香蕉雄花和组培苗假茎胚性愈伤组织诱导的初步研究

从外植体来源、生长调节剂种类及浓度等方面研究影响巴西蕉胚性愈伤组织诱导的因素。结果表明,以未成熟雄花为外植体,MS培养基＋1 mg/L 2,4-D＋1 mg/L IAA＋1 mg/L NAA较适宜胚性愈伤组织诱导,26℃暗培养条件下,未成熟雄花的胚性愈伤组织诱导率为3%～4%。在MS培养基＋0.7 mg/L 2,4-D＋4 mg/L 6-BA中,以不同品种假茎为外植体的脱分化愈伤组织诱导率最高可达75%,但只有巴西(青杆)和海南本地米蕉可以诱导出胚性愈伤组织,诱导率分别为0.1%和0.5%。     

金花茶松散型愈伤组织诱导与悬浮细胞系建立

采用组织培养及显微观察技术,以金花茶植株茎段、叶片、花药及离体培养的金花茶体细胞胚为试验材料,对松散型愈伤组织的获得及悬浮细胞系的建立进行了研究。结果表明:在黑暗条件下,以金花茶体细胞胚切块为外植体,在MS+KT 0.5 mg/L+NAA 8.0 mg/L+硝酸银5mg/L+蔗糖30 g/L培养基上诱导出愈伤组织后,将其转接到该诱导培养基上连续培养3个月,最后从培养物中挑选状态良好的松散型愈伤组织在分别含有肌醇与硝酸银的2种培养基上交替培养,可以获得金花茶松散型愈伤组织;方差分析表明:蔗糖添加量、肌醇添加量及硝酸银添加量均对金花茶悬浮培养液细胞密度有显著影响且后两者分别与光照条件存在相互作用;将松散型愈伤组织在分别添加100 mg/L肌醇与2.5 mg/L硝酸银的液体增殖培养基上交替培养,可以建立并保持金花茶悬浮细胞系。该研究结果可为金花茶大规模细胞培养提供科学依据。     

小麦成熟胚诱导胚性愈伤组织的影响因素

为加快小麦成熟胚在转基因研究中的利用,以陕麦159成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导,建立了一套有效的小麦愈伤组织诱导体系。研究表明,不同消毒处理、2,4-D浓度和接种方法对胚性愈伤出愈率的影响有极显著差异,不同浸种时间和培养基类型对胚性愈伤组织出愈率的影响无显著差异。采用次氯酸钠初次消毒20min,升汞二次消毒5min,消毒彻底,对种子损害较小;浸种时间18～20h易于成熟胚的剥取,且诱导的愈伤组织质量较好;MS培养基较1/2MS培养基诱导愈伤组织效果好,MS培养基2,4-D浓度为4mg.L-1时（30g蔗糖＋7g琼脂）胚性愈伤组织率最高,愈伤组织质量较好;完整胚诱导胚性愈伤组织率最高达84.17%,碎胚诱导胚性愈伤组织率最高达94.17%。     

紫罗兰愈伤组织诱导及植株再生的研究

以紫罗兰幼苗子叶、子叶柄、下胚轴作外植体接种MS附加不同激素的培养基诱导愈伤组织，并进一步诱导分化出芽及再生植株。子叶和下胚轴外植体在MS＋0.1mg/LNAA培养基上愈伤组织发生率达100％，下胚轴愈伤组织转移MS 0.1mg/L 6-BA培养基上易诱导分化出小苗，分化频率达67％，再生小苗在1／2MSA＋0.2mg/L IBA培养基上生根率达86％。     

鱼腥草愈伤组织的诱导技术

以鱼腥草茎秆和叶片为外植体,进行外植体消毒和愈伤组织诱导条件的研究。结果表明：外植体在0.1%升汞中浸泡10 min可达到良好的消毒效果,污染率低于2%;愈伤诱导所用的茎秆和叶片两种器官中,适宜的外植体是茎秆,其诱导率可达31.25%;愈伤诱导时,24 h暗培养比12 h黑暗与12 h光照交替培养诱导率高;在含2,4-D或6-BA的3种培养基中,仅在MS＋2.0 mg.L-16-BA＋6.0 g.L-1琼脂＋30 g.L-1蔗糖的诱导培养基中诱导出了愈伤组织,诱导率最高为28.57%。     

