阿勒泰羊CFD基因的克隆及其在不同营养状态阿勒泰羊尾脂中的表达分析

[目的]获取阿勒泰羊CFD基因序列,研究CFD基因在阿勒泰羊不同组织中的表达情况,及其在不同营养状态阿勒泰羊尾脂中表达量的变化,为深入研究CFD基因对阿勒泰羊尾脂沉积的调控作用奠定基础,并最终用于低脂肪绵羊品种的培育.[方法]以阿勒泰羊尾脂cDNA为模板,进行CFD基因克隆及序列分析,采用RT-PCR技术研究CFD基因在阿勒泰羊不同组织中的表达情况,采用qRT-PCR技术分析CFD基因在不同营养状态阿勒泰羊尾脂中表达量的变化.[结果]克隆了阿勒泰羊CFD基因,CFD基因在阿勒泰羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肌肉、尾脂组织中均有表达,其中在尾脂组织中表达水平最高.CFD基因在阿勒泰羊正常饲喂阶段尾脂组织中的表达量极显著低于饥饿饲养阶段尾脂组织中的表达(P＜0.01).[结论]CFD基因主要是通过促进脂肪分解而对阿勒泰羊尾脂沉积进行调控.     

阿勒泰羊的染色体分析

应用外周血淋巴细胞培养及染色体制备技术对阿勒泰大尾羊染色体核型进行了研究,并测量了各染色体所相对长度和着丝点指数;并进行了G一分带分析,为准确配对和分组提供了依据;对四倍体和非整倍体的出现进行了讨论。     

阿勒泰羊羔羊MSTN/Smad信号通路基因在不同组织的表达研究

[目的]研究MSTN/Smad信号通路基因在阿勒泰羊2日龄羔羊不同组织中的表达程度的差异.掌握阿勒泰羊2日龄羔羊MSTN/Smad信号通路基因表达规律.[方法]采用荧光定量PCR技术(QRT-PCR)分析阿勒泰羊2日龄羔羊MSTN/Smad信号通路基因在不同组织中的表达量.[结果]背最长肌MSTN mRNA表量显著高于股三头肌、股二头肌、半腱肌和半膜肌(P＜0.05),各组织Smad2 mRNA表达量无显著差异(P＞0.05).Smad3 mRNA在股二头肌、半腱肌、背最长肌和脾中的表达量显著高于肺中的表达量(P＜0.05).Smad4 mRNA在心脏中的表达显著高于肺脏中的表达量(P＜0.05).TGFBR1 mRNA在心脏中的相对表达量为最高.TGFBR2 mRNA在心脏、脾脏、肾脏、肝脏中的表达量显著高于股二头肌肉中的表达量(P＜0.05).[结论]对阿勒泰羊2日龄羔羊MSTN/Smad信号通路基因在不同组织中的表达进行了初步的研究,这对今后阿勒泰羊MSTN基因表达规律及调控的研究具有重要意义.     

阿勒泰羊 BMP15基因的多态性

为寻找和筛选与羊繁殖力相关的遗传标记,采用 PCR-RFLP 和 PCR-SSCP 技术检测 BMP 15基因在阿勒泰羊中的单核苷酸多态性。结果表明：在检测的92个阿勒泰羊个体中,BMP 15基因在外显子1位点呈多态性,具有 AA、AB 和 BB 3种基因型。阿勒泰羊 AA 基因型频率为0．695,AB 基因型频率为0．120,BB 基因型频率为0．185。该段 DNA 序列存在3个碱基缺失,这个突变导致野生型（AA）氨基酸序列上相应的10号氨基酸残基亮氨酸缺失,变为突变基因型 BB,形成 B1突变体;在阿勒泰羊的 BMP 15基因中未检测到 B2和 B4突变。     

阿勒泰羊生理生化常值测定

阿勒泰羊是新疆优良的肉脂兼用羊,对其生理生化指标进行较为全面的测定在我国还是首次,它将对育种、兽医防治等均有较大的参考价值。     

阿勒泰羊肌肉组织的免疫组化分析

[目的]比较阿勒泰羊肌肉组织肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,My HC)I型肌纤维含量。[方法]收集8月龄阿勒泰羊、Texel羊和F1代肉羊肌肉组织,应用免疫组化方法分析阿勒泰羊My HC I型肌纤维含量,并与Texel和F1代肉羊进行了比较。[结果]阿勒泰羊My HC I型肌纤维含量与Texel肉羊、F1代肉羊差异显著(P0.05)。[结论]研究结果可为肉羊品种选育和肌肉品质鉴定提供理论依据。     

