甘薯中咖啡酰奎尼酸类化合物的HPLC法比较分析（英文）

[目的]运用HPLC法比较分析11种甘薯不同部位绿原酸含量,为甘薯尤其是地上部分茎叶的开发利用提供参考。[方法]样品通过质量为200倍的甲醇超声提取20 min,乙腈-0.2%磷酸为流动相,梯度洗脱,对绿原酸、4,5-O-咖啡酰基奎尼酸、3,5-O-咖啡酰基奎尼酸、3,4-O-咖啡酰基奎尼酸形成良好分离,加标回收率分别为:94.74%、102.63%、100.01%和101.05%。[结果]不同甘薯品种间及同一品种不同部位间咖啡酰奎尼酸类化合物含量显著差异;地上部分以双咖啡酰奎尼酸含量为主,块薯中以绿原酸含量最高;各组织部位咖啡酰奎尼酸类化合物总量分别为:茎尖9.77~40.86mg/g,成熟叶2.68~13.97 mg/g,茎干0.56~7.90mg/g,块薯0.69~4.33 mg/g。[结论 ]甘薯茎尖和叶片可以作为绿原酸提取材料加于开发利用,其中紫甘薯系列优于非紫甘薯系列,试验中两个11ZY紫薯材料表现尤为突出。     

甘薯中咖啡酰奎尼酸类化合物的HPLC法比较分析

[目的]运用HPLC法比较分析11种甘薯不同部位绿原酸含量,为甘薯尤其是地上部分茎叶的开发利用提供参考。[方法]样品通过质量为200倍的甲醇超声提取20 min,乙腈-0.2%磷酸为流动相,梯度洗脱,对绿原酸、4,5-O-咖啡酰基奎尼酸、3,5-O-咖啡酰基奎尼酸、3,4-O-咖啡酰基奎尼酸形成良好分离,加标回收率分别为：94.74%、102.63%、100.01%和101.05%。[结果]不同甘薯品种间及同一品种不同部位间咖啡酰奎尼酸类化合物含量显著差异;地上部分以双咖啡酰奎尼酸含量为主,块薯中以绿原酸含量最高;各组织部位咖啡酰奎尼酸类化合物总量分别为：茎尖9.77～40.86 mg/g,成熟叶2.68～13.97 mg/g,茎干0.56～7.90 mg/g,块薯0.69～4.33 mg/g。[结论]甘薯茎尖和叶片可以作为绿原酸提取材料加于开发利用,其中紫甘薯系列优于非紫甘薯系列,试验中两个11ZY紫薯材料表现尤为突出。     

菊芋叶中多酚类成分的提取分离及结构鉴定

采用不同极性溶剂提取了菊芋叶中的多酚类成分,经正、反相色谱结合的方法分离纯化了这些成分,并根据UV、MS和NMR数据鉴定了它们的化学结构。从菊芋叶中分离并鉴定的7个多酚化合物分别为咖啡酸(1)、3,5-二咖啡酰奎尼酸(2)、1,5-二咖啡酰奎尼酸(3)、4,5-二咖啡酰奎尼酸(4)、3,5-二咖啡酰奎尼酸甲酯(5)、5,8-diOH-6,7,4!-triOMe(pedunculin)(6)、5,8-diOH-6,7di MeO-2-(3,4-di MeOPh)-4-benzopyrone(7),其中化合物1~5为酚酸类化合物,化合物6~7为黄酮类化合物。仅通过~1H-NMR即可确定4个二咖啡酰奎尼酸化合物中2个咖啡酰基的取代位置。     