扎米叶的离体培养和快速繁殖

以扎米叶的小叶片切块为外植体进行离体培养和快速繁殖试验。结果表明，外植体在MS＋6－BA2.0mg/L NAA0.2mg/L培养基中能诱导出愈伤组织，诱导率达86.7%；愈伤组织在MS＋6－BA15mg/L NAA0.1mg/L培养基中，不定芽分化率达315％，继代50d平均繁殖系数4.2；无根小苗在1／2MS＋6－BA1.0mg/L NAA0.5-1.0mg/L培养基中，生根率均达100%。有根苗移栽到混有30％珍珠岩的椰糠中，成活率达97%以上。采用此法可在短时间内繁殖大量种苗。     

基本培养基及激素对野生一粒小麦幼胚培养的影响

为建立适于野生一粒小麦遗传转化的高效组培再生体系,以野生型一粒小麦幼胚为外植体,研究了MS、MSE3和N6三种基本培养基和激素对愈伤组织诱导、分化和成苗的影响。结果表明,愈伤诱导培养基以MES3为基本培养基并添加2.0mg·L~(-1) 2,4-D效果最佳,愈伤组织出愈率最高可达90.5%,胚性愈伤率为80.0%。愈伤组织分化过程在添加0.25mg·L~(-1) IAA的MS培养基中加入0.5mg·L~(-1) 6-BA分化效果最佳,分化率能达到50.7%,成苗率为26.5%。     

花生不同外植体芽诱导制约因素研究

以花生品种远杂9102成熟种胚发芽12d、4d的幼叶为外植体,对花生幼叶不定芽诱导制约因素进行了研究,结果表明,采用较高浓度的6-BA（8mg/L）、较低浓度的NAA（1mg/L）,不定芽诱导率可达70%以上。最佳诱导培养基为MS＋6-BA8mg/L＋NAA0.5mg/L＋AgNO32mg/L 最佳继代培养基为MS＋6-BA5mg/L＋NAA2mg/L＋AgNO32mg/L。同时试验发现种子预培养4d的幼叶不定芽诱导率较预培养12d的高 花生幼叶近叶柄基部切口处不定芽诱导率较高,是较理想的不定芽诱导部位。以远杂9102预培养2d的子叶作外植体,对愈伤组织诱导及分化进行试验,确定MS＋6-BA4.5mg/L＋2,4-D2.2mg/L为诱导愈伤的最佳培养基,愈伤组织诱导率达79.8%,最佳分化培养基为MS＋KT（0.15mg/L）。     

林下参叶片愈伤组织的诱导

为建立林下参组培快繁技术体系,本研究以林下参叶片为外植体探讨消毒方式、外源激素浓度和不同年生对愈伤组织诱导的影响。结果表明:采用75%酒精1min,2%NaClO 20 min的消毒方式消毒,外植体污染率低且愈伤组织诱导率高;林下参愈伤组织最佳诱导培养基为:MS+2,4-D 1.5 mg/L+BA 0.5 mg/L+水解乳蛋白1g/L;不同年生叶片的愈伤组织诱导率没有显著差异。本研究可为林下参资源的可持续利用奠定方法基础。     

假叶树组织培养植物激素应用筛选试验

采用假叶树的幼嫩茎段为外植体组织培养,对加入适合的植物激素作筛选试验,结果表明：MS＋ZT 2.0 mg·L^-1＋IBA 0.5 mg·L^-1培养基愈伤组织的诱导率最高;MS＋ZT 1.5 mg·L^-1＋IBA 0.2 mg·L^-1培养基分化不定芽效果最佳,并且在MS＋ZT 1.0 mg·L^-1-1.5 mg·L^-1＋IBA 0.2 mg·L^-1培养基上继代增殖培养增殖系数可达4-5倍;不定芽在1/2MS＋NAA 1.0＋1.5 g·L^-1活性炭的培养基上,生根率达100%;生根小苗移栽珍珠岩与泥炭土（1∶1）基质上,成活率达95%以上。     