新疆吐鲁番黑羊与阿勒泰羊背最长肌肌纤维特性及部分肉品质指标的比较

选取5月龄新疆吐鲁番黑羊、阿勒泰羊各6只公羊,对吐鲁番黑羊及阿勒泰羊的背最长肌肌肉品质、肌纤维特性进行比较,并对肌纤维特性与肌肉品质的相关性进行了研究。通过制作背最长肌的冰冻组织切片,采用ATP酶染进行肌纤维的分型,利用CellSens Standard图像处理系统分析肌纤维类型,测定不同肌肉组织红白肌肌纤维数量和面积,利用SPSS17.0软件对吐鲁番黑羊及阿勒泰羊背最长肌肌纤维与部分肉品质进行分析。吐鲁番黑羊和阿勒泰羊Ⅰ型肌纤维数量和直径之间差异均极显著(P<0.01),Ⅱb型肌纤维直径之间差异显著(P<0.05)。两个品种Ⅰ型和Ⅱb型肌纤维横截面积之间差异均极显著(P<0.01)。阿勒泰羊和吐鲁番黑羊背最长肌剪切力、水分含量、肌内脂肪含量之间均差异显著(P<0.05)。吐鲁番黑羊背最长肌Ⅰ型肌纤维直径与水分含量呈显著负相关(P<0.05);Ⅱb型肌纤维横截面积与剪切力呈极显著负相关(P<0.01);Ⅰ型肌纤维横截面积与肌内脂肪含量呈显著负相关(P<0.05)。阿勒泰羊背最长肌Ⅱb型肌纤维直径与剪切力呈极显著正相关(P<0.01);Ⅱb型肌纤维横截面积与水分含量呈显著正相关(P<0.05)。阿勒泰羊各型肌纤维直径均大于吐鲁番黑羊肌纤维直径,阿勒泰羊肉剪切力大于吐鲁番黑羊;肌纤维直径与剪切力呈正相关,与肉质呈负相关。吐鲁番黑羊背最长肌中Ⅰ型肌纤维含量多,Ⅰ型肌纤维直径小,数量多,嫩度好。吐鲁番黑羊背最长肌部分肌肉品质优于阿勒泰羊的背最长肌。     

不同诱食剂对阿勒泰大尾羊麦草采食量的影响

分别选择果绿、草味剂、甜蜜素、柠檬酸和苹果酸调质的果味剂作为试验诱味剂.试验结果表明在第1期试验中甜味剂处理组、绿色剂处理组和对照组20 d每只羊平均采食麦草量分别为, 653.96±35.60、587.21±26.57和600±21.31 g/d.甜味剂组分别比绿色剂处理组和对照组分别提高66.75和53.96 g,差异显著(P＜0.05).在第2期试验中草香剂处理组、果味剂处理组和对照组20 d每只羊平均麦草采食量为612.20±35.23、593.08±29.78和602.64±24.90 g/d,差异不显著(P＞0.05).在第3期试验中甜味剂和绿色剂组合诱食剂的麦草采食量为664.98±14.85 g/d,对照组的麦草采食量为631.66±14.29 g/d,差异显著(P＜0.05).说明以甜蜜素作为甜味剂诱食剂可以增加阿勒泰大尾羊的麦草采食量.     

饲粮甘草茎叶水平对阿勒泰羊羊肉风味的影响

旨在研究饲粮甘草茎叶水平对育肥期阿勒泰羊羊肉肌酐酸、硫胺素、胆固醇、脂肪酸和氨基酸的影响,探讨育肥期阿勒泰羊饲粮中甘草茎叶的适宜添加水平。选取体质量为40 kg的6月龄健康阿勒泰羊60只,随机分为6组,每组10只羊。分别饲喂6种甘草茎叶添加水平不同的等能等氮试验饲粮(对照组Ⅰ组甘草茎叶添加水平为0.00%,试验组Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组甘草茎叶添加水平分别为10.01%、14.95%、20.41%、29.98%、60.11%)。试验期为60 d。结果表明:除了Ⅵ组羊肉背最长肌中硫胺素质量分数显著低于对照组(P0.05)外,其他各组与对照组差异不显著(P0.05)。虽然不同甘草茎叶添加水平对背最长肌中肌苷酸和胆固醇的质量分数影响不显著(P0.05),但Ⅳ组肌苷酸质量分数最高,比对照组提高了20.67%,而胆固醇质量分数最低,比对照组降低了45.33%。与对照组比较,Ⅲ组背最长肌中二十碳二烯酸的质量分数极显著降低(P0.01),二十一碳烯酸和二十二烷酸的质量分数显著降低(P0.05),其他各组差异均不显著(P0.05);从背最长肌中主要的饱和脂肪酸硬脂酸来看,Ⅳ组降低程度最大,降低了10.55%;从主要的不饱和脂肪酸油酸来看,Ⅲ组增加幅度最大,增加了5.54%;而从必需脂肪酸亚麻酸来看,仅有Ⅳ组有所增加;Ⅴ组的总饱和脂肪酸质量分数低于其他各组,而总不饱和脂肪酸质量分数高于其他各组。与对照组比较,Ⅵ组极显著降低了背最长肌中蛋氨酸质量分数(P0.01),Ⅲ组显著降低了背最长肌中酪氨酸质量分数(P0.05);而Ⅳ组背最长肌中丝氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、天冬氨酸和氨基酸总量均显著高于Ⅵ组(P0.05),但与对照组及其他甘草茎叶添加组间并无显著差异(P0.05),此外,Ⅳ组背最长肌中谷氨酸、天冬氨酸和丙氨酸的质量分数均高于其他各组。由此可见,Ⅳ组有利于改善羊肉背最长肌中肌苷酸、胆固醇、风味氨基酸和人体必需脂肪酸的质量分数;Ⅳ和Ⅴ组有助于提高羊肉背最长肌中不饱和脂肪酸和必需脂肪酸的质量分数;综合考虑,20.41%甘草茎叶添加水平最佳,29.98%甘草茎叶添加水平次之。     