菊芋叶中多酚类成分的提取分离及结构鉴定

采用不同极性溶剂提取了菊芋叶中的多酚类成分,经正、反相色谱结合的方法分离纯化了这些成分,并根据UV、MS和NMR数据鉴定了它们的化学结构。从菊芋叶中分离并鉴定的7个多酚化合物分别为咖啡酸(1)、3,5-二咖啡酰奎尼酸(2)、1,5-二咖啡酰奎尼酸(3)、4,5-二咖啡酰奎尼酸(4)、3,5-二咖啡酰奎尼酸甲酯(5)、5,8-diOH-6,7,4!-triOMe(pedunculin)(6)、5,8-diOH-6,7di MeO-2-(3,4-di MeOPh)-4-benzopyrone(7),其中化合物1⁵为酚酸类化合物,化合物65为酚酸类化合物,化合物6⁷为黄酮类化合物。仅通过7为黄酮类化合物。仅通过¹H-NMR即可确定4个二咖啡酰奎尼酸化合物中2个咖啡酰基的取代位置。     

牛蒡子提取物中咖啡酰奎宁酸类化合物的分离与结构确证

采用乙酸乙酯萃取法从牛蒡子提取物中除去脂溶性成分,再取水相干燥物用制备型HPLC分离,共得到6个化合物,并通过理化性质与光谱方法进行了结构确证,分别为3,4-二羟基苯丙烯酸-4-氧-β-D-葡萄糖苷、3-O-咖啡酰奎宁酸、3,4-二羟基苯丙烯酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸和3,4-二咖啡酰奎宁酸.     

不同商品菊花的质量品质评价

按照2010版《中国药典》所规定的方法测定不同商品菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat)中绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸3个指标性成分的含量。结果表明,除2份储存较久的样品外,其余29份样品的绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量范围分别是0.20%~0.95%、0.11%~0.66%、0.66%~2.51%,27份样品的3个指标性成分含量均达到药典标准。不同商品菊花3个指标性成分存在较大差异,各地朵菊的质量明显好于饼菊,亳菊的3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量最高,福白菊3个成分的总体含量较高。     

HPLC法测定灯盏细辛中4种酚性成分的含量

建立了中药材灯盏细辛中1,3-二咖啡酰基奎宁酸、灯盏花乙素、3,4-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-二咖啡酰基奎宁酸的高效液相色谱含量测定方法.采用C18(250 mm×4mm,5μm)分析柱;流动相为乙腈-0.2％甲酸溶液(5:80)(A)、四氢呋喃(B);流速0.800 mL/min;柱温30℃;检测波长335 nm.结果表明,上述4种成分分别在0.02044～0.8176 μg(r =0.999 1)、0.020 34～0.813 67 μg(r =0.999 8)、0.020 08～0.803 2μg(r=0.999 8)、0.020 72～0.828 8 μg(r =0.999 0)范围内线性关系良好,加样回收率分别为97.71％(RSD=1.4％)、99.32％(RSD=1.2％)、98.43％(RSD =2.3％)、98.62％(RSD =2.7％).本法简便快捷,结果准确,重复性好.     

细毡毛忍冬叶绿原酸类化学成分研究

[目的]对细毡毛忍冬（Lonicera similis Hemsl.）叶进行化学成分研究,为其进一步利用,并为寻找新的活性物质提供指导。[方法]应用溶剂萃取及柱色谱方法进行化学成分分离、纯化,并利用各种光谱技术分析鉴定结构。[结果]从细毡毛忍冬叶中共分离得到6个绿原酸类化合物,分别为绿原酸（I）、绿原酸甲酯（II）、绿原酸乙酯（III）、5-caffeoyl-1,3-quinide（IV）、3,4-二咖啡酰基奎宁酸甲酯（Ⅴ）和3,5-二咖啡酰基奎宁酸甲酯（Ⅵ）。[结论]除绿原酸外所有化合物均为首次从该植物中分离得到。     

亳菊的加工方法研究

为研究阴干、不同烘干温度、微波杀青烘干和蒸汽杀青烘干4种加工工艺对亳菊中有效成分含量的影响,采用HPLC方法对上述不同加工处理的亳菊中有效成分绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量进行测定。结果表明,阴干亳菊中绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量最高,分别为0.58 %、0.08 %和2.64 %,用不同烘干温度加工的亳菊中木犀草苷含量均达不到药典规定,微波杀青烘干和蒸汽杀青烘干亳菊的3种有效成分含量均达不到药典规定。而阴干处理亳菊中3种有效成分含量最高,为亳菊适宜加工方法。     