水田七的组织培养和植株再生

用水田七成熟种子为材料进行无菌播种,得到无菌苗再用幼叶、叶柄为材料进行组织培养和植株再生。经试验得出各阶段适宜的培养基分别为：(1)诱导愈伤组织：MS＋2.0 mg/L TDZ;(2)诱导芽分化：MS＋1.5 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L NAA;(3)生根培养：1/2MS＋0.5 mg /L IBA＋0.1 mg/L NAA。     

农杆菌介导的小麦成熟胚转化的影响因素

为了研究农杆菌介导的小麦成熟胚转化的影响因素,以6个小麦品种成熟胚为外植体进行离体培养,以EHA105和LBA4404农杆菌为供体(含有pCAMBIA1305双元载体)材料,研究了诱导培养基、分化培养基、农杆菌菌株、愈伤组织诱导培养时间、农杆菌菌液浓度和侵染时间对小麦成熟胚愈伤组织诱导、分化、再生的影响。结果表明:(1)以小麦品种小偃22的成熟胚为材料,获得最佳的诱导培养基方案(MS+2mg.L-1 2,4-D+0.5mg.L-1 KT+500mg.L-1水解酪蛋白+150mg.L-1天门冬酰胺)和分化培养基方案(MS+2mg.L-1 ZT+0.5mg.L-1 KT);(2)6个小麦品种中,洛阳8176和张掖春小麦具有较强的再生能力,筛选培养后较多的愈伤组织分化出小绿点;(3)洛阳8716和张掖春小麦的成熟胚,经愈伤组织诱导培养6-7d,农杆菌侵染后愈伤组织再生能力强;(4)农杆菌侵染后愈伤组织的再生能力与农杆菌菌株的关系不明显,而与小麦品种基因型、侵染时间和菌液浓度有较明显的关系;(5)以小麦洛阳8716和张掖春小麦成熟胚愈伤组织为受体,黑暗条件下诱导培养6-7d,在24±1℃黑暗条件下共培养3d和500mg.L-1羧苄青霉素(Cb)除菌及10mg.L-1潮霉素筛选处理后,共得到分化植株23株,其中以洛阳8716为受体材料,由农杆菌LBA4404和EHA105转化得到的植株分别为11株和4株,植株分化率分别为3.57%和1.31%;以张掖春小麦为受体材料,由农杆菌LBA4404和EHA105转化得到的植株分别为5株和3株,植株分化率分别为1.57%和1.14%。     

印度萝芙木组织培养技术研究

以印度萝芙木枝条顶芽为外植体进行离体培养,外植体最佳灭菌方法为0.08%HgCl2处理时间20min 诱导愈伤组织培养基为MS＋L-半胱氨酸0.02mg·L-1＋6-BA2.0mg.L-1＋NAA0.2mg·L-1,诱导率可达100% 诱导不定芽培养基为MS＋L-半胱氨酸0.01mg·L-1＋6-BA1.0mg·L-1＋NAA0.1mg·L-1 生根培养基为1/2MS＋NAA1.0mg·L-1,生根率可达100%。     

非洲菊离体快繁条件的优化

以非洲菊无菌苗带节茎段为外植体,比较各种不同激素组合、浓度大小对非洲菊芽苗的诱导、增殖和生根的影响。结果表明,以0．8—1．2cm的非洲菊带节茎段为外植体,可以不通过愈伤组织途径,直接诱导出芽。非洲菊带节茎段诱导芽苗的最佳培养基为Ms＋6-BA3．0mg·L-1＋NAA0．1mg·L-1。较高浓度的6-BA有利于增殖系数的提高,但容易出现玻璃化现象,高浓度的NAA会使芽苗叶色退绿,故最适合的增殖培养基为Ms＋6-BA2．0mg·L-1 ＋NAA0．3mg·L-1。非洲菊芽苗生根的浓度范围较宽,最佳生根培养基为1／2MS＋NAA0．2mg·L-1。     