FKBP38条件性基因敲除胚胎干细胞株的建立

[目的]通过电转的方法,建立FKBP38细胞株.[方法]对自制的MEF细胞进行MMC处理,从而得到Feeder细胞,并在Feeder细胞上培养ES细胞.[结果]通过电转的方法,将FKBP38载体转入ES细胞中,经G418,Ganc筛选克隆和PCR检测,得到FKBP38阳性克隆.[结论] FKBP38 CKO胚胎干细胞株构建完成.     

地方绵羊品种——阿勒泰羊

新疆阿勒泰地区位于中国西北边陲,北部为阿勒泰山脉南至准葛尔盆地,中段为前山丘地带和河谷。这里冬季节寒冷,最冷季节达-35~40℃,一年有近一半时间是冬季,由于自然条件恶劣,过去长期以来牲畜处于"夏肥、秋壮、冬瘦、春死"的恶性循环中,许多优良品种在这里无法生存,     

太行黑山羊FGF5基因CDs区的序列特征及其表达规律研究

【目的】克隆太行黑山羊成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因CDs区,并对其进行序列特征分析和实时荧光定量表达检测。【方法】于2009年的7～10月份采集太行黑山羊的皮肤组织样品,利用RT-PCR方法克隆FGF5基因CDs区序列,并分析其序列特征及在不同生长发育时期的表达情况。【结果】太行黑山羊FGF5基因CDs区全序列长度为813bp,编码270个氨基酸,其中包含一个FGF结构域(87～221位氨基酸);太行黑山羊FGF5基因CDs区核苷酸序列与牛、马、人、猩猩和小鼠的同源性分别为98%,92%,90%,90%和86%,其编码氨基酸序列与牛、马、人、猩猩和小鼠的同源性分别为98%,91%,91%,91%和91%;实时荧光定量分析结果表明,在检测的4个月份的皮肤组织中,FGF5基因在9月份表达量显著高于7、8、10月份(P0.05),而7、8、10月份之间表达量无显著差异(P0.05)。【结论】太行黑山羊的FGF5基因编码的氨基酸高度保守;太行黑山羊毛囊发育在7、8月份处于生长期,9月份由生长期向退行期过渡,10月份进入退行期。     

羊口疮病毒115基因的克隆及原核表达

【目的】获得羊口疮病毒（ORFV）115基因表达蛋白。【方法】利用Oligo 7软件设计并筛选出115基因特异性扩增引物,以ORFV FJ-ND株基因组为模板,通过PCR技术扩增获得其基因序列,再将115基因克隆至pGEX-6p-1上,重组质粒pGEX-6p-115,并对其进行测序鉴定,鉴定正确后转化RosettaganmiB(DE3)感受态细胞,通过优化IPTG浓度和诱导时间获得重组融合蛋白最佳表达条件,用SDS-PAGE对表达的目的蛋白进行分析。【结果】115基因全长450 bp,编码149个氨基酸;115基因可以在RosettaganmiB中表达,重组蛋白分子大小约42 kDa,主要以包涵体形式表达。【结论】成功克隆了ORFV 115基因,构建了pGEX-6P-115原核表达质粒,优化了重组蛋白表达条件并进行纯化,为进一步探索ORFV 115蛋白在感染宿主过程中的机制和作用奠定基础。     