5个药用菊花品种类型主要化学成分的动态累积

研究药用菊花红心13号、NJK-2、优单6号、似贡2号、大花6号等品种类型木犀草苷、绿原酸、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸、挥发油、多糖等成分在花期的动态积累过程,为药用菊花最佳采收期的确定提供依据。采用高效液相色谱法(HPLC)测定杭白菊5个品种类型花序6个开放程度的木犀草苷含量、绿原酸含量、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量,采用蒸馏法测定挥发油含量,采用分光光度法测定菊花多糖含量。结果表明,除似贡2号外,其余品种类型绿原酸、木犀草苷、3,5-O-双咖啡酰基奎宁、总黄酮的含量最大值均出现于80%开放,即药用菊花普遍采收时期;而似贡2号绿原酸、木犀草苷、3,5-O-双咖啡酰基奎宁、总黄酮的含量最大值出现于胎菊时期。5个品种类型绿原酸、木犀草苷、3,5-O-双咖啡酰基奎宁、总黄酮的含量最小值都出现在100%开放时;多糖和挥发油的含量则不同品种有较大差异,但总体呈现随着开放程度增加而逐步下降的趋势。     

昆仑雪菊活性成分的高效液相色谱测定方法改良 及不同品系成分的测定

采用改良的高效液相色谱方法,以贡菊为对照,测定了不同品系昆仑雪菊中绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及槲皮苷的含量。结果表明,较适宜的高效液相色谱条件为Alitima HP C18 5μm色谱柱(250mm×4.6 mm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1 m L·min-1,检测波长为350 nm,柱温40℃,进样量5μL。不同品系的昆仑雪菊与贡菊主要活性成分相似,但其含量差异显著。用该方法测得昆仑雪菊和贡菊中的绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及槲皮苷的含量均高于药典规定的含量标准,其中昆仑雪菊中绿原酸、木犀草苷和槲皮苷的含量显著高于供试贡菊。     

菊楂决明饮单煎和共煎对化学成分及抗氧化活性的影响

目的：考察菊楂决明饮中山楂、决明子（炒决明子）、菊花配伍单煎液与共煎液的化学成分及抗氧化活性差异。方法：采用紫外分光光度法测定总黄酮、总蒽醌的含量;采用酸碱滴定法测定总酸的含量;采用HPLC法测定山楂酸、大黄酚、橙黄决明素、绿原酸、木犀草苷、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸的含量。结果：山楂单煎液的总黄酮含量为 {1.63% }、总酸含量为5.44%、山楂酸含量为2.37%、对DPPH自由基的清除率为46.49%;决明子单煎液的总黄酮含量为0.54%、总蒽醌含量为0.27%、大黄酚含量为0.14%、橙黄决明素含量为 {0.52% }、对DPPH自由基的清除率为3.53%;炒决明子单煎液的总黄酮含量为0.52%、总蒽醌含量为0.29%、大黄酚含量为0.22%、橙黄决明素含量为0.56%、对DPPH自由基的清除率为25.07%;菊花单煎液的总黄酮含量为1.65%、绿原酸含量为 {0.99% }、木犀草苷含量为 {0.30% }、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量为2.65%、对DPPH自由基的清除率为45.89%;山楂、决明子、菊花共煎液总黄酮含量为2.62%、总酸含量为 {4.12% }、总蒽醌含量为0.25%、山楂酸含量为1.25%、大黄酚含量为0.16%、橙黄决明素含量为0.56%、绿原酸含量为 {3.01% }、木犀草苷含量为0.48%、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量为3.97%、对DPPH自由基的清除率为25.92%;山楂、炒决明子、菊花共煎液总黄酮含量为2.56%、总酸含量为 {3.94% }、总蒽醌含量为0.24%、山楂酸含量为0.43%、大黄酚含量为0.33%、橙黄决明素含量为1.00%、绿原酸含量为4.12%、木犀草苷含量为 {0.60% }、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量为4.74%、对DPPH自由基的清除率为44.51%。结论：山楂、决明子、菊花共煎后,与单煎液相比,总黄酮、大黄酚、橙黄决明素、绿原酸、木犀草苷、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量均升高;总酸、总蒽醌、山楂酸含量都有不同程度降低,对DPPH自由基清除率与单煎液相当。     

