圣路易斯脑炎病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立快速检测圣路易斯脑炎病毒(St. Louis encephalitis virus,SLEV)的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。根据圣路易斯脑炎病毒非结构蛋白NS5基因保守序列,成功重构Taq Man探针与特异性引物,利用实时荧光定量(RT-PCR)技术对此脑炎病毒进行检测。运用重组质粒p UC57-NS5标准品完成标准曲线绘制,该标准品包括了选定检测序列,对应的相关系数则是0.9999,敏感性则为661 copies·mL~(-1)。本研究中,圣路易斯脑炎病毒Taq Man荧光定量RT-PCR方法与同种属的西尼罗病毒、登革热病毒、乙型脑炎病毒和黄热病毒无交叉反应。该方法可以为圣路易斯脑炎病毒的流行病学调查和传染病监测提供一种技术基础。     

西尼罗病毒病及其病原的研究进展

概述了西尼罗病毒病在国外的流行状况、危害及我国的研究现状,着重阐述了近年来在其基础病毒学、诊断技术、疫苗及防治方面的研究进展,为该病的深入研究提供了参考。     

4种重要外来病毒高通量液相芯片检测方法的建立

为建立小反刍兽疫病毒(PPRV)、西尼罗病毒(WNV)、裂谷热病毒(RVFV)和南非型口蹄疫病毒(SAT FMDV)的高通量液相芯片检测方法,根据GenBank上公布的PPRV的N蛋白基因序列、WNV的E蛋白基因序列、RVFV的S片段基因序列和FMDV的5′UTR区基因序列,并基于各基因保守区设计相应的引物和探针.通过对多重PCR的上游、下游引物比例、杂交温度、杂交时间进行条件优化,并验证检测方法的特异性和敏感性.敏感性试验显示,该方法对于PPRV、WNV、RVFV以及FMDV 4种病毒最低检出量分别为5.78×103、2.15×103、2.98×105、9.54×104 copies/μL.本研究建立的高通量液相芯片检测方法能够同时快速地检测4种外来病病毒,具有良好的特异性、敏感性和稳定性,对于流行病学调查和防范外来动物疫病具有重要的意义.     

锦鲤疱疹病毒病分析

锦鲤疱疹病毒是近年来在锦鲤和鲤鱼养殖生产中发现的一种新型病毒,该病毒流行于世界各地,严重危害锦鲤和鲤鱼养殖业。基于此,简要介绍锦鲤疱疹病毒病、流行状况及如何分离培养该病毒,最后对疫苗研究做展望。     

西尼罗热液相芯片快速检测方法的初步建立

用DNAStar软件对GenBank中西尼罗热病毒(WNV)的E基因进行序列分析,设计WNV特异性探针并标记生物素,与荧光编码微球偶联后与病毒E基因的PCR产物杂交反应,用液相芯片检测仪(Liquichip 200)检测荧光信号建立WNV快速液相芯片检测方法。结果表明:该法具有较好的特异性,不与其他虫媒病病毒反应;检测灵敏度达到100个拷贝。说明初步建立了检测WNV的液相芯片技术,这为进一步搭建WNV全新快速高通量检测平台奠定基础,也为其他同类病毒的快速高通量检测提供借鉴和经验。     

香料烟粉虱传双生病毒的分子检测

发生在保山香料烟生产区粉虱传双生病毒病,已严重影响到了香料烟的品质和产量。本研究利用PCR技术快速检测香料烟植株及田间其它植物如胜红蓟、赛葵及菜豆等、以及病毒介体的带毒情况。对部分样品的PCR检测及序列分析表明,感染香料烟双生病毒有中国番茄黄曲叶病毒、番茄黄曲叶病毒、云南烟草曲茎病毒、烟草曲茎病毒以及云南烟草曲叶病毒等,且一些样品存在复合侵染现象。本研究为掌握病害发生流行的基本规律,监控病害在香料烟上的发生流行提供了依据。     

A型流感病毒研究进展

从A型流感病毒宿主范围、病毒结构、病毒蛋白种类及功能、流感大流行、禽流感病毒跨种传播等方面综述了目前A型流感病毒研究的最新进展,旨在为今后A型流感病毒的研究提供借鉴和参考。     