MIF在不同直径猪卵泡的表达变化规律

为分析巨噬细胞迁移抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)在不同直径健康猪卵泡上的表达变化规律,将收集到的90个健康母猪卵巢,通过ELISA检测不同直径卵泡液中MIF质量浓度,通过实时荧光定量PCR和Western blot检测颗粒细胞中MIF基因mRNA和蛋白的表达水平,采用免疫荧光检测MIF在颗粒细胞中的分布情况。结果显示:1)中等直径卵泡(3～4mm)液中MIF的质量浓度(54.17±7.86ng/mL)显著高于大卵泡(6mm,32.29±1.47ng/mL)和小卵泡(1～2mm,38.89±0.98ng/mL)(P0.05);2)中等直径卵泡颗粒细胞中MIF基因mRNA和蛋白质表达量也显著高于大卵泡和小卵泡的表达量(P0.05);3)MIF也在不同直径卵泡颗粒细胞中的细胞核和细胞质表达,但多集中于细胞质中。综上,随着猪卵泡发育过程,MIF在中等直径卵泡中表达量最高。本研究为母猪卵泡发育和排卵提供新的线索。     

Ghrelin在绵羊黄体形成过程中的表达

黄体作为卵巢上主要功能单位之一,对维持哺乳动物正常生殖的作用至关重要,而Ghrelin在调节能量平衡等多种生物学功能的积极作用,促使我们探讨Ghrelin在绵羊有腔和成熟卵泡内壁层颗粒细胞形成黄体后的表达情况,结果表明发情期黄体细胞的免疫活性远强于其前身壁颗粒细胞,而且Ghrelin mRNA相对表达量也显著高于其前身壁颗粒细胞.Ghrelin免疫活性和mRNA水平的黄体形成前后的显著变化间接的表明这一新型分子对于黄体功能变化具有潜在调控作用.     

尼瓦拉野生稻FKBP基因家族的鉴定及功能分析

用HMMER软件,根据FKBP蛋白特征保守结构域初步鉴定了FKBP家族蛋白,再对初步鉴定的FKBP家族蛋白序列进行Pfam数据库保守结构域搜索,进一步甄别确定.据此得到尼瓦拉野生稻FKBP基因25个,转录本40个;亚洲栽培稻FKBP基因26个,转录本33个.根据尼瓦拉野生稻和亚洲栽培稻FKBP蛋白的系统进化关系和相关注...     

在夏季天然草场放牧加补饲对阿勒泰羊生产性能和血清生化指标的影响

试验研究日粮中添加沙棘提取物复合添加剂、寡糖+益生素复合添加剂对放牧的阿勒泰羊生产性能和血清生化指标的影响。选择体重35±2 kg的健康阿勒泰羊45只,分成3组,每组15只,对照组采用纯放牧饲养,试验组1在日粮中添加沙棘提取物复合添加剂0.18%,试验组2在日粮中添加寡糖+益生素复合添加剂0.18%。结果表明,与对照组相比,饲喂沙棘提取物复合添加剂、寡糖+益生素复合添加剂极显著提高阿勒泰羊日增重(P0.01);对阿勒泰羊体尺无显著影响(P0.05);对血清中尿素氮、甘油三酯、碱性磷酸酶和磷均有显著性影响(P0.05)。饲喂沙棘提取物复合添加剂0.18%可提高阿勒泰羊的生产性能及血清生化指标。     

新疆巴什拜羊ISG15基因的克隆表达及活性检测

克隆表达新疆巴什拜羊ISG15基因,并对其表达产物的活性进行检测。利用RT-PCR和RACE技术克隆了巴什拜羊ISG15基因的cDNA全长序列,将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K,经电击转化至GS115中并用甲醇进行诱导表达,用Ni2+螯合亲和层析法对表达的蛋白进行纯化,通过淋巴细胞转化试验来检测表达蛋白的活性。结果表明:克隆得到的巴什拜羊ISG15基因cDNA全长为646 bp,开放阅读框为474 bp,编码157个氨基酸。经酵母重组菌株GS115/pPIC9K-ISG15表达,SDS-PAGE结果显示表达的蛋白约为33 ku,表达的蛋白可用Ni2+螯合亲和层析方法纯化,淋巴细胞增殖试验结果显示,表达的ISG15蛋白能够显著地刺激淋巴细胞增殖(P<0.05),表明表达的蛋白具有生物学活性。     

猪PDCD5基因的克隆与真核表达

用RT-PCR方法从猪肝组织中扩增出猪PDCD5(programmed cell death 5)编码序列,TA克隆至pMD-19T载体中,软件分析猪PDCD5基因的核算序列和蛋白序列,进行染色体定位.构建真核表达载体,将PDCD5基因编码区序列插入绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-C1中.通过脂质体转染法将重组载体瞬转入猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVECs)进行瞬时表达.结果表明:该序列编码125个氨基酸,猪PDCD5基因定位于猪6号染色体,含有6个外显子,与人PDCD5基因高度同源.双酶切鉴定和测序表明:重组真核表达载体构建成功,荧光检测和Western blot检测显示PDCD5融合蛋白表达.研究结果为探讨猪PDCD5基因在细胞凋亡调控中的功能提供了基础数据.