高效液相色谱法同时测定朝鲜蓟叶中绿原酸和洋蓟素含量

建立了同时测定朝鲜蓟叶中绿原酸(3-咖啡酰奎尼酸)和洋蓟素(1,5-二咖啡酰奎尼酸)的高效液相色谱方法。色谱条件为ECOSIL C18(4.6 mm×200 mm,5μm)色谱柱,0.2%磷酸水溶液和乙腈为流动相,梯度洗脱,流速1 mL/min,波长330 nm,柱温29℃。绿原酸和洋蓟素的色谱峰面积与进样浓度呈现良好的线性关系,平均加标回收率分别为100.20%、99.02%;平均RSD分别为1.31%、1.65%。该分析方法快速、准确、重现性好,可用于朝鲜蓟资源开发产品的质量分析。     

茶树中奎尼酸/莽草酸-羟肉桂酰基转移酶基因的克隆及功能研究

从茶树中分离到1个绿原酸生物合成相关基因,命名为Cs HCT。该基因编码1个430个氨基酸的多肽,推测分子质量约为48.6 ku。蛋白质序列比对表明,Cs HCT含有酰基转移酶的保守域HXXXD和DFGWG,与其他物种HCT的同源性在58%~82%。系统发育分析表明,Cs HCT与咖啡中的HCT同源性最高,连同其他植物HCT形成一个独立的组群。通过大肠杆菌异源表达,纯化获得了Cs HCT蛋白,并进行了催化活性研究。结果表明,重组的Cs HCT能有效催化奎尼酸和莽草酸与香豆酰辅酶A的转酰基反应,分别生成香豆酰奎尼酸和香豆酰莽草酸。Cs HCT不能催化奎尼酸和咖啡酰辅酶A生成绿原酸。     

鼠曲草提取物及组分对α–淀粉酶的抑制作用

采用分析型高效液相色谱仪对鼠曲草提取物进行分离、鉴定,并测定了鼠曲草提取物及其中3个组分对α–淀粉酶活性的影响。结果表明:从鼠曲草提取物中分离出7个组分,并鉴定出3个组分,分别为3,5–O–咖啡酰基奎宁酸,3,4–O–咖啡酰基奎宁酸,2′,4,4′–三羟基–6′–甲氧基–查尔酮–4′–O–β–D–葡萄糖;当α–淀粉酶质量浓度达到1.67 mg/m L时,鼠曲草提取物、3,5–O–咖啡酰基奎宁酸、3,4–O–咖啡酰基奎宁酸、2′,4,4′–三羟基–6′–甲氧基–查尔酮–4′–O–β–D–葡萄糖的抑制率分别为32.37%、84.53%、63.07%、71.22%,半抑制浓度IC50分别为2.71、0.90、1.28、1.16 mg/m L;对2′,4,4′–三羟基–6′–甲氧基–查尔酮–4′–O–β–D–葡萄糖进行动力学分析的结果显示,2′,4,4′–三羟基–6′–甲氧基–查尔酮–4′–O–β–D–葡萄糖为可逆非竞争性抑制类型。     

采收时间对6个栽培类型药菊产量品质的影响

对不同栽培类型不同采收时间药菊的主要有效成分和产量进行分析,可为药菊在河南的安全生产提供理论依据。结果表明:6个栽培类型药菊的绿原酸、木犀草苷、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸、总黄酮含量一般以第1茬花含量最高,以后逐渐降低;前3茬花的绿原酸、木犀草苷、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量均达到了中华人民共和国药典(2015版一部)规定的标准。杭菊等栽培类型引种后在主要有效成分、产量和生态适宜性方面表现出优势,适宜在河南种植。     