一株鸭坦布苏病毒的分离鉴定及全基因组序列分析

2010年我国爆发了使蛋鸭产蛋量急剧下降、由一种鸭黄病毒引起的疾病,通过对来自山东某发病鸭场的病料进行分离,得到实验室分离株Du/CH/LSD/110128。对其进行全基因组序列测定分析,确定该株病毒全基因组含有一个开放阅读框,编码一个由3 426个氨基酸组成的多聚蛋白。将试验测得株Du/CH/LSD/110128株与黄热病毒(Yellow fever virus)、登革热病毒(Dengue virus)、伊利乌斯脑炎病毒(Ilheus virus)、西尼罗病毒(West Nilevirus)、巴格扎病毒(Bagaza virus)和其他一些已公布序列的坦布苏病毒进行核酸同源性比较和遗传进化树分析,发现Du/CH/LSD/110128株与巴格扎病毒亲缘关系较近但介于病毒种的水平上,与其他株坦布苏病毒核酸同源性在87%以上,可以确定Du/CH/LSD/110128株属于新型鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus)。     

蜜蜂病毒研究取得新进展

<正>最近,中国农科院蜜蜂研究所在蜜蜂病毒研究方面取得了新突破。针对近年来全国大范围出现的蜜蜂死亡及爬蜂现象,创新团队系统全面的调查了我国蜜蜂的病毒流行与分布特点,明确了我国蜜蜂群中主要流行的病毒及其动力学变化。首次在我国蜂群中鉴定了蜜蜂丝状病毒,该病毒在我国蜂群中具有较高的感染率。研究结果对揭示蜜蜂病毒的隐性感染机制具有重要的现实意义。     

6种虫媒病毒PCR-Mass检测方法的建立

建立了一种可快速、同时检测流行性乙型脑炎病毒(JEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)、西尼罗病毒(WNV)、森林脑炎病毒(TBEV)和圣路易脑炎病毒(StLEV)等6种虫媒病毒的PCR-Mass检测方法.根据GenBank登录的上述6种病毒的序列信息,经过分析比对,设计6组扩增引物和延伸探针,初步建立针对上述6种病毒的PCR-Mass检测体系.采用上述6种虫媒病毒和其他常见致病性病毒为检测对象,确定PCR-Mass体系的特异性；通过对重组质粒的定量检测,确定该体系的检测灵敏度;并利用该体系对12份TBE阳性和10份JEV阳性脑脊液样本进行检测,评价检测方法的实用性和临床应用价值.结果表明:PCR-Mass检测方法可同时检测上述6种虫媒病毒,而对其他病毒检测均为阴性,无交叉反应现象；6种虫媒病毒的最低检出浓度均为102copies·mL-1；对22份阳性样本的检测结果均呈阳性.本研究建立的PCR-Mass检测方法可实现对6种虫媒病毒的快速、同时检测,具有良好的特异性和较高的灵敏度.     

Emerging vectors in the Culex pipiens complex

In the Old World, some mosquitoes in the Culex pipiens complex are excellent enzootic vectors of West Nile virus, circulating the virus among birds, whereas others bite mainly humans and other mammals. Here we show that, in northern Europe, such forms differing in behavior and physiology have unique microsatellite fingerprints with no evidence of gene flow between them, as would be expected from distinct species. In the United States, however, hybrids between these forms are ubiquitous. Such hybrids between human-biters and bird-biters may be the bridge vectors contributing to the unprecedented severity and range of the West Nile virus epidemic in North America.     

Infectious disease. West Nile drugs, vaccine still years away

With support from the National Institutes of Health (NIH), several research groups are taking the first steps toward developing drugs to fight the acute phase of West Nile virus infection. NIH is also supporting the fast-track development of a vaccine. But because it doesn't make sense to vaccinate the entire population for such a rare disease, it is unclear how large the market for a vaccine will be.     

斑点叉尾鮰病毒疫苗的研制

为了控制斑点叉尾鮰病毒性出血病造成大规模死亡,用离心干燥法研制出斑点叉尾鮰病毒疫苗,通过试验检测,可使斑点叉尾鮰的成活率稳定在80%以上,从而提高斑点叉尾鮰养殖业的经济效益.     

