液学指标、血清生化指标和脏器系数均在正常范围内。提示,小鼠日粮中添加小花棘豆黄酮未发现亚慢性毒性,可以被安全利用。     

小花棘豆主要有毒成分黄花碱对氧自由基的影响

为了探讨小花棘豆中黄花碱的中毒机理及其对小鼠体内氧自由基代谢的影响,采用紫外可见分光光度法分别测定了对照组和黄花碱组小白鼠血浆、肝脏和脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX)的活性、脂质过氧化终末代谢产物丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量。结果表明,黄花碱组小白鼠血浆、肝脏和脑组织中SOD活性都显著低于对照组(P<0.05),血浆和脑中GSHPX活性极显著低于对照组(P<0.01),肝中显著低于对照组(P<0.05),黄花碱组MDA含量极显著增加(P<0.01)。黄花碱能诱发机体内氧自由基的产生,显著降低机体主要器官和组织中某些抗氧化酶的活性和提高MDA的含量,发生脂质过氧化反应而损伤机体主要组织器官,细胞发生空泡变性,可能是黄花碱引起中毒的原因之一。     

山羊小花棘豆中毒的病理学研究

对试验性小花棘豆中毒山羊的病理变化作了动态观察和分析,结果表明:山羊小花棘豆中毒是一个渐进发展的慢性过程。肝脏首先受损伤,尔后对神经系统产生广泛的损害,最后损伤性变化可波及全身各器官;主要引起上述器官实质细胞水泡变性,受损细胞线粒体肿胀和粗面内质网脱粒、肿胀和崩解;外周血液白细胞数量改变和淋巴细胞空泡变性。     

小花棘豆对小白鼠的毒性试验

将60只昆明系小白鼠随机分为5个剂量的小花棘豆试验组(A、B、C、D、E组小花棘豆剂量分别为日粮的60%、40%、20%、10%、5%)和1个对照组(F组),进行为期60d的小花棘豆毒性试验。结果表明,在小白鼠日粮中添加20%小花棘豆,在60d试验期内未出现小白鼠死亡;添加40%小花棘豆,第57天出现死亡;添加60%小花棘豆,第45天出现死亡。随着小花棘豆在日粮中含量的增加,小白鼠的增重幅度明显减慢,其中A、B、C组小白鼠的试验终体重与对照组差异极显著(P<0.01),D组与对照组差异显著(P<0.05),E组与对照组无显著性差异。各剂量组小白鼠与对照组小白鼠相比,心脏、脾脏、脑和肺脏的脏器系数变化不大;肝脏系数和肾脏系数随着小花棘豆剂量的增加而增大,日粮中小花棘豆含量越高,小白鼠肝、肾肿大越严重,A、B、C组与对照组相比较差异极显著(P<0.01),表明日粮中小花棘豆剂量达到20%时,就会对肝、肾脏造成损伤。