丛枝菌根真菌对菊花植株生长及化学成分的影响

为研究丛枝菌根真菌(AM)对菊花植株生长及化学成分的影响,采用大田对比试验,在收获期测定株高、地上部分鲜重和地下部分鲜重,用高效液相色谱法测定菊花药材中绿原酸、木犀草苷、3,5-○-二咖啡酰基奎宁酸的含量,分别比较浸染4种AM真菌后菊花植株生长和指标成分含量的变化.结果表明:绿原酸含量聚丛球囊霉(GA)组和根内球囊霉(GI)组均显著高于CK组(P＜0.05),木樨草苷含量CK组和GI组高于其他浸染组,3,5-○-二咖啡酰基奎宁酸含量仅GI组显著高于CK组(P＜0.05);浸染GA组地上鲜重显著低于对照组(CK)(P＜0.05),其他浸染组的株高、地上部分鲜重和地下部分鲜重与对照组均无显著差异.说明,菊花浸染AM真菌,GI真菌能显著提高菊花次生代谢产物绿原酸和3,5-○-二咖啡酰基奎宁酸含量,但对菊花植株的生长发育影响不大.     

滁菊中黄酮和酚酸的鉴定及其对卷烟感官质量的影响

[目的]研究滁菊提取物对卷烟感官质量的影响,探寻滁菊开发利用的新途径。[方法]采用LC-MS方法对滁菊中的黄酮和酚酸进行了分离鉴定,并对滁菊提取物对卷烟感官质量的影响进行了研究。[结果]滁菊中的黄酮类物质主要是芹黄素、木犀草素、香叶木素、槲皮素及它们的糖苷,酚酸类物质主要是绿原酸、咖啡酸和咖啡酰奎宁酸。总多酚中,酚酸含量超过60%。滁菊提取物在卷烟中添加量0.4～0.6 g/kg时可显著改善余味,降低刺激性,增加香气量,是较为理想的卷烟香味前体物。[结论]该研究为滁菊的开发利用提供了新平台。     

洋马菊花5个栽培类型间化学成分比较分析

目的:比较药用菊花不同栽培类型的内在质量,为生产用种的全理选择提供理论参考。方法:分别采用HPLC法测定绿原酸、木犀草苷和3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸的含量,分光光度法测定总黄酮的含量,水蒸馏法测定挥发油的含量。结果:洋马菊花5个栽培类型间主要化学成分存在显著性差异,呈现出花期越晚、化学成分含量越高的趋势。结论:洋马菊花生产用种应以中、晚熟栽培类型优先,传统栽培类型红心菊品质最佳,应为生产用种的首选。     

牛蒡叶活性成分快速提取及对木腐菌抑制效果

研究了牛蒡叶中抑制木腐菌活性成分的快速提取工艺及其提取物对木材腐朽菌的抑制性能。在以彩绒革盖菌为提取物抑菌效果指示菌的提取预实验以及以提取率为指标的单因素实验基础上,采用响应曲面法对牛蒡叶中活性成分进行优化提取,确定最优提取方式和对木材腐朽菌(彩绒革盖菌和密粘褶菌)的抑制能力,并通过Accela U-HPLC高速液相色谱系统分离和鉴定优化条件下提取物中的活性成分。结果表明:在预实验中,酸性水提取物的抑菌效果要优于其他方式;经过响应曲面四因素三水平优化后,在液料比30 mL/g、提取温度52 ℃、提取时间77 min和溶剂pH值2.0条件下,理论提取率达到45.81%,经验证此条件下的平均提取率为44.86%,与模型理论值差异为-2.08%;此条件下的提取物,比预实验中采用酸性水方式获得的提取物抑制白腐菌的效果提高了16.47%;在此条件下获取的提取物,经U-HPLC-MS分离并鉴定出12种具有抑菌活性的成分,分别为有机酸类(奎宁酸、原儿茶酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、二聚绿原酸、绿原酸、4, 5-二咖啡酰奎尼酸)、黄酮类(牛蒡酮-a)、苷类(芦丁、5′-Propanediolmatairesinoside)、萜类(β-桉叶醇)。经验证,响应曲面优化后得到的提取物对彩绒革盖菌和密粘褶菌均具有良好的广谱抑菌能力,其对两种菌的最低抑菌质量分数分别为1.88%和2.31%。