间接免疫荧光检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒及抗原定位方法的初步建立

 【目的】建立间接免疫荧光（IFA）检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒（DSHDV）的方法,为DSHDV感染的实验室诊断、DSHDV在感染鸭组织细胞中的亚细胞定位和动态研究提供有效的检测手段。【方法】用差速离心纯化DSHDV,将纯化DSHDV免疫家兔制备兔抗DSHDV高免血清,并以DEAE-SephadexA-50柱层析纯化出兔抗DSHDV IgG,建立IFA检测石蜡切片中DSHDV的方法;利用建立的IFA对28日龄鸭人工感染DSHDV死亡鸭不同组织器官以及临床样品进行检测。应用PAGE电泳分析DSHDV基因组特性。【结果】IFA最佳条件为：切片在0.01 mol•L-1 柠檬酸（pH 6.0）缓冲液微波修复20 min后,以10%马血清37℃下封闭30 min,然后加入1﹕50的一抗4℃孵育过夜,最后加入1﹕100 FITC标记的含0.01%伊文斯蓝的二抗37℃孵育30 min。IFA检测DSHDV感染死亡鸭肝脏石蜡切片为阳性,而检测鸭瘟、禽流感病毒(H5N1)、鸭病毒性肝炎、鸭疫里默氏杆菌感染死亡鸭肝脏石蜡切片为阴性。IFA检测28日龄人工感染DSHDV死亡鸭的不同组织器官,心、肝、脾、胰、肺、肾、法氏囊、食管、气管、胸肌、胸腺、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠为阳性;哈德氏腺、脑、皮肤、腺胃为阴性。阳性组织中病毒抗原主要分布在细胞浆。经甲醛固定保持1～6年的临床死亡鸭的病毒分离阳性肝脏,IFA检测结果也呈阳性。DSHDV具有呼肠孤病毒特征,有10条分节段核酸,呈“334”分布。【结论】建立的检测石蜡组织切片中DSHDV抗原的IFA具有直观、特异性强的优点,应用于DSHDV在感染鸭组织细胞中的亚细胞定位具有良好效果,可用于DSHDV感染的实验室诊断、病原在鸭组织细胞中分布研究。DSHDV抗原存在感染细胞浆,肠道、肾脏、法氏囊和胸腺是DSHDV侵害的主要靶器官。     

Influenza virus effects on cell membrane proteins

During infection by influenza virus, viral proteins become firmly attached to (or part of) host cell plasma membrane, nuclear membranes, mitochondrial, and microsomal membranes. Purified virus particles contain less than I percent host cell protein. Virus envelope proteins completely replace host membrane proteins in those discrete spots on the plasma membrane from which progeny virions bud out.     

New human T-lymphotropic retrovirus related to simian T-lymphotropic virus type III (STLV-IIIAGM)

This report describes serologic evidence for a virus similar to that known as simian T-lymphotropic virus type III of African Green monkeys (STLV-IIIAGM) infecting apparently healthy people in Senegal, West Africa, and the isolation of virus from these individuals. Serum samples from selected healthy West African people showed unusual serologic profiles when tested with antigens of HTLV-III/LAV, the etiologic agent of AIDS, and of STLV-IIIAGM. The samples reacted strongly with all of the major viral antigens of STLV-IIIAGM but showed variable or no reactivity with the major viral antigens of HTLV-III/LAV by radioimmunoprecipitation and sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. A new human T-lymphotropic virus (HTLV-IV) isolated from these people was grown in vitro and shown to have retroviral type particles, growth characteristics, and major viral proteins similar to those of the STLV-III and HTLV-III/LAV group of retroviruses. The gp120/160, gp32, p64, p55, p53, p24, and p15 proteins precipitated were the same size as and reactive with STLV-IIIAGM proteins. The serologic data suggest that this virus shares more common epitopes with STLV-IIIAGM than with the prototype HTLV-III/LAV that infects people in the United States and Europe. Further study of this virus and of the origin of the HTLV-III/LAV group of viruses may expand our understanding of the human AIDS virus.