滁州白头翁组织培养及再生体系的建立

为建立白头翁再生体系,以白头翁主根的切段和试管苗叶片为外植体,比较2种外植体离体培养差异,探讨不同植物生长调节剂对不定芽和愈伤组织诱导、愈伤增殖和再分化及芽苗生根的影响。结果表明:叶片可以通过愈伤组织再分化和直接产生不定芽2种途径建立再生体系,而根只诱导出了愈伤组织,增殖培养中逐渐褐化死亡;在含6-BA培养基上,叶块死亡,而根只诱导出少量愈伤组织;叶片诱导不定芽的培养基为MS+TDZ 0.3 mg/L+NAA 0.1 mg/L;愈伤组织增殖的培养基为MS+TDZ 0.2 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L;再分化时,需要转接到TDZ和NAA组合的培养基上,其中处理组合TDZ 0.3 mg/L+NAA0.1 mg/L的再分化率达100%;生根培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg/L+IBA 0.2 mg/L+蔗糖20 g/L。不同外植体离体培养存在差异,叶片较根易培养;TDZ对白头翁叶片培养效果较好,2,4-D对愈伤组织的诱导能力较强,而NAA适合于不定芽分化,NAA与IBA组合使用生根效果较好。     

龙眼胚性悬浮细胞原生质体培养及其体胚发生再生植株

以“红核子”、“东壁”、“十二月龙眼”等龙眼品种的胚性悬浮细胞为起始材料分离原生质体,采用液体浅层培养、包埋悬浮培养等方式,进行原生质体培养与植株再生研究。研究结果表明,海藻酸钙包埋悬浮振荡培养(50r/min)是龙眼悬浮细胞原生质体培养的适宜培养方式,在含有多种生长调节剂的改良MS培养基(MP6)上,再生小克隆的形成频率可高达5%;采用龙眼胚性愈伤组织体胚诱导、成熟和萌发的优化方案,原生质体再生小克隆分化子叶形胚状体的频率达100%,萌发植株的频率一般大于45%。      

Improvement of Direct Somatic Embryogenesis in Rice by Selecting the Optimal Developmental Stage of Explant and Applying Desiccation Treatment

Summary

By selecting the optimal developmental stage of zygotic embryos used as expiants and applying desiccation treatment, we improved direct somatic embryogenesis in rice scutellum from two cultivars, Nipponbare and Sasanishiki. Zygotic embryos isolated 14-17, 21, 28-30 and 35-40 d after anthesis (DAA) from Nipponbare and 14-17, 18-21, 28-30 and 40-42 DAA from Sasanishiki were cultured on the embryo induction medium (EIM). Then they were transferred to embryo maturation medium (EMM) and germinated on the embryo germination medium (EGM). Only immature zygotic embryo isolated 14-17 DAA from Nipponbare and Sasanishiki could develop somatic embryos that germinated. Explants from embryos at other developmental stages could develop somatic embryos only until the elongating or scutellar stage. They enlarged and formed callus without further development. The EIM and EMM consisted of N6 macronutrients, B5 micronutrients, and B5 vitamins, supplemented with 0.1 g L^-1 casein hydrolysate, 1.5 g L^-1 proline and 1 g L^-1 MES buffer. EGM consisted of MS macro- and micronutrients and MS vitamins without organic supplement. In addition, 2 mg L^-1 2,4-D was added to EIM, 1 mg L^-1 2,4-D to EMM and 0.01 mg L^-1 zeatin to EGM. Developmental processes of somatic embryos derived from the expiants were observed by scanning electron microscopy. Desiccation treatment of maturing somatic embryo was proved to produce fully mature somatic embryos capable of germinating vigorously.     

愈伤组织再生马铃薯脱毒苗生产体系的建立

以马铃薯茎尖、茎段、全叶、半叶为外植体,进行愈伤组织的诱导、继代、根芽分化和植株再生的研究,建立马铃薯脱毒再生体系。结果表明:(1)马铃薯茎尖、茎段、半叶、全叶在MS+6-BA1.5 mg·L-1+NAA1 mg·L-1+3%蔗糖+0.6%琼脂培养基中,愈伤组织诱导率分别达到97.3%、75.6%、96.8%、97.4%;(2)在MS+6-BA1.5mg·L-(1或ZT2.0 mg·L-1)+NAA0.5 mg·L-1+GA3 5 mg·L-1+3%蔗糖+0.6%琼脂培养基中不同外植体芽诱导率在15.4%～67.7%,根的分化率21.3%～88